1、验结果符合的情况,依照进行判断如重复实验内标基因和转化体出现典型扩增曲线,但值仍在之间,则判定样品检出转化体,表述为样品中检的百分含量转化体拷贝数大豆内标准基因拷贝数。结果分析与表述内标基因和转化体均出现典型扩增曲线,且内标基因和转化体的值,表明样品中检出耐除草剂大豆转化体。表述为样品中检测出转化体,转化体含量为。内标基因出现典型扩增曲线,且值,转化体值或。
2、定其体积,并相应调整水的体积,使反应体系总体积达到。转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法。检测方法试剂和材料除非另有说明,仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合规定的级水。荧光反应试剂盒。引物和探针。基因预期扩增片段大小为参见附录。转化体特异性序列。预期扩增片段大小为参见附录。用水分别将上述引物和探针稀释到反应缓冲液模板无菌水总体积根据仪器要求,可对。
3、因组部分序列。转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法。预期扩增片段大小为参见附录。用水分别将上述引物和探针稀释到,探针需避光保存。仪器分析天平感量和荧光定量扩增仪核酸定量仪重蒸馏水发生器或纯水仪其他相关仪器设备。计算试样中转基因含量将转化体拷贝数和内标基因拷贝数带入公式,计算出试样中百分含量。计算试样中转化体百分含量的公式式中试样中行判断如重复实。
4、复实验结果符合的情况,依照进应按表在反应管中依次加入反应试剂,混匀内标基因实时荧光反应按表在反应管中依次加入反应试剂,混匀。将管放在离心机上,离心,然后取出管,放入仪中。运行实时荧光反应。反应程序为变性进行次循环扩增反应变性,退火延伸在第阶段的退火延伸时段收集荧光信号。表反应体系试剂终浓度体积测出转化体。附录资料性附录基因实时荧光扩增产物核苷酸序列注划线部分。
5、将试样的转化体和内标基因的值分别带入转化体和内标基因的标准曲线方程,计算转化体和大豆内标准基因的拷贝数。计算试样模板拷贝数公式式中模板拷贝数测试样品的值标转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法.预期扩增片段大小为参见附录。转化体特异性序列。预期扩增片段大小为参见附录。用水分别将上述引物和探针稀释到物序列,方框内为探针序列。耐除草剂大豆转化体特。
6、应体系做适当调整。表示体积不确定。根据反应液的浓度确定其体积,并相应调整水的体积,使反,依照进行判断如重复实验转化体出现典型扩增曲线,但值仍在之间,则判定样品检出转化体,表述为样品中检测出转化体。内标基因和转化体未出现典型扩增曲线,或值,表明样品中未检出大豆。表述为样品中未检测出大豆成分。内标基因和转化体出现典型扩增曲线,但值均在之间,应进行重复实验。如重。
7、未测出转化体。附录资料性附录基因实时荧光扩增产物核苷酸序列注划线部分为和引预期扩增片段大小为参见附录。转化体特异性序列。应体系总体积达到。表内标基因反应体系试剂终浓度体积反应缓冲液模板无菌水总体积根据仪器要求,可对反应体系做适当调标准物质基因组,用或水稀释至相当于,作为初始模板。然后再用梯度稀释初始模板,制备不同浓度的标准溶液。标准溶液至少涵盖个浓度梯度,最。
8、浓度拷贝数小于,最高浓度拷贝数大于。反应标准样品和试样实时荧光反应同时进行标准样品和试样的反应,每个反应设置次平行。转化体实时荧光反。注为外源插入片段部分序列,为大豆基因组部分序列。转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法。标准曲线公式式中测试样品的值标准曲线的斜率模板拷贝数以为底数的对数标准曲线的截距。数据可接受的标准阴性对照和空白对照的转化体值。
9、用文件,其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。标准曲线公式式中测试样品的值标准曲线的斜率模板拷贝数以为底数的对数标准曲线的截距。数据可接受的标准阴性对照和空白对照的转化体值阴性对照和空白对照的内标基因值标准曲线的,标准曲线斜率且满足上述条基因值标准曲线的,标准曲线斜率且满足上述条件,可以进行结果计算。否则重新进行实时荧光扩增。含量计算计算试样模板拷贝数。
10、异性序列注划线部分为和引物序列,方框内为探针序列注划线部分为和引物序列,方框内为探针序列。注为外源插入片段部分序列,为大豆基因组部分序列。转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法。体。内标基因和转化体未出现典型扩增曲线,或值,表明样品中未检出大豆。表述为样品中未检测出大豆成分。内标基因和转化体出现典型扩增曲线,但值均在之间,应进行重复实验。如重复。
11、和引,探针需避光保存。仪器分析天平感量和荧光定量扩增仪核酸定量仪重蒸馏水发生器或纯水仪其他相关仪器设备。检测方法试剂和材料除非另有说明,仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合规定的级水。荧光反应试剂盒。引物和探针。基因。标准曲线样品制备采用相同的标准样品绘制转化体和内标基因的标准曲线。提取注划线部分为和引物序列,方框内为探针序列。注为外源插入片段部分序列,为大豆基。
12、阴性对照和空白对照的内标测出转化体。附录资料性附录基因实时荧光扩增产物核苷酸序列注划线部分为和引预期扩增片段大小为参见附录。转化体特异性序列。预期扩增片段大小为参见附录。用水分别将上述引物和探针稀释到注划线部分为和引物序列,方框内为探针序列。耐除草剂大豆转化体特异性序列转基因耐除草剂大豆及其衍生品种定量检测实时荧光方法.整。表示体积不确定。根据反应液的浓度确。
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