了实验数据的精确性和科学性设臵了次生物重复，绘制不同菌株的生长曲线。

利用培养细胞细菌总提取试剂盒天根生化科技北京有限公司进行菌株的提取，检测提取的的质量，并按照说明书进行反转录，同时利用基因特异性引物对进行表。

反应体系，上下游引物各，补足。

反应程序，由博迈德公司直接合成由博迈德公司直接合成图。

构建好的载体经测序证明正确无误图略。

将构建好的原核表达载体导入营养缺陷型大肠杆菌突变株，以含有完整基因质粒的菌株为阳性对照，以菌株为阴性对照，并在含有基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文生长情况，将菌株接种在含有不同浓度草甘膦的培养基中，草甘膦的浓度为设臵和，每测定次，为了实验数据的精确性和科学性设臵了次生物重复，绘制不同菌株的生长曲线。

基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文。

结果与分析耐除草剂基因可拆分位点的确定利用软件预测了编码蛋白的级结构，根据尽量避开极性氨基酸和活性中心，不破坏螺旋和折叠的筛选原则，筛选出个可能拆分的位点图。

利用融合的录，同时利用基因特异性引物对进行表。

反应体系，上下游引物各，补足。

反应程序，个循环延伸，其中以引物对为引物扩增完整基因，退火温度为可拆分位点均有成功的报道。

例如，通过结构推测的方法确定了基因的拆分位点，。

通过接点扫描系统建库筛选的方法，成功鉴定出了和基因的可拆分位点，。

另外，每个蛋白都存在多个可以拆分的位点，但在不同位点拆分后重新组装蛋白的功效会有所不同。

对于蛋白来说，在拆分后，重新组装蛋白的功效与完整蛋白的相当，而在位点拆分后重组组装蛋白的功效只有完整蛋白的左右基因拆分技术是基于断裂内含肽介导的蛋白转剪接功能建立起来的，将目的基因拆分成个片段，分别与两个剪接域的基因序列结合，形成融合基因，翻译后形成的个融合蛋白通过介导的蛋白质剪接功能，将从前体蛋白中切除，同时将个基因片段编码的蛋白质序列连接起来，形成个完整的有功能的蛋白质。

目前已对来源于荧光假单孢杆菌菌株的烯醇丙酮酸莽草酸磷酸合酶基因葡萄糖苷酸酶基因来源于农杆菌菌株的烯醇丙酮酸莽草酸磷酸合酶基白分别进行以及酶活分析，结果表明基因拆分后重组菌株的抗性差异是由于蛋白水平差异造成的而不是转录水平的差异造成的。

此研究为后期培育耐草甘膦的转基因水稻提供了基础资料。

关键词基因原核表达系统可拆分位点基因拆分耐草甘膦遗传学蛋白内含肽是段位于前体蛋白中的多肽链，在蛋白质加工过程中，内含肽利用自我剪接功能从前体蛋白中切除，并将两端的外显肽连接起来形成有功能的成熟蛋白，这过程称为介导的蛋白质剪接分。

通过融合的方法将基因的端与的端连接形成融合基因，将基因的端与的端连接形成融合基因。

反应体系目的基因浓度范围，浓度范围，上下游引物引物信息见表各，补足。

反应程序，耐草甘膦遗传学蛋白内含肽是段位于前体蛋白中的多肽链，在蛋白质加工过程中，内含肽利用自我剪接功能从前体蛋白中切除，并将两端的外显肽连接起来形成有功能的成熟蛋白，这过程称为介导的蛋白质剪接，。

第个内含肽为等从酵母中发现的。

随后在古细菌细菌及真核生物中均发现了的存在。

断裂内含肽是内含肽的种，由分开的端结构域和端结构域所组成，能通过蛋白质的转剪接作用将外蛋白的高级结构筛选出个可能的拆分位点，的方法将拆分成端和端部分，并分别与的端和端结合形成融合基因和。

以为基础载体，构建了单独含有和同时含有的原核表达载体共个。

将构建好的原核表达载体导入营养缺陷型大肠杆菌菌株中，通过功能互补试验证明在和位点处拆分后，拆分开的蛋白在蛋白内含肽介导下重新组装成有基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文，。

第个内含肽为等从酵母中发现的。

随后在古细菌细菌及真核生物中均发现了的存在。

断裂内含肽是内含肽的种，由分开的端结构域和端结构域所组成，能通过蛋白质的转剪接作用将外显肽连接起来，形成完整蛋白。

目前已发现了来源于集胞菌菌株来源于念珠藻来源于鱼腥藻型聚合酶和宏基因组来源的和等天然断裂内含基础载体，构建了单独含有和同时含有的原核表达载体共个。

将构建好的原核表达载体导入营养缺陷型大肠杆菌菌株中，通过功能互补试验证明在和位点处拆分后，拆分开的蛋白在蛋白内含肽介导下重新组装成有功能的完整蛋白。

草甘膦耐受性试验证明是最适宜的拆分位点，拆分后重新组装的蛋白对草甘膦的耐受性是完整蛋白的倍。

对含有和的菌株中外源基因以及表达的重组有成功的报道。

例如，通过结构推测的方法确定了基因的拆分位点，。

通过接点扫描系统建库筛选的方法，成功鉴定出了和基因的可拆分位点，。

另外，每个蛋白都存在多个可以拆分的位点，但在不同位点拆分后重新组装蛋白的功效会有所不同。

对于蛋白来说，在拆分后，重新组装蛋白的功效与完整蛋白的相当，而在位点拆分后重组组装蛋白的功效只有完整蛋白的左右个循环延伸。

为了构建载体方便，在引物两端分别添加了左右的载体上的同源序列。

摘要基因拆分技术能有效避免转基因作物中目标性状向环境中的逃逸。

为了利用基因拆分技术培育新型耐草甘膦的转基因水稻，本研究依据蛋白的高级结构筛选出个可能的拆分位点，的方法将拆分成端和端部分，并分别与的端和端结合形成融合基因和。

以肽连接起来，形成完整蛋白。

目前已发现了来源于集胞菌菌株来源于念珠藻来源于鱼腥藻型聚合酶和宏基因组来源的和等天然断裂内含肽。

引物合成所用引物由生工生物工程上海股份有限公司和博迈德北京股份有限公司合成，基因测序由博迈德北京股份有限公司完成。

本研究所需的引物见表。

融合基因的克隆根据筛选出的拆分位点处的序列设计引物，利用的方法将基因拆分成端和端能的完整蛋白。

草甘膦耐受性试验证明是最适宜的拆分位点，拆分后重新组装的蛋白对草甘膦的耐受性是完整蛋白的倍。

对含有和的菌株中外源基因以及表达的重组蛋白分别进行以及酶活分析，结果表明基因拆分后重组菌株的抗性差异是由于蛋白水平差异造成的而不是转录水平的差异造成的。

此研究为后期培育耐草甘膦的转基因水稻提供了基础资料。

关键词基因原核表达系统可拆分位点基因拆，。

对于蛋白来说，在处拆分后，拆分开的蛋白在介导下重新组装成了有功能的蛋白，但蛋白的酶活性和耐受草甘膦的能力均明显下降，。

因此，选择适宜的可拆分位点是利用基因拆分技术培育安全转基因作物的前提条件之。

基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文。

摘要基因拆分技术能有效避免转基因作物中目标性状向环境中的逃逸。

为了利用基因拆分技术培育新型耐草甘膦的转基因水稻，本研究依据基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文乙酰乳酸合酶基因重组酶基因和等基因进行了拆分，并在烟草拟南芥水稻小麦等作物证明拆分开的基因在介导下能重新组装成完整有功能蛋白，而且利用这种方法培育的转基因作物能够很好的避免目标性状逃逸到环境中所带来的影响，。

基因拆分位点的鉴定是建立基因拆分技术体系的第步，也是最关键的步。

鉴定蛋白拆分位点的方法主要有结构预测和建库筛选两种，。

利用这两种方法筛选可拆分位点个循环延伸，其中以引物对为引物扩增完整基因，退火温度为以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为。

基因拆甘膦的培养基上进行培养持续生长，发现只有同时含有及的能恢复正常生长，证明为可拆分位点图，图。

草甘膦耐受性检测将含有质粒的营养缺陷型菌株分别接种到含有和草甘膦的固体培养基中，后开始观察不同菌株在不同浓度草甘膦培养基中的生长情况，每观察次。

为了进步探究个类型的菌株的生长情况，将菌株接种在含有不同浓度草甘膦的培养基中，草甘膦的浓度为设臵和法获得了个可能拆分位点的个融合基因片段。

以为基础载体，构建了单独含有和同时含有的载体共个。

以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为以引物对和为引物分别扩增基因片段和，退火温度为。

草甘膦耐受性检测将含有质粒的营养缺陷型菌株分别接种到含有和草甘膦的固体培养基中，后开始观察不同菌株在不同浓度草甘膦培养基中的生长情况，每观察次。

为了进步探究个类型的菌株，。

对于蛋白来说，在处拆分后，拆分开的蛋白在介导下重新组装成了有功能的蛋白，但蛋白的酶活性和耐受草甘膦的能力均明显下降，。

因此，选择适宜的可拆分位点是利用基因拆分技术培育安全转基因作物的前提条件之。

基于可拆分位点的鉴定进行耐除草剂基因研究遗传学论文。

利用培养细胞细菌总提取试剂盒天根生化科技北京有限公司进行菌株的提取，检测提取的的质量，并按照说明书进行反基因乙酰乳酸合酶基因重组酶基因和等基因进行了拆分，并在烟草拟南芥水稻小麦等作物证明拆分开的基因在介导下能重新组装成完整有功能蛋白，而且利用这种方法培育的转基因作物能够很好的避免目标性状逃逸到环境中所带来的影响，。

基因拆分位点的鉴定是建立基因拆分技术体系的第步，也是最关键的步。

鉴定蛋白拆分位点的方法主要有结构预测和建库筛选两种，。

利用这两种方法筛