检验程序图见附录。质量控制每次检验均应用单核细胞增生李斯特氏菌见进行质量控制。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售结果判定凡通过本方法在被检食品中分离获得的纯菌落,各项生化试验结果均符合所规定的生化特征,报告为在被检食品中检出单核细胞增生李斯特氏菌。各项并与李斯特氏菌特异性抗体结合,制成免疫磁珠,它能与食品中李斯特氏菌抗原结合,从而检出食品中的李斯特氏菌。样品经增菌后,分别取增菌液和免疫磁珠加入带盖塑料管中,在磁板背景下混合,如果有李斯特氏菌抗原存在,免疫磁珠就会将其捕获,然后利用磁性将免疫磁珠聚集,经清洗后接种到显色培养基和任选种培养基或琼脂,对于选择性分离平板上典型李.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠法.作,加入用乙醇和无菌水溶解的吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮磷霉素,摇匀,倾注平板。犃犘犃犔犆犃犕琼脂犃成分蛋白胨淀粉酵母浸膏氯化钠葡萄糖甘露醇柠檬酸铁铵叶苷氯化锂酚红琼脂蒸馏水盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新犃制法除盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新和琼脂外,将其他各成分加热煮沸溶解冷却后,调至,再,见第章。琼脂见第章。琼脂见第章。显色培养基。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法第部分免疫磁珠法范围的本部分规定了进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌取样制样和免疫磁珠检测方法。本部分适用于进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。规范性引用文件下列文件中的条款通过本部大试管中备用。犃犗犡犃琼脂犃成分蛋白胨淀粉氯化钠柠檬酸铁铵叶苷氯化锂琼脂犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售蒸馏水吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮硫酸盐粘功菌素磷霉素犃制法除吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮磷霉素硫酸盐粘菌素和琼脂外,将其他成分加热煮沸溶解冷却后,调至,再加入琼脂,灭菌,冷却至,无菌操述将直径具有磁性的微珠的表面化学修饰,并与李斯特氏菌特异性抗体结合,制成免疫磁珠,它能与食品中李斯特氏菌抗原结合,从而检出食品中的李斯特氏菌。样品经增菌后,分别取增菌液和免疫磁珠加入带盖塑料管中,在磁板背景下混合,如果有李斯特氏菌抗原存在,免疫磁珠就会将其捕获,然后利用磁性将免疫磁珠聚集,经清洗后接种到显色培养基和任选种培养基液器。刻度移液管。灭菌玻璃器具量筒角烧瓶培养皿直径试管。灭菌管管。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法第部分免疫磁珠法范围的本部分规定了进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌取样制样和免疫磁珠检测方法。本部分适用于进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验或琼脂,对于选择性分离平板上典型李斯特氏菌菌落进行确认,最终通过系列试验确定是否存在单核细胞增生李斯特氏菌。设备和器具培养箱。.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠法。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售胰酪大豆琼脂见第章。肉汤增菌液鉴定和确认单核细胞增生李斯特氏菌的鉴定和确认按执行,单核细胞增生李斯特氏菌检验程序图见附录。质量控制每次检验均应用单核细胞增生李斯特氏菌见进行质量控制。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售结果判定凡通过本方法在被检食品中分离获得的纯菌落,各项生化试验结果均符合所规定的生化特征,报告为在被检食品中检出单核细胞增生李斯特氏菌。各项生化试验性分离器,也可以用手摇代替。分离培养分离培养吸取免疫磁珠悬液,加到显色培养基见及任选择性培养基见见琼脂平板上,用无菌接种环划线,培养。筛选李斯特氏菌在显色培养基上菌落为蓝色,且在其周围形成个晕环。李斯特氏菌在琼脂平板上生长后菌落呈现黑色,直径为,在其周围形成个黑色环,培养,菌落仍菌检验程序图犅单核细胞增生李斯特氏菌检验程序图犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法第部分免疫磁珠法中国标准出版社出版北京复兴门外里河北街号邮政编码网址电话中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本印张字数千字年月第版年月第次印刷印数书分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。实验室生物安全通用要求进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法方法概述将直径具有磁性的微珠的表面化学修饰,或琼脂,对于选择性分离平板上典型李斯特氏菌菌落进行确认,最终通过系列试验确定是否存在单核细胞增生李斯特氏菌。设备和器具培养箱。.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠法。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售胰酪大豆琼脂见第章。肉汤增菌液作,加入用乙醇和无菌水溶解的吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮磷霉素,摇匀,倾注平板。犃犘犃犔犆犃犕琼脂犃成分蛋白胨淀粉酵母浸膏氯化钠葡萄糖甘露醇柠檬酸铁铵叶苷氯化锂酚红琼脂蒸馏水盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新犃制法除盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新和琼脂外,将其他各成分加热煮沸溶解冷却后,调至,再犲狉犿肉汤犉犅增菌液犃犉狉犪狊犲狉犿肉汤犉犅增菌液成分盐酸吖啶黄溶液萘啶酮酸钠盐溶液柠檬酸铁铵溶液犃制法将中各成分按上述体积加入到基础肉汤中,无菌分装于,大试管中备用。犃犉狉犪狊犲狉犿肉汤犉犅增菌液犃犉狉犪狊犲狉犿肉汤犉犅增菌液成分盐酸吖啶黄溶液萘啶酮酸钠盐溶液犃制法将中各成分按上述体积加入到基础肉汤中,无菌分装于.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠法.呈黑色,直径,除在菌落周围有环外,在菌落中心部位的深层也形成黑点。李斯特氏菌在琼脂平板上与在琼脂平板上菌落相似。在显色培养基及或琼脂平板上挑取个或更多可疑菌落,接种于琼脂见平板上,纯培养后进鉴定。.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠作,加入用乙醇和无菌水溶解的吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮磷霉素,摇匀,倾注平板。犃犘犃犔犆犃犕琼脂犃成分蛋白胨淀粉酵母浸膏氯化钠葡萄糖甘露醇柠檬酸铁铵叶苷氯化锂酚红琼脂蒸馏水盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新犃制法除盐酸吖啶黄素硫酸多粘菌素复达新和琼脂外,将其他各成分加热煮沸溶解冷却后,调至,再。小心地打开磁架上的管管盖,从磁极对面侧慢慢吸出液体,注意不要接触管壁上的磁珠,每个样品换次枪头加灭菌的见,并重新盖好盖子,将磁极从支架上移走,轻缓摆动磁架次次,使管内各成分混合,然后重新将磁极放回到支架上。重复该清洗步骤几次。将离心管从磁性分离器上移开,并加灭菌的见到管中,重悬磁珠。如果实验室没有磁,加到显色培养基见及任选择性培养基见见琼脂平板上,用无菌接种环划线,培养。筛选李斯特氏菌在显色培养基上菌落为蓝色,且在其周围形成个晕环。李斯特氏菌在琼脂平板上生长后菌落呈现黑色,直径为,在其周围形成个黑色环,培养,菌落仍呈黑色,直径,除在菌落周围有环外,在菌落中心部位的深层号定价元版权所有禁止翻制电子传阅发售。免疫磁珠分离犐犕犛免疫捕获混合增菌培养液,沉淀所有的粗糙食物残渣,从增菌培养液中移取上层液体要尽可能避免移取到食物颗粒和脂肪颗粒加入管见中,加准备好的免疫磁珠见。在旋涡混合器见上混合该悬液。分离将管固定在磁架见的管孔中,轻缓摆动磁架次次,使免疫磁珠聚集到磁极或琼脂,对于选择性分离平板上典型李斯特氏菌菌落进行确认,最终通过系列试验确定是否存在单核细胞增生李斯特氏菌。设备和器具培养箱。.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法免疫磁珠法。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售胰酪大豆琼脂见第章。肉汤增菌液加入琼脂,灭菌,冷却至,无菌操作,加入用适量无菌水溶解的盐酸吖啶黄素硫酸菌素复达新,摇匀,倾注平板。犃磷酸盐缓冲溶液犘犅犛犃成分氯化钠磷酸氢钾磷酸氢钾氧化钾水犃制法将各成分溶解于蒸馏水中,用氢氧化钠调至。高压灭菌,用蒸馏水加至贮存冰箱。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售附录犅规范性附录单核细胞增生李斯特大试管中备用。犃犗犡犃琼脂犃成分蛋白胨淀粉氯化钠柠檬酸铁铵叶苷氯化锂琼脂犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售蒸馏水吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮硫酸盐粘功菌素磷霉素犃制法除吖啶黄素头孢双硫唑甲氧放线菌酮磷霉素硫酸盐粘菌素和琼脂外,将其他成分加热煮沸溶解冷却后,调至,再加入琼脂,灭菌,冷却至,无菌操验结果不符合所规定的生化特征,报告为在被检食品中未检出单核细胞增生李斯特氏菌。安全防护单核细胞增生李斯特氏菌为生物安全级病原微生物。微生物检测实验室的工作人员对该菌进行检验时,应遵守中关于实验室生物安全防护的要求。易被其感染的年幼儿童虚弱者年长老人免疫缺陷者应远离单核细胞增生李斯特氏菌分离鉴定和确认的试验场所。水浴锅。微量移形成黑点。李斯特氏菌在琼脂平板上与在琼脂平板上菌落相似。在显色培养基及或琼脂平板上挑取个或更多可疑菌落,接种于琼脂见平板上,纯培养后进鉴定。犃犿狅犾犔氢氧化钠溶液氢氧化钠灭菌蒸馏水振摇混匀,充分溶解。犃柠檬酸铁铵溶液柠檬酸铁铵灭菌蒸馏水振摇混匀,充分溶解后过滤除菌。犃犉狉犪狊.进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法