的最低值，但是总体上趋于上升的趋势。这现象试验者有如下解释第，虽然卵黄抗体的浓度变化不大，但是卵黄抗体的体积却发生了很大的变化，在日龄以后变化较明显，而在日龄以后卵黄抗体的体积为，据此，虽然卵黄抗体的含量无明显变化，但是，由于体积的改变，卵黄抗体总量上也在被动的向鹅胚血清转移第二，试验者认为卵黄抗体在整个孵化过程中，除了被动转移给鹅胚血清外，还有其他功能，如提供能量提供形成组织的原料等，因此，鹅胚血清中的抗体在总量上也少于卵黄中的抗体总量，也成了血清中抗体浓度小于卵黄中抗体浓度的可能原因之。结论鹅血清中和鹅卵黄中含量鹅胚血清中抗体从日龄升高到日龄出壳天，差异显著鹅卵黄中抗体从日龄到日龄出壳后降至,差异显著。目前在国内尚未见到有关测定鹅含量的相关报道。鹅血清中和鹅卵黄中含量变化趋势从日龄和日龄出壳天检测结果可知鹅胚血清中抗体含量总体呈现上升的趋势而鹅卵黄抗体含量总体呈现下降的趋势但是血清中抗体含量浓度的最高值也未超过卵黄抗体浓度的最低值,可见，卵黄中抗体浓度远高于血清中抗体浓度。参考文献陈雪岚,许杨,熊勇华中国大耳白兔与罗曼母鸡对赭曲霉素抗原免疫应答性的研究卫生研究,,,,孙建宏,刘宝全鸡免疫球蛋白检测技术的发展黑龙江畜牧,,廖明,丘鹤英家禽免疫学基础知识中国兽医杂志李决,朱宽佑,包文奇，等抗鸡新城疫病毒高免卵黄的研制与应用郑州牧专报杨玉荣,郑世民卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定食品科技,,社念兴兽医免疫学北京中国农业出版社何昭阳,胡贵学,王春凤动物免疫学实验技术吉林科学技术出版社顾有方,刘艳慧,陈会良等免疫球蛋白分离提取方法及其应用的研究进展畜牧兽医科技信息,,,俞用川，李伊东，张勇力双抗体夹心改良法检测小鼠抗天花粉特异性中国医学科学院学报致谢本论文是在导师郎仲武副教授和徐青元研究生的悉心指导下完成的。导师渊博的专业知识，严谨的治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，严以律己宽以待人的崇高风范，朴实无华平易近人的人格魅力对我影响深远。不仅使我树立了远大的学术目标掌握了基本的研究方法，物与为人处世的道理。本论文从选题到完成，使我明白了许多待人接步都是在导师的指导下完成的，倾注了导师大量的心血。在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢,侧收集蛋白值大于的洗脱液至第二峰右侧值大于的洗脱液。然后将此收集液浓缩，并计算蛋白含量，。用分光光度计测得和值并按下式计算蛋白浓度，蛋白浓度稀释倍数。计算鹅蛋白蛋白含量为。双抗体夹心检测方法的建立被检鹅血清参考阳性与鹅卵黄参考阴性的最佳稀释倍数的确定纯化鹅管号蛋白含量蛋白含量表被检血清的最佳稀释倍数的确定孔号稀释倍数血清平均值血清参考阴性平均值由以上表可知，将血清倍稀释时，其值最接近，参考阴性为，符合，因此，在检测时将血清倍稀释。被检鹅卵黄参考阳性与鹅卵黄参考阴性的最佳稀释倍数的确定表被检卵黄的最佳稀释倍数的确定孔号稀释倍数卵黄平均值卵黄参考阴性平均值由以上表可知，将卵黄进行倍稀释时，其值最接近，参考阴性为，符合，因此，在检测时将卵黄倍稀释。最适底物作用时间的确定表最适底物作用时间孔号处理方法平均值底物反应时间分别为，进行测定后，试验结果表明，当底物的作用时间时，初乳的值为。因此将底物作用时间确定为。敏感性试验结果在血清中，当已知含量的鹅稀释至时，值不再有变化。表血清敏感性试验结果含量平均值在血清中，当已知含量的鹅稀释至时，值不再有变化，即该检测方法检测的灵敏度为。值蛋白含量系列乘幂系列图双抗体夹心值与含量鹅血清中含量与鹅卵黄中含量变化的比较表天和天鹅胚血清中含量与鹅卵黄含量的比较有日龄卵黄含量血清含量图鹅血清中含量与鹅卵黄中含量变化的比较天天含量卵黄含量血清含量由图可见，鹅胚血清中抗体从日龄升高到日龄出壳天，差异显著鹅卵黄中抗体从日龄到日龄出壳后降至,差异显著。整个阶段鹅血清中抗体含量总体呈现上升的趋势而鹅卵黄抗体含量总体呈现下降的趋势但是血清中抗体含量浓度的最高值也未超过卵黄抗体浓度的最低值,卵黄中抗体浓度远高于血清中抗体浓度。讨论双抗体夹心法近二十几年来，免疫学分析方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继年代的免疫荧光和年代的放射免疫分析技术之后，年和发表了酶联免疫吸附剂测定，用于定量测定的文章，使得年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法，建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的种免疫酶技术，是种用酶标记抗原或抗体的方法。由于酶的高效生物催化作用，个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来。试验是种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测体液中微量的特异性抗体或抗原。此项技术自年代初问世以来，发展十分迅速，由于其试剂稳定易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许表卵黄敏感性试验结果含量平均值在卵黄中，当已知含量的卵黄稀释至时，值不再有变化，即该方法的灵敏性为。重复性试验结果取参照进行检测，次不同时间的结果基本致，说明本研究建立的双抗体夹心方法具有相对较好的稳定性和重复性。包被特异性试验结果将正常小鼠血清倍稀释，免疫过鹅的小鼠血清按倍稀释，进行比较，结果表明正常小鼠血清与免疫的小鼠血清值差异显著。表包被抗体特异性实验结果孔号小鼠血清免疫鹅的小鼠血清稀释倍数平均值蛋白标准含量曲线检测结果双抗体夹心值与卵黄含量的标准曲线双抗体夹心值与卵黄含量通过做图看出它们之间成幂函数关系，故求得回归方程为表双抗体夹心值与鹅卵黄含量值鹅卵黄含量标准曲线值蛋白含量系列对数系列图双抗体夹心值与鹅卵黄含量双抗体夹心值与血清含量的标准曲线双抗体夹心值与血清含量通过做图看出它们之间成幂函数关系，故求得回归方程为表双抗体夹心值与血清含量值血清含量标准曲线板。实验方法鹅血清的提取取健康吉林白鹅的混合血清，加生理盐水，再逐滴加入饱和溶液，使成为溶液，充分混合后，静置离心，弃沉淀在上清液中再加饱和溶液，使成溶液，充分混合，静置离心，弃去上清于沉淀中加入生理盐水，使之溶解，再加饱和溶液，使成溶液，充分混合后，静置离心，弃去上清，以除去白蛋白，重复次用生理盐水溶解沉淀，装入透析袋透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于透析，中间换液数次，直至完全除去或离心去沉淀离心去沉淀去除杂质蛋白上清液即为粗提的将凝胶活化浮选装柱，以∕液洗脱平衡。并向其中加入上步中所提取的粗提的样本，以液洗脱，收集第二蛋白洗脱峰，浓缩即为精提。鹅血清及卵黄参考阴性与参考阳性的选择及制备鹅血清参考阴性的制备取吉林白鹅血清份充分混合份，取此混合液，加生理盐水，充分混合，逐滴加入饱和硫酸铵，边加边搅拌，混合均匀后静置分钟，然后转分钟离心分钟，弃去沉淀，上清装入透析袋，常水流水透析小时，然后生理盐水透析小时，其间换液数次。最后将提取液浓缩至原体积，重复次。分装冻存于冰箱。鹅血清参考阳性的制备取吉林白鹅血清分，混合该血清取自制备参考阴性血清的吉林白鹅，分装冻存于冰箱。鹅卵黄参考阴性的制备无菌取卵黄份，充分混合，取此混合液，蒸馏水倍稀释，用稀酸调节至，转分钟离心。蒸馏水稀释沉淀至卵黄原体积，将卵黄生理盐水氯仿按混合，混匀后置室温，克离心力离心，分成三相，油相水相固相，弃去水相，然后将油相与固相充分混合，室温下挥发掉氯仿，蒸馏水稀释至原体积。蒸馏水稀释倍，分装冻存与冰箱中。鹅卵黄参考阳性的制备无菌取卵黄份，充分混合，蒸馏水倍稀释该卵黄取自制备参考阴性卵黄的种蛋，分装冻存于冰箱中。双抗体夹心试验各反应条件的确定包被抗体工作浓度确定用的碳酸盐缓冲液将小鼠抗鹅稀释成分别包被酶标反应板，对鹅血清倍稀释进行检测。被检鹅血清的最佳稀释倍数的确定按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后将混合鹅血清，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。选择值最接近于时被检鹅血清的稀释倍数作为被检鹅血清的最佳稀释倍数。待检鹅卵黄最佳稀释倍数的确定按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后将混合鹅卵黄，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。选择值最接近于时被检鹅卵黄的稀释倍数作为被检鹅血清的最佳稀释倍数。按包被抗原的工作浓度将抗原稀释，包被酶标板，然后分别将五份卵黄混合，分别用牛血清白蛋白的液作倍稀释，每个稀释度加五孔，进行检测并计算出每个稀释度的平均值。选择值最接近于时被检鹅卵黄的稀释倍数作为被检卵黄的最佳稀释倍数。最适抗原包被时间的确定分别将小鼠抗鹅包被后于过夜后过夜，进行测定，观察结果。最适抗原抗体反应时间的确定将抗原抗体分别作用