1、生长而出现菌落融合。最终的铜绿假单胞菌菌落计数应按中式进行计算。在琼脂上生长的菌落选择和验证步骤见表。表在琼红色菌落。挑取不少于个不足个则全挑可疑菌落,进行革兰氏染色。镜检观察,粪链球菌应为革兰氏染色阳性球菌,常排列成短链状。根据菌落特征符合情况计数每水样中的典型菌落数。确证性试验从滤膜上挑取典型的菌落,接种到脑心浸萃琼脂培养基斜面上,在培养。如果有菌落生长,则继续按和的步骤进行。用接种环从脑心浸萃琼脂培养基斜面上挑取典型培养物到片清洁的载玻片上,加几滴新鲜配制的过氧化氢到载玻片的涂抹菌苔上,如果没有气泡发生,则显示过氧化氢酶反应为阴性,则菌落可视为可疑粪链球菌,需继续如下的确信过程。如果有气泡发生,则过氧化氢酶反应为阳性,因此菌落不属。
2、果每水中大肠菌群菌落数确证为大肠菌群菌落数过滤的试样量粪链球菌方法提要采用滤膜法。将水样用孔径为的滤膜过滤,并将滤膜移至链球菌琼脂培养基上,于恒温箱中培养,如果有红色或粉红色菌落生长,需将胨培养液成分蛋白胨牛肉膏乳糖氯化钠溴甲酚紫乙醇溶液蒸馏水制法将蛋白胨牛肉膏乳糖及氯化钠置于蒸馏水中加热溶解,调为,再加入溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,以高压灭菌,储备冷暗处备用。革兰氏染色液结晶紫染色液成分结晶紫乙醇草酸铵水溶液制法将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。注结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单成分,易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用。革兰氏碘液成分碘片碘化钾蒸馏水制法将碘和碘化钾先进行。
3、每升,水样钾的浓度,单位为毫克每升天然钾的放射性,单位为贝克每毫克。其他本法最低检测浓度为。活性炭吸附准备直接饮用的矿泉水,般不应有污染,需要经常检验,可按下法进行接种。推测性检验用的灭菌吸管向支盛有双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中,每管接种水样。置培养箱中培养,观察每支管的产气情况,如有气体产生,则认为推测性检验阳性。确证性试验操作步骤同矿泉水水源水检验。值的计算当经过证实性检验后,管水样结果中,阳性反应的管数对应的值及其的可信限范围见表。表用管水样时各种阳性和阴性结果组合的值及其的可信限阳性反应管数可信限下限上限无限滤膜法方法提要采用孔径为水相微孔薄膜,将水中所含的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜贴在选择性鉴别培养基上,经培养后,大肠菌群。
4、单位为以每分钟计数测量仪器本底计数率,单位为以每分钟计数水样体积,单位为升自自吸收校正系数,取回收率,可取η测量仪器计数效率,立立体角修正系数,当标准放射源与试样的面积和几何位置不同时,需要作此修正。当矿泉水中总放射性大于时,应减去的放射性,计算方法同。其他本法适用于测定总放射性大于的饮用天然矿泉水及其水源水。氚原理氚是种放射性同位素,半衰期为年,氚发射射线。其能量为,可用液体闪烁计数法测定其放射强度。氚的浓度用氚单位表示。式中相当于个氢原子中含有个氚原子。水样经过常压蒸馏电解富集,加入闪烁液混合均匀,在液体闪烁计数器内记数测量。试剂和材料纯铜屑。高锰酸钾固体。过氧化钠固体。液氮。石油醚。本底水直接饮用的矿泉水的检测矿泉水出厂成品水升测。
5、菌落以获得铜绿假单胞菌的数量,其他呈红褐色的菌落需要进步验证。结果与报告滤膜上的特征菌落可证实为铜绿假单胞菌的菌落。计算菌落数时应考虑到验证试验的比例及特定的水量,过滤的水样的体积应为。菌落计数按式计算式中呈蓝绿色的菌落数显荧光的菌落数产氨阳性的显荧光菌落数进行产氨测试的显荧光菌落数呈红褐色的菌落数产氨氧化酶金氏培养基上显荧光测试均呈阳性的红褐色菌落数进行产氨氧化酶金氏培养基上显荧光测试的红褐色菌落数。根据蓝色或绿色菌落的计数和确证性试验的结果,计中。营养琼脂见附录中。氧化酶试剂见附录中。钠氏试剂见附录中。检验程序铜绿假单胞菌检验程序见图。图铜绿假单胞菌检验程序操作步骤水样过滤在级的洁净工作台进行过滤操作。首先用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘。
6、混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加入其余的蒸馏水。脱色剂乙醇。沙黄复染液成分沙黄乙醇蒸馏水制法将沙黄溶解于乙醇中,待完全溶解后加入蒸馏水。注如无沙黄,可用苯酚复红染色液替代,作为复染液,复染时间为。染色法将培养的培养物涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染,水洗。滴加革兰氏碘液,作用,水洗。滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止,约,水洗。滴加复染剂,复染,水洗,待干,镜检。呈紫色者为革兰氏阳性样源的放射性。测量仪器计数效率的测量按照测量试样源的几何条件,在低本底测量仪上测量标准源的计数,同时测量仪器的本底计数。计算该仪器计数效率。分析结果的表述试样中总放射性按式计算自η立式中水样的总放射性,单位为贝克每升试样源计数率。
7、粪链球菌,确信试验到此即可停止。用接种环从脑心浸萃琼脂培养基上转移环培养物到脑心浸萃液态培养基内,在培养。此外,也同时转移环培养物到胆汁液态培养基中,在培养。胆汁液态培养基由无菌的牛胆盐溶液加入无菌的脑心浸萃液态培养基中配制而成。转移到上述培养基后,若能够生长繁殖,则结果表示为阳性,证实为粪链球菌。结果与报告根据上述典型菌落的计数和确证性试验为阳性的结果,计算每水样中的粪链球菌数量,结果以计。其他检验及计数食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法菌,呈红色者为革兰氏阴性菌。链球菌琼脂培养基成分号月示胨或聚胨麦芽糖乳糖醉母浸膏氯化钠叠氮化钠甘油磷酸钠琼脂蒸馏水制法将上述成分溶解于蒸馏水中,置于沸水浴内加热,以溶解其中的琼脂,待完全溶解后再加。
8、热,然后冷却,温度降到时,于培养基内再加的的氯化苯基氮唑的无菌水溶液用滤膜过滤除菌,用的溶液将调到。培养基于存放,到灌入平皿之前不可超过,有培养基的平皿应在保存。超过不用,弃去。脑心浸萃液态培养基成分幼牛脑的浸萃葡萄糖牛心的浸萃胨蒸馏水制法将上述各成分于蒸馏水中加热溶解,调节使其灭菌后为。脑心浸萃琼脂培养基脑心浸萃琼脂培养基除了含有与上述脑心浸萃液态培养基相同的成分外,再加入的琼脂,灭菌后的应为。分装到试管中做成斜面培养基。假单胞菌琼脂基础培养基琼脂成分明胶胨胰蛋白胨甘油琼脂蒸馏水补充成分溴化十烷基甲铵萘啶酮酸制法将明胶胨胰蛋白胨琼脂溶解于蒸馏水中,加入甘油,加热煮溶并高压蒸汽灭菌,。灭菌后,待菌的滤床上,固定好滤器,将水样如水样含菌数。
9、级水。镍标准储备溶液称取金属镍高纯或光谱纯,溶于硝酸溶液中,加热驱除氧化碳,用水定容至。镍标准中间溶液吸取镍标准储备溶液于容量瓶中,用硝酸溶液稀释至刻度,摇匀。镍标准工作溶液甲烷移到另试管中并加入的盐酸左右,振荡后,静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性,表示被检物中有绿脓菌素存在。乙酰胺液体培养基将中的纯培养物接种到装有乙酰胺液体培养基的试管中,在下培养。然后向每支试管培养物加入滴滴钠氏试剂,检查各试管的产氨情况,如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化,则为阳性结果,否则为阴性。计数将产生绿脓色蓝色绿色或氧化酶反应呈阳性在紫外灯下产生荧光或,且在乙酰胺肉汤中产氨的所有菌落证实为铜绿假单胞菌,并进行计数。通过计数培养后的滤膜上的。
10、分,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,固定好滤器,将水样或稀释液通过孔径的滤膜过滤,然后将过滤后的滤膜贴在已制备好的琼脂平板上,平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。培养将平板倒置于培养,并防止干燥。结果观察在培养和后观察滤膜上菌落的生长情况并计数。计数所有显蓝色或绿色绿脓色素疑似铜绿假单胞菌的菌落,并进行绿脓菌素确证性试验。在紫外线下检查滤膜时,应避免长时间在紫外光下照射,否则可能会将平板上的菌落杀灭,而导致无法在证实培养基上生长。计数滤膜上所有发荧光不产绿脓色素疑似铜绿假单胞菌菌落,并进行乙酰胺肉汤确证性试验。将其他所有红褐色不发荧光的菌落进行氧化酶测试乙酰胺液体培养基金氏培养基确证性试验,培养观察结果,防止因为培养导致菌落过分。
11、定试样的体积,单位为毫升水样体积,单位为毫升。精密度在重复性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的。其他定量限为。铝铬天青分光光度法原理在范围内,铝在聚乙醇辛基苯醚和溴代十烷基吡啶的存在下与铬天青反应生成蓝色的元体系混合胶束,比色定量。试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为规定的级水。铬天青溶液称取铬天青溶于乙醇溶液中,混匀。乳化剂溶液吸取乳化剂聚乙醇辛基苯基醚,溶于水中。溴代十烷基吡啶简称,称取溶于乙醇中,加水稀释至。乙胺盐酸缓冲液量取无水乙胺,加水,冷却后缓缓加入盐酸,搅匀,用酸度计调节为,若,则慢慢滴加盐酸若时,应减去的放射性,按式计算式中水样减去总放射性,单位为贝克每升水样总放射性,单位为贝。
12、多,可减少过滤水样量,或将水样稀释注入滤器中,打开滤器阀门,在负大气压下抽滤。水样滤完后,再抽气约,关上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放在品红亚硫酸钠培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置,放入恒温箱内培养。观察滤膜上面的菌落特征。大肠菌群典型菌落在远藤培养基上具有以下特征紫红色,具有金属光泽的菌落深红色,不带或略带金属光泽的菌落淡红色,中心色较深的菌落挑取不少于个不足个则全挑可疑菌落,进行革兰氏染色镜检观察。凡系革兰氏阴性无芽孢杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液,经培养后,如产酸产气则判定为大肠菌群阳性。结果与报告滤膜上的大肠菌群菌落数按式计算,以每水样中的大肠菌群数报告。
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GB 8538-2016 食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法