的不足，为近似种难以从形态上鉴定区分的问题提供更为可靠的依据，该鉴定方法快速方便且准确，对物种精确鉴定生物研合字贵州省科技厅自然科学基金重点项目中泰小叶蝉亚科物种多样性条形码及生物地理学研究黔科合基础。

关键词条形码小叶蝉亚科昆虫学系统发育树线粒体基因遗传距离研究意义条形码技术是昆虫基因组中段被公认的相对较短的序列进行物种鉴定的种分子生物学技术，可以快速准确鉴定物种，对物种分类和系统发育研究有着重要意义。

种属的分类鉴定是小叶蝉亚科昆虫研究的重要内容，受形态学鉴定与传统分类的局限，叶蝉分类学的发展急需新技术的支撑。

条形码的分子分类方法能够弥补传统形态学分类的缺憾。

前头叶蝉亚科西南大学学报自然科学版，胡泽章，孙猛，吕兵，等条形码技术在小花蝽属昆虫分类鉴定中的应用中国生物防治学报，易啸，王攀攀，王军，等基于线粒体的条形码在对虾科种类鉴定中的研究水产学报，宋月华，李子忠新小叶蝉属新种及新纪录种记述半翅目，叶蝉科，小叶蝉亚科英文动物分类学报，马英，李海龙，何建，等基于线粒体基因的青海省种蚤类的分子鉴定及系统发育分析昆虫学报，方义亮，张建庆，肖武，等条形码技术在麻蝇亚科鉴定中的应用中国人兽共患病学报，张静，李渊，宋娜，等我国沿海棱鳀探讨线粒体基因片段用于准确鉴定小叶蝉亚科昆虫种类的可行性昆虫学论文入的情况。

变异位点为个，保守位点个，简约信息位点个，自裔位点个。

整个序列结构中和碱基组成的含量分别为和。

含量为，明显高于含量，呈现出明显的碱基偏好，符合昆虫线粒体基因碱基组成的基本特征。

转换与颠换结果显示该段序列没有饱和，可以得到准确的进化分析。

同物种间与不同物种间的遗传距离分别为和，平均为。

基于基因序列构建的邻接法系统发育树树显示，同物种聚为同小支，分支自展值均为近缘种能聚集在起，且置信度很高。

结果表明，昆虫序列能够区分不同物种，基因片段的条形码进同种的和差异明显。

总的来说，叶蝉种类间的亲缘关系与形态学的划分基本致。

讨论对小叶蝉亚科的基因序列进行拼接与手工校正，并采用基因库中进行序列的相似性分析结果表明，所测序列都属于小叶蝉亚科，基因序列且同源性均在以上，说明此段序列准确性强可信度高。

同时，在小叶蝉亚科中，眼小叶蝉族和叉脉叶蝉族的亲缘关系较近，而小绿叶蝉族和斑叶蝉族的亲缘关系较远。

以线粒体基因序列信息为基础的条形码技术能有效地对形态特征变异丰富的小叶蝉亚科昆虫进行物种鉴定。

在此基础上，采用明该段序列的转换与颠换没有达到饱和，般在建立系统发育树时需要考虑转换与颠换的发生比率说明该段基因准确度高，运用该基因得到的进化树是具有准确性的。

遗传距离从表看出，小绿叶蝉族叶蝉物种间的遗传距离为，眼小叶蝉族间的种内改为间遗传距离删除相差最大，为。

不同叶蝉物种间的遗传距离在，物种间的平均遗传距离为，其中近缘种叉脉叶蝉族与小叶蝉亚科间的遗传距离最小，为蛇葡萄斑叶蝉和眼小叶蝉族间的遗传距离最大，为。

由此可知，相同叶蝉物种间不受地理位置的影响叶蝉同属种的种间遗传距离差异较明显，将此段序列运用于分析和鉴方法总提取取出无水乙醇保存的叶蝉标本，除去腹部和翅膀，然后将其余的动物组织使用无菌研磨棒将其磨成粉末状置于无菌的离心管中，然后按照动物组织快速提取试剂盒说明书提取总，检测样品的浓度和纯度后马上保存于冰箱备用。

探讨线粒体基因片段用于准确鉴定小叶蝉亚科昆虫种类的可行性昆虫学论文。

摘要目的为更进步研究小叶蝉亚科昆虫分子鉴定技术提供理论依据和实践基础。

结果与分析基因序列组成与变异叶蝉测序得到的结果及基因库下载的相关小叶蝉序列运用拼接剪切成统长度的片段，没有出现缺失和插入的情况。

变异位生教育创新计划项目贵州省熊康宁喀斯特环境研究生导师工作室黔教研合字贵州省科技厅自然科学基金重点项目中泰小叶蝉亚科物种多样性条形码及生物地理学研究黔科合基础。

摘要目的为更进步研究小叶蝉亚科昆虫分子鉴定技术提供理论依据和实践基础。

方法总提取取出无水乙醇保存的叶蝉标本，除去腹部和翅膀，然后将其余的动物组织使用无菌研磨棒将其磨成粉末状置于无菌的离心管中，然后按照动物组织快速提取试剂盒说明书提取总，检测样品的浓度和纯度后马上保存于冰箱备用。

动物组织快速提取试剂盒序列能够区分不同物种，基因片段的条形码进行小叶蝉亚科昆虫分类鉴定具有可行性。

参考文献公基因在鱼类物种鉴定与分类中的应用舟山浙江海洋大学，韩娟，黄敏雅小叶蝉属种昆虫的染色体研究半翅目叶蝉科小叶蝉亚科小叶蝉族英文昆虫分类学报，席晓晴，鲍宝龙，章守宇条形码在鱼类胃含物种类鉴定中的应用上海海洋大学学报，刘勇，宋毓，李晓宇基于线粒体基因的条形码技术在昆虫分子鉴定中的应用植物检疫，张媛，郭晓华，刘广纯，等条形码在鞘翅目昆虫分子系统学研究中的应用应用昆虫学叶蝉亚科昆虫进行物种鉴定。

在此基础上，采用双参数模型建立而成的树，相同叶蝉物种类型聚为同小支，且分支自展值为叶蝉物种间的近缘种聚集在起，置信度相对较高不同叶蝉物种间差异表现较明显，置信度较高，系统进化树得出的结果与叶蝉的形态学分类结果基本致，可以满足叶蝉种类分类鉴定的需要。

基于线粒体基因的条形码技术是可以作为小叶蝉亚科物种鉴定的有利工具，对小叶蝉亚科昆虫分子鉴定具有可行性。

图邻接法构建的小叶蝉亚科部分种的系统发育树结论叶蝉测序得到的结果及基因库下载的相叶蝉同属种的种间遗传距离差异较明显，将此段序列运用于分析和鉴别物种的依据具有可行性。

表小叶蝉亚科的核苷酸碱基替换值表种小叶蝉种内的种间遗传距离及标准误差系统发育树的构建从图看出，两种外群眼小叶蝉族与小绿叶蝉族位于树的基部，说明，叉脉叶蝉族和眼小叶蝉族种类亲缘关系较近且较原始，这与形态学分类相致。

与内群其他小叶蝉亚科种类分开。

不同两个外群种均属小叶蝉亚科，聚为同支，形成姐妹群，且分支自展值均为在内群中，近缘种能聚集在起，如和两个未分类的小叶探讨线粒体基因片段用于准确鉴定小叶蝉亚科昆虫种类的可行性昆虫学论文，北京全式金生物技术有限公司。

，模板，上下游引物各，加，总共。

主要反应过程预变性变性，退火，延伸，共有个循环最后延伸。

产物通过琼脂糖凝胶电泳检测合格后由上海生物工程有限公司进行直接测序。

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动物组织快速提取试剂盒，北京全式金生物技术有限公应用中国人兽共患病学报，张静，李渊，宋娜，等我国沿海棱鳀属鱼类的物种鉴定与系统发育生物多样性，常虹，郝德君，肖荣堂，等基于线粒体基因的齿小蠹属昆虫条形码研究昆虫学报，游小花基于线粒体基因蚊类库蚊条形码技术研究福州福建农林大学，高娅蓉，熊康宁，袁周伟，苑晓伟，谭超，陈晓晓，宋月华基于线粒体基因的条形码技术对小叶蝉亚科昆虫种类的分子鉴定西南农业学报，基金贵州省教育厅自然科学研究招标计划项目梵净山斑叶蝉物种多样性及其与寄主植物的协同进化关系黔科合字贵州省研究用拼接剪切成统长度的片段，没有出现缺失和插入的情况。

变异位点为个，保守位点个，简约信息位点个，自裔位点个。

整个序列结构中和碱基组成的含量分别为和。

含量为，明显高于含量，呈现出明显的碱基偏好，满足昆虫线粒体基因碱基组成的基本特征。

表小叶蝉亚科线粒体基因片段信息碱基替换从表看出，全部位点的转换产生于和间，颠换主要发生在与间，转换颠换比值为。

密码子位点分析，转换与颠换主要产生在密码子第位点，为，转换与颠换数值邻近，符合昆虫线粒体特别属性，替换主要产生在密码子第位点。

第报，戴仁怀，李虎，李子忠中国尖尾叶蝉属新种记述半翅目叶蝉科广头叶蝉亚科西南大学学报自然科学版，胡泽章，孙猛，吕兵，等条形码技术在小花蝽属昆虫分类鉴定中的应用中国生物防治学报，易啸，王攀攀，王军，等基于线粒体的条形码在对虾科种类鉴定中的研究水产学报，宋月华，李子忠新小叶蝉属新种及新纪录种记述半翅目，叶蝉科，小叶蝉亚科英文动物分类学报，马英，李海龙，何建，等基于线粒体基因的青海省种蚤类的分子鉴定及系统发育分析昆虫学报，方义亮，张建庆，肖武，等条形码技术在麻蝇亚科鉴定中关小叶蝉序列运用拼接剪切成统长度的片段，没有出现缺失和插入的情况。

变异位点为个，保守位点个，简约信息位点个，自裔位点个。

整个序列结构中和碱基组成的含量分别为和。

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转换与颠换结果显示该段序列没有饱和，可以得到准确的进化分析。

同物种间与不同物种间的遗传距离分别为和，平均为。

基于基因序列构建的邻接法系统发育树树显示，同物种聚为同小支，分支自展值均为近缘种能聚集在起，且置信度很高。

结果表明，昆种类，其置信度也很高。

同族间的和亲缘关系最相近，不同种的和差异明显。

总的来说，叶蝉种类间的亲缘关系与形态学的划分基本致。

讨论对小叶蝉亚科的基因序列进行拼接与手工校正，并采用基因库中进行序列的相似性分析结果表明，所测序列都属于小叶蝉亚科，基因序列且同源性均在以上，说明此段序列准确性强可信度高。

同时，在小叶蝉亚科中，眼小叶蝉族和叉脉叶蝉族的亲缘关系较近，而小绿叶蝉族和斑叶蝉族的亲缘关系较远。

以线粒体基因序列信息为基础的条形码技术能有效地对形态特征变异丰富的点位点和第位点的分别为和。

整体与密码子各位点的均小于，表明该段序列的转换与颠换没有达到饱和，般在建立系统发育树时需要考虑转换与颠换的发生比率说明该段基因准确度高，运用该基因得到的进化树是具有准确性的。

遗传距离从表看出，小绿叶蝉族叶蝉物种间的遗传距离为，眼小叶蝉族间的种内改为间遗传距离删除相差最大，为。

不同叶蝉