,用于制备工作裂解液。犆蛋白酶溶液瓶,瓶。用于制备工作裂解液。犛犖犜书书书犛犖犜附录犇资料性附录培养基犇改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤犿犔犛犜犞犿犇成分胰酪胨氯化钠,霍乱弧菌狅犿狆犠,创伤弧菌狏狏犺犃,注反应参数可根据基因的扩增仪型号的不同进行适当的调整。犛犖犜附录犅资料性附录致病菌普通犘犆犚检测试剂盒犅试剂盒组成每个试剂盒每个反应体犃,小肠结肠炎耶尔森氏菌,单增李斯特氏菌狆狉犳犃,空肠弯曲杆菌犞犛食品中多种致病菌快速检测方法法.,阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未出现相应大小的扩增条带,则可报告该样品检验结果为阴性如待测样品出现相应大小扩增条带则可判定该样品结果为假定阳性,则回到传统的检测步骤,进步应按中该致病菌对应的标准检测方法进行确认,最终结果以后者的检测结果为准。如果阴性对照出现条带和或阳性对照未出现预期大小的扩增条带,本次待测样品的结果无效,应重新做实验,并排除污染因素。第法犅犃犡全自动致病菌犘犆犚检测方法适用范围全自动致病菌检测方法,包括食品中沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏。可长期保存。也可使用等效的商业化的提取试剂盒并按其说明提取制备模板。犘犆犚扩增引物的序列引物的序列见附录。空白对照阴性对照和阳性对照设置空白对照设为以水代替模板阴性对照采用非目标菌的作为反应的模板阳性对照采用含有检测序列的或质粒作为反应的模板。犘犆犚反应体系普通反应体系见表。食品中多种致病菌快速检测方法法。检测结果显示为不确定或错误时,用系统重新进行检测。犛犖犜书书书附录犃规范性附录犘犆犚双蒸水补至注反应体系中各试剂的量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。注每个反应体系应设置两个平行反应。犛犖犜犘犆犚反应参数反应参数见附录。犘犆犚扩增产物的电泳检测用电泳缓冲液制备琼脂糖凝胶时加入溴化乙锭至终浓度为,也可在电泳后进行染色。取扩增产物,分别和上样缓冲液混合,进行点样,用分子量标记物做参照。恒压电泳,电泳,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。结果判定和报告在阴性对照未出现条大肠埃希氏菌∶和阪崎肠杆菌的检测方法。原理全自动致病菌检测系统是应用技术检测食品中的致病菌的自动方法。扩增反应开始,系统片剂中的荧光染料就会与双链结合,光照时发出荧光信号。霍乱弧菌按照或或方法进行。创伤弧菌按照或方法进行。细菌模板犇犖犃的提取直接提取法对于上述方法培养的增菌液,可直接取该增菌液加到无菌离心管中,离心,尽量吸弃上清加入提取中各试剂的量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。注每个反应体系应设置两个平行反应。犛犖犜犘犆犚反应参数反应参数见附录。犘犆犚扩增产物的电泳检测用电泳缓冲液制备琼脂糖凝胶时加入溴化乙锭至终浓度为,也可在电泳后进行染色。取扩增产物,分别和上样缓冲液混合,进行点样,用分子量标记物做参照。恒压电泳,电泳,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。结果判定和报告在阴性对照未出现条带,阳性对照出现预期液参见附录,混匀后沸水浴,离心,取上清保存于备用以待检测。可长期保存。对于方法分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,加入提取液,再按照上述步骤制备模板以待检测。有机溶剂提纯法取待测样本增菌培养液或分离菌落菌悬液,加到离心管中,离心,尽量吸弃上清加入提取液,沸水浴,加酚∶氯甲烷∶,体积比,振荡混匀,离心,去上清液,乙醇冲洗次,离心,沉淀溶于核酸溶解液中。保存在备犛犖犜犜犪狇酶犜犪狇聚合酶。犝犖犌酶尿嘧啶糖基酶。生物安全措施为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌,所有培养物和废弃物应小心处置。并按中的有关规定执行。防污染措施参照标准临床诊断中聚合酶链反应技术的应用中第章污染的预防和控制。试剂和材料除另有规定外,所有试剂均采用分析纯。水应符合中级水的规格。提取液主要成分是。缓冲液其中氯化钾犜阪崎肠杆菌的检测试剂盒,放置。仪器和设备仪。电泳装置。凝胶分析成像系统。超净工作台。高速台式离心机离心转速以上,台式离心机离心转速。微量可调移液器。犘犆犚狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀聚合酶链反应,简称。犱犖犜犘犱犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犮犾犲狅狊犻犱犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧核苷磷酸。犱犃犜犘犱犲狅狓狔犪犱犲狀狅狊犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧腺苷磷酸。犱犌犜犘犱犲狅狓反应技术的应用中第章污染的预防和控制。试剂和材料除另有规定外,所有试剂均采用分析纯。水应符合中级水的规格。提取液主要成分是。缓冲液其中氯化钾明胶。反应液含氯化镁的缓冲液犜犪狇酶酶。由指定单位提供,给出这信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。检测的靶基因引物序列和反应参数表犃犘犆犚检测的靶基因引物序列和反应参数表致病菌靶基因名称引物序列扩增片段长度反应条件预变性扩增循环数后延伸沙门氏菌犻狀狏犃,志贺氏菌犻狆犪犎,金黄色葡萄球菌犳犲液参见附录,混匀后沸水浴,离心,取上清保存于备用以待检测。可长期保存。对于方法分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,加入提取液,再按照上述步骤制备模板以待检测。有机溶剂提纯法取待测样本增菌培养液或分离菌落菌悬液,加到离心管中,离心,尽量吸弃上清加入提取液,沸水浴,加酚∶氯甲烷∶,体积比,振荡混匀,离心,去上清液,乙醇冲洗次,离心,沉淀溶于核酸溶解液中。保存在备,阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未出现相应大小的扩增条带,则可报告该样品检验结果为阴性如待测样品出现相应大小扩增条带则可判定该样品结果为假定阳性,则回到传统的检测步骤,进步应按中该致病菌对应的标准检测方法进行确认,最终结果以后者的检测结果为准。如果阴性对照出现条带和或阳性对照未出现预期大小的扩增条带,本次待测样品的结果无效,应重新做实验,并排除污染因素。第法犅犃犡全自动致病菌犘犆犚检测方法适用范围全自动致病菌检测方法,包括食品中沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏提取试剂盒并按其说明提取制备模板。犘犆犚扩增引物的序列引物的序列见附录。空白对照阴性对照和阳性对照设置空白对照设为以水代替模板阴性对照采用非目标菌的作为反应的模板阳性对照采用含有检测序列的或质粒作为反应的模板。犘犆犚反应体系普通反应体系见表。表普通犘犆犚反应体系试剂贮备液浓度反应体系中加样体积缓冲液氯化镁含各酶上游引物下游引物犜犪狇酶模食品中多种致病菌快速检测方法法.犵狌犪狀狅狊犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧鸟苷磷酸。犱犆犜犘犱犲狅狓狔犮狔狋犻犱犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧胞苷磷酸。犱犜犜犘犱犲狅狓狔狋犺狔犿犻犱犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧胸苷磷酸。犱犝犜犘犱犲狅狓狔狌狉犻犱犻狀犲狋狉犻狆犺狅狊狆犺犪狋犲脱氧尿苷磷酸。犛犇犛狊狅犱犻狌犿犱狅犱犲犮狔犾狊狌犾犳犪狋犲十烷基硫酸钠。犜狉犻狊狋狉犻狊犺狔犱狉狅狓狔犿犲狋犺狔犾犪犿犻狀狅犿犲狋犺犪狀犲羟甲基氨基甲烷。犇犈犘犆焦碳酸乙酯。食品中多种致病菌快速检测方法,阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未出现相应大小的扩增条带,则可报告该样品检验结果为阴性如待测样品出现相应大小扩增条带则可判定该样品结果为假定阳性,则回到传统的检测步骤,进步应按中该致病菌对应的标准检测方法进行确认,最终结果以后者的检测结果为准。如果阴性对照出现条带和或阳性对照未出现预期大小的扩增条带,本次待测样品的结果无效,应重新做实验,并排除污染因素。第法犅犃犡全自动致病菌犘犆犚检测方法适用范围全自动致病菌检测方法,包括食品中沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏狊狆犺犪狋犲脱氧尿苷磷酸。犛犇犛狊狅犱犻狌犿犱狅犱犲犮狔犾狊狌犾犳犪狋犲十烷基硫酸钠。犜狉犻狊狋狉犻狊犺狔犱狉狅狓狔犿犲狋犺狔犾犪犿犻狀狅犿犲狋犺犪狀犲羟甲基氨基甲烷。犇犈犘犆焦碳酸乙酯。食品中多种致病菌快速检测方法