加热使其完全溶解至透明，并将其倒入预先准备的试管中，用牛皮纸封口，放入的高温菌锅中灭菌。

然后冷却至时倒平板制成固体培养基。

在洁净工作台中，移取菌液逐级稀释至，分别涂于固体培养基上，然后放入盒中置于恒温培养箱中培养。

天后，培养基上会出现粘稠状白色菌落，然后挑取单菌落接种于液体培养基中，再次进行富集培养。

通过这样反复多次的培养，即可分离出较纯的假单胞菌。

腐蚀样品挂样用的量筒量取的陈海水，倒入三口烧瓶中，用橡皮塞子封口。

重复此操作，配置成瓶海水培养基。

将配置的海水培养基用牛皮纸包好瓶口，放入的高温灭菌锅中灭菌，再用紫外灯灭菌，然后放入无菌室中冷却至室温。

在超净工作台中，移取假单胞菌液注入烧瓶中，并将工作电极从侧口插入烧瓶，用石蜡封口，然后用牛皮纸将烧瓶瓶口封好。

此步操作均在酒精灯附近进行，避免杂菌对样品的污染。

挂样完成后的实验样品从无菌室中移出，放入个大的塑料箱中，以备电化学测试之用。

注上述第三第四步的操作需要手带次性手套完成，并用灭菌液进行灭菌，方可进行操作，以避免杂菌对样品的污染。

测试及分析方法假单胞菌生长曲线测定将假单胞菌接种到海水中，经过短暂的休整之后，开始以二分裂法繁殖，分裂后的子细胞都具有生活能力，在不补充营养物质，保持整个海水毕业论文培养基体积不变的情况下，采用法计算不同培养时间假单胞菌的数量，以时间为横坐标，以菌数为纵坐标，根据不同培养时间里假单胞菌数量的变化，可以做出条反映假单胞菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，这种曲线就是假单胞菌的生长曲线。

具体操作方法如下样品稀释。

在超净工作台上，用灭菌注射器吸取的无菌海水注入塑料试管中，换用支灭菌吸管，吸取的假单胞菌液注入装有无菌海水的塑料试管中，振摇试管混合均匀，制成的稀释液。

换用支灭菌吸管吸取稀释液，沿管壁徐徐注入含有无菌水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成的稀释液。

按上述操作顺序，制成的倍递增稀释液，如此每递增稀释次即要换用支灭菌吸管。

倾注平皿。

将凉至的广谱琼脂培养基注入平皿约个制成平板，以灭菌注射器吸取的稀释液注入培养基中，并转动平皿，使混合均匀。

以此方法进行倍递增稀释液的培养。

培养小时。

待琼脂凝固后，翻转平板，置于恒温箱内培养。

计数。

培养到时间后，取出平板对其内菌落数目进行计数，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏记下各平板的菌落总数后乘以稀释倍数，即得每克每毫升样品所含菌落总数。

电化学测试电化学测试仪器为电化学工作站，采用三电极电解池体系，工作电极为制备的钢电极，辅助电极为光亮铂电极，实验前用蒸馏水冲洗，无水乙醇擦洗，滤纸吸干，参比电极为饱和甘汞电极，使用时从饱和溶液中取出，蒸馏水冲洗，无水乙醇擦洗，电解液为海水，测试软件为。

开路电位测量。

以为时间间隔，测量，得到试样开路电位随时间的变化曲线。

交流阻抗试验。

测定在腐蚀电位下的电化学阻抗谱。

激励信毕业论文号选择幅值为的交流正弦波，频率范围为，数据利用软件进行拟合。

极化试验。

动电位极化曲线的扫描速度为，扫描电位范围从到后回扫，利用软件进行分析拟合。

电化学阻抗谱测量时在试样表面施加的信号，扫描频率范围为。

电化学腐蚀测试中，和以天天天天天天天为周期，定期取样，作检测分析以天天天天天天天天天天天天为周期，定期取样，作检测分析。

扫描电子显微镜测试对腐蚀样品的表面以及去除腐蚀产物的样品表面分别作测试，根据得到的样品表面照片分析腐蚀产物的形貌和分布特征。

实验结果与分析海水中假单胞菌生长曲线经分离纯化和扩大繁殖后的假单胞菌在海水中的生长曲线如图所示。

从曲线可以明显地看到假单胞菌的生长分为四个阶段迟缓期指数生长期稳定生长期衰亡期。

第阶段为迟缓期，当假单胞菌接种到灭菌海水这个新的生长环境中时，由于暂时缺乏足够的能量和必需的生长因子，菌种未得到充分的活化，因此，假单胞菌在段时间里并不立即分裂，菌种的数量维持在，生长处于迟缓期。

第二阶段为指数生长期，假单胞菌逐渐适应了新的环境，它开始以最大的速度生长和分裂，假单胞菌细胞由个分裂成两个，菌种数量开始成指数增加，进入指数生长期。

第三阶段为稳定生长期，随着培养时间的延长，由于间歇培养假单胞菌所需的碳源氮源等营养物质逐渐消耗，环境值逐渐变化，逐步不利于假单胞菌的生长，导致假单胞菌生长率降低直至零即细菌分裂的数量等于细菌死亡数量，进入稳定生长期，假单胞菌菌种数维持在。

第三阶段为衰亡期，当营养物质逐渐消耗待尽和有毒代谢产物的大量积累，假单胞菌死亡速率逐步增加，假单胞菌死亡速率大毕业论文于假单胞菌分裂速率，活菌种数逐步减少，进入衰亡期。

试验表明，在海水条件下假单胞菌可以在相对长的时间内稳定生长。

图假单胞菌在海水中的生长曲线腐蚀电位跟踪分析从自腐蚀电位随浸泡时间的变化关系图来看见图，钢电极在假单胞菌海水体系中的自腐蚀电位是先经历了从到的快速负移，后向正方向变化，开始下降后逐渐趋于稳定。

这是因为钢电极刚浸入假单胞菌海水中，假单胞菌就会附着在电极表面形成层微生物膜，由于假单胞菌的繁殖代谢活动使电极表面氧浓度降低，阻碍了其表面钝化膜的形成，同时假单胞菌新陈代谢产生了氨类侵蚀性物质，因而使自腐蚀电位快速负移。

假单胞菌在经过个短暂的延滞期后，菌种数量开始呈对数级增长，生长代谢加快，大量的代谢产物和胞外聚合物在表面沉积，使得电极表面的生物膜增厚，自腐蚀电位在出现了缓慢正移的现象。

持续生长后，电极表面由于假单胞菌生长代谢产生的碱性物质，以及腐蚀过程中浓度增高，致使这表面区域的产物膜不断被破坏减薄，自腐蚀电位又开始快速负移。

随着腐蚀的进行，在腐蚀电位出现毕业论文了缓慢正移现象，这主要是由于密封环境中氧气以及有机营养物质的消耗殆尽，致使假单胞菌活性下降数量减少。

图钢的自腐蚀电位随时间的变化曲线动电位极化曲线分析电极的极化曲线取决于阴极过程和阳极过程，电极表面微生物膜的附着会改变电极过程，因而会影响极化行为。

图为钢在接种假单胞菌海水中的动电位极化曲线。

从图中可以看出，段为阴极极化曲线，段为阳极极化曲线。

段被明显的分为两个阶段。

段属于活性区，此段是金属的阳极溶解过程。

在该区中，金属处于活性溶解状态，电流随电极电位的升高而增大段由于产物膜被破坏，导致大阴极小阳极，从而加速腐蚀。

从图可知，钢腐蚀没有明显的钝化区。

由图可知，随着浸泡时间的增加，整个极化曲线依次右移，电流密度增大。

阴极极化曲线右移说明了阴极极化显著增加，阴极去极化作用明显，即生物膜能提高阴极反应速率，使极化曲线的活化控制部分向更大的电流密度方向移动，但没有改变电极阴极的极化类型和控制步骤。

阳极曲线的性质在时间段内发生了很大改变，而在接下来的时间内则变化比较毕业论文平稳，只是电流密度随着浸泡时间的延长而在不断增大。

这主要是因为在浸泡初期时，由于钢电极表面形成的假单胞菌生物膜较疏松，且不能够完全覆盖碳钢表面，所以碳钢的腐蚀主要由海水中的有机物质所决定。

而在浸泡时，假单胞菌进入对数期生长，电极表面已经形成了致密的微生物膜，假单胞菌大量繁殖，其新陈代谢作用决定了钢电极的性质和腐蚀速度。

同时可见，在同腐蚀电流作用下，到腐蚀电位依次负移，这主要是由于生物膜的形成阻止了海水中的氧向电极表面的扩散以及生物膜内的假单胞菌自身活动消耗氧导致生物膜覆盖区的电极表面上的氧浓度作用明显，能提高阴极反应速率，使极化曲线的活化控制部分向更大的电流密度方向移动，且完整生物膜的形成不会改变电极阴极的极化类型和控制步骤，阴极过程的控制步骤仍是氧扩散。

假单胞菌的新陈代谢作用决定了钢电极的性质和腐蚀速度。

浸泡初期，生物膜对钢电极起保护作用，随着假单胞菌的大量繁殖，腐蚀产物堆积，造成生物膜覆盖区氧浓度降低，形成氧浓差电池，诱发局部腐蚀。

研究了钢在假单胞菌海水体系中的交流阻抗谱随时间的变化规律，采用等效电路对不同浸泡阶段的阻抗谱图进行模拟，得到双电层电容电荷转移电阻腐蚀产物层电阻随浸泡时间的变化，表明腐蚀产物层和双电层的双层作用而导致的阴极反应的电荷和物质在两相界面的传输速率的变化是控制钢海水腐蚀的主要因素。

结束语尽管对材料的海水腐蚀已有较深入的了解，些腐蚀控制技术亦已成熟，但因腐蚀所引起的事故还不断出现。

这说明人们对海水腐蚀的认识还存在空白，今后还应在下列几个方面进行探索不同加入物或微量污染物对海水腐蚀过程的作用不同材料在大流速或湍流条件下的冲刷腐蚀机理生物因素和电化学因素之间的交互作用微生物，尤其是单菌微生物海洋腐蚀过程中生物副产物的作用及其对冶金因素的敏感性形成的腐蚀产物污垢生物膜的性质及其对裸漏区和闭塞区内腐蚀过程的影响深海腐蚀全球不同海域腐蚀性显著变化的原因等。

毕业论文致谢本论文是在吴老师的悉心指导下完成的。

吴老师严谨的治学态度，丰富的科学实践经验，忘我的敬业精神，都给了我极大的帮助和启发，将使我受益终生。

本论文的完成，倾注了吴老师大量的心血，在此，谨向吴老师表示崇高的敬意和衷心的感谢，在此，我也要特别谢谢肖学长和罗学姐，在他们的统安排下，本实验进行得很顺利，实验结果也比较令人满意，而且在他们的悉心指导下，让我学会了很多实验仪器的操作，在此表示感谢。

另外，我也要谢谢我们同组的文张唐王任，大家的默契配合和认真工作才使本实验研究得以顺利完成。

最后，感谢这四年来辛勤教导我，关心我，给过我帮助的所有老师和同学。

毕业论文参考文献刘淑静海水冷却体系中铜合金微生物腐蚀的电化学研究中国海洋大学中国海洋大学，曹刚，高翠，甘复兴等碳钢在淡水环境中的腐蚀行为装备环境工程申泽骥，苏贵桥铸铁的电化学腐蚀机理现代铸铁武素茹海洋厌氧微生物膜影响的碳钢腐蚀机理与过程苏璐璐钢和不锈钢海水腐蚀机理研究山东大学山东大学，王晓华，卫月琴，朱红