浸透被测样品液滤纸片放在培养基表面，标记后置于恒温箱中培养，观察抑菌效果，测定抑菌圈直径，了解抗菌肽抗菌谱。

将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验。

项目技术质量指标项目产品达到主要技术性能指标执行质量标准通过国家相关行业许可认证等项目达到目标构建出抗菌肽酵母高效表达体系，大量表达抗菌肽。

研制出具有自主知识产权高效广谱抗菌肽制剂。

考核指标该酵母表达体系对抗菌肽表达稳定，表达量重复性。

抗菌肽抗菌活性高，抗菌谱广。

理。

科研人员中，教授人副教授人助教人研究生人。

其中具有博士学位教师人。

项目新增投资筹集情况本项目申请科研经费万元。

四项目预期经济效益预期市场需求由于活性进行分析，也没有开发出基于鱼类抗菌肽基因广谱抗菌肽制剂。

本项目将开发出具有自主知识产权新型抗菌肽制剂。

项目完成时至少可达到国内领先水平。

项目技术方案论述生产技术工艺流程主要技术参数将采用技术从鱼类克隆抗菌肽全长基因与表达载体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽抗菌活性和抗菌谱测定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验重组表达载体构建将我们从淡水鱼中诱导表达抗菌肽基因与具有高效表达启动子表达载体连接，构建重组表达载体。

抗菌肽基因酵母表达体系构建及高效表达系统筛选采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

采用法和法从转录和翻译两个水平上筛选抗菌肽高效表达酵母。

抗菌肽大量表达。

利用筛选到高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。

抗菌肽分离纯化。

离心收集表达上清液，采用硫酸铵沉淀抗菌肽。

经层析，收集各个洗脱峰，用分析鉴定目多肽所在峰。

将含有目多肽洗脱液用透析，冻干浓缩。

多肽于保存，用于分析鉴定及生物功能试验。

抗菌肽抗菌活性和抗菌谱测定。

采用琼脂扩散纸片法。

以大肠杆菌沙门氏菌，肠球菌链球菌分枝杆菌巴氏杆菌布鲁氏菌弧菌痢疾杆菌绿脓杆菌梭状芽孢杆菌李氏杆菌巨大芽孢杆菌醋酸钙不动杆菌金黄色葡萄球菌化脓链状球菌流感病毒疱疹病毒为受抑菌。

将大肠杆菌等受抑菌培养后分别加入到平皿中，用玻璃刮铲将菌液涂布均匀，再将浸透被测样品液滤纸片放在培养基表面，标记后置于温箱中培养，观察抑菌效果，测定抑菌圈直径，了解抗菌肽抗菌谱。

将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验。

项目技术质量指标项目产品达到主要技术性能指标执行质量标准通过国家相关行业许可认证等项目达到目标构建出抗菌肽酵母高效表达体系，大量表达抗菌肽。

研制出具有自主知识产权高效广谱抗菌肽制剂。

考核指标该酵母表达体系对抗菌肽表达稳定，表达量重复性。

抗菌肽抗菌活性高，抗菌谱广。

分阶段描述项目执行过程中各阶段目标年月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子表达载体连接，构建重组表达载体。

月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因酵母表达系统。

月筛选高效表达抗菌肽酵母系统。

月酵母发酵条件优化。

年月采用发酵法生产抗菌肽。

月抗菌肽分离和纯化。

月抗菌肽抗菌活性和抗菌谱测定。

年月含抗菌肽饲料配制。

月动物实验。

月课题总结鉴定。

项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费使用预算见附表。

申请经费总额万元。

其中仪器设备购置费万元材料样品费万元试验费检测费万元资料调研费万元鉴定费万元。

三项目实施支撑条件项目技术来源课题申请人在法国国家农业研究中心分子遗传学实验室工作期间，参加了欧盟资助有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达研究课题，掌握了抗菌肽研究相关技术，为本课题顺利完成奠定了技术基础。

项目实验检测条件申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验室，具有全自动测序仪型型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱仪，超纯水系统各种规格电泳仪杂交仪紫外分光光度计设施先进细菌抗菌肽。

其是直接从生物体内分离抗菌肽，用这种方法不能获得大量抗菌肽。

其二是根据已发现抗菌肽基因序列设计引物在不同生物中通过技术克隆抗菌肽基因，该方法只能在不同生物中获得该抗菌肽同源基因，而不能获得新抗菌肽基因。

在本项目中，我们将前期工作中获得抗菌肽基因与载体连接，构建抗菌肽酵母高效表达体系，