产业提升项目广东省农业厅农业科技创新项目佛山市南海区蓝海人才计划项目资助。

橙皮苷在柑桔属的果皮中含量丰富，而我国是柑桔属果树种植和产量的第大国，因此提高其综合利用率对增加产业附加值具有重大意义。

橙皮苷溶解性极低，人体较难吸收，生物利用率低，表现出相对较弱的药理作用。

研究表明，黄酮类化合物脱掉部分糖苷或者全部，推测与在宿主的糖基化或表达量有关，其次与分泌表达后的降解率相关。

对者表现出的酶活差异，后续相关研究将采用重组菌进行优化发酵生产，为其进步应用于以橙皮苷为底物生产橙皮素单葡萄糖苷奠定基础。

图异源表达活性检测结论鼠李糖苷酶在天然产物的转化应用中具有重大价值，从不同水平对其进行研究，可以为其在食品医药行业上的产业化应用提供理论基础。

以可耐热生长的探讨鼠李糖苷酶的应用与重组表达遗传工程论文扩增时，目的基因将变成的片段。

结果表明，基因实现与毕赤酵母基因组成功整合。

图结果显示阳性菌株只在左右出现目的基因条带，由于基因大小约为，当重组载体整合于基因组后，基因与两端序列同源臂结合，在扩增时目的基因将变成的片段，而细胞本身不具有基因，因此只出现条条带。

结果表明，基因实现与葡萄糖苷的活性，为研究的水解橙皮苷的活性提供了进化理论基础。

图系统发育进化树基因克隆将克隆至载体上。

图是使用引物进行菌液鉴定的结果，可以得到约大小的片段，测序正确。

对构建成功的重组菌命名为，保留菌种，培养，提取质粒图。

图克隆及质粒提取构建重组表达毕赤酵母菌线性化苷溶液中，恒温反应，加入等体积的乙酸乙酯抽提，取上层有机相，经真空浓缩后，反应产物溶解于甲醇中，结果用检测。

结果与分析序列分析检索数据库，属于家族，具有个氨基酸残基和糖基化位点，无信号肽序列，包含个超家族保守结构域，其中可能与识别底物有关，另个保守结构域与其生物活性相关。

与序列同源性为与序列同源性为方法序列分析由数据库，获知个已鉴定结构鼠李糖苷酶。

在中获知其氨基酸序列，利用软件进行氨基酸多重序列比对，再通过对比对结果进行渲染，最后用软件制作分子进化树。

探讨鼠李糖苷酶的应用与重组表达遗传工程论文。

摘要以来源于的鼠李糖苷酶为目标，将重组于毕赤酵母细程上海股份有限公司型电转仪，购自美国公司型高效液相色谱，购自安捷伦科技有限公司。

异源表达利用酶线性化质粒，回收后将其电转化毕赤酵母和毕赤酵母中。

经过含的培养基筛选，挑选单克隆裂解后以通用引物进行鉴定，将正确的阳性克隆命名为和。

探讨有个氨基酸残基位点高度保守经结构分析推测和在底物结合方面与生物催化活性上起重要作用系统发育进化树结果显示与属于同个进化分支。

叶德晓，李慧灵，林育成，邓诚，陈宏基，周金林鼠李糖苷酶基因的重组表达及其应用生物化工，基金佛山市高新区科技产业提升项目广东省农业厅农业科技创新项目佛山市南海区蓝海人才计划项目资助。

摘要以来源于进行检测。

图检测结果显示，和异源表达得到的粗酶液均对橙皮苷有水解活性，转化率分别为和，表达得到的酶活相对更强。

两种不同宿主表达出来的活性存在差异，推测与在宿主的糖基化或表达量有关，其次与分泌表达后的降解率相关。

对者表现出的酶活差异，后续相关研究将采用重组菌进行优化发酵生产，为其进步应用于以橙皮苷为底图结果显示阳性菌株在出现条带以及在左右出现目的基因条带，由于基因大小为，当重组载体整合于基因组后，基因与两端序列同源臂结合，在扩增时，目的基因将变成的片段。

结果表明，基因实现与毕赤酵母基因组成功整合。

图结果显示阳性菌株只在左右出现目的基因条带，由于基因大小约为，探讨鼠李糖苷酶的应用与重组表达遗传工程论文鼠李糖苷酶的应用与重组表达遗传工程论文。

材料与方法材料克隆宿主大肠杆菌表达宿主毕赤酵母和毕赤酵母表达载体均为实验室保存。

实验所用酵母粉蛋白胨氯化钠山梨醇琼脂粉琼脂糖磷酸氢钠和柠檬酸钠等试剂均为分析纯，购自生工生物工程上海股份有限公司型电转仪，购自美国公司型高效液相色谱，购自安捷伦科技有限公。

方法序列分析由数据库，获知个已鉴定结构鼠李糖苷酶。

在中获知其氨基酸序列，利用软件进行氨基酸多重序列比对，再通过对比对结果进行渲染，最后用软件制作分子进化树。

材料与方法材料克隆宿主大肠杆菌表达宿主毕赤酵母和毕赤酵母表达载体均为实验室保存。

实验所用酵母粉蛋白胨氯化钠山梨醇琼脂粉琼脂糖磷酸氢钠和柠檬酸钠等试剂均为分析纯，购自生工生物保守，其中和在底物结合方面和生物催化活性上起到重要作用，。

图的系统发育进化树表明，和进化关系相近，属于个进化分支，研究报导具有水解橙皮苷为橙皮素单葡萄糖苷的活性，为研究的水解橙皮苷的活性提供了进化理论基础。

图系统发育进化树基因克隆将克隆至载体上。

图是使用引物进行菌液鉴定的结果，可以得到的鼠李糖苷酶为目标，将重组于毕赤酵母细胞中，成功构建重组表达菌株和。

经甲醇诱导发酵后得到粗酶液，所得粗酶液均具有催化橙皮苷水解为橙皮素单葡萄糖苷的活性，转化率分别为和。

因此，更有利于表达，在催化生产橙皮素单葡萄糖苷及其他天然产物上有良好的应用潜力，可为产业化生产新橙皮苷及奠定物质基础生产橙皮素单葡萄糖苷奠定基础。

图异源表达活性检测结论鼠李糖苷酶在天然产物的转化应用中具有重大价值，从不同水平对其进行研究，可以为其在食品医药行业上的产业化应用提供理论基础。

以可耐热生长的的鼠李糖苷酶为目标，对其氨基酸序列进行分析，发现其含有个氨基酸残基，无信号肽序列，有糖基化位点和个保守超家族结构域。

序列比对显示与同源性较高，为多重序列比对结果显示重组载体整合于基因组后，基因与两端序列同源臂结合，在扩增时目的基因将变成的片段，而细胞本身不具有基因，因此只出现条条带。

结果表明，基因实现与毕赤酵母基因组成功整合。

图重组毕赤酵母鉴定酶转橙皮苷应用重组表达菌株和经甲醇诱导表达后，分离得到粗酶液。

以橙皮苷为底物进行反应，反应产物用约大小的片段，测序正确。

对构建成功的重组菌命名为，保留菌种，培养，提取质粒图。

图克隆及质粒提取构建重组表达毕赤酵母菌线性化质粒电转化至毕赤酵母和中，得到的重组表达菌株分别命名为和。

挑选单菌落通用引物进行菌落鉴定。

图为重组毕赤酵母菌液鉴定结果探讨鼠李糖苷酶的应用与重组表达遗传工程论文和糖基化位点，无信号肽序列，包含个超家族保守结构域，其中可能与识别底物有关，另个保守结构域与其生物活性相关。

与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为。

多重序列比对结果显示和的氨基酸残基高糖苷后，能被小肠更好地地吸收，以此来提高黄酮类化合物在人体的生物利用率。

利用鼠李糖苷酶将橙皮苷水解为橙皮素单葡萄糖苷，改善其溶解性，提高其生物利用率，可以加大其在食品和医药行业的运用范围另外，橙皮素单葡萄糖苷在鼠李糖转移酶的催化下生成新橙皮苷，新橙皮苷是合成天然甜味剂的关键中间体，在酸橙中含量低，提取工艺复杂，成本高。

因此，选用低成本的橙皮苷通过鼠李糖苷酶和鼠李糖转移酶转化得到新橙鼠李糖苷酶为目标，对其氨基酸序列进行分析，发现其含有个氨基酸残基，无信号肽序列，有糖基化位点和个保守超家族结构域。

序列比对显示与同源性较高，为多重序列比对结果显示有个氨基酸残基位点高度保守经结构分析推测和在底物结合方面与生物催化活性上起重要作用系统发育进化树结果显示与属于同个进化分支。

叶德晓，李慧灵，林育成，赤酵母基因组成功整合。

图重组毕赤酵母鉴定酶转橙皮苷应用重组表达菌株和经甲醇诱导表达后，分离得到粗酶液。

以橙皮苷为底物进行反应，反应产物用进行检测。

图检测结果显示，和异源表达得到的粗酶液均对橙皮苷有水解活性，转化率分别为和，表达得到的酶活相对更强。

两种不同宿主表达出来的活性存在差异质粒电转化至毕赤酵母和中，得到的重组表达菌株分别命名为和。

挑选单菌落通用引物进行菌落鉴定。

图为重组毕赤酵母菌液鉴定结果。

图结果显示阳性菌株在出现条带以及在左右出现目的基因条带，由于基因大小为，当重组载体整合于基因组后，基因与两端序列同源臂结合，在与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为与序列同源性为。

多重序列比对结果显示和的氨基酸残基高度保守，其中和在底物结合方面和生物催化活性上起到重要作用，。

图的系统发育进化树表明，和进化关系相近，属于个进化分支，研究报导具有水解橙皮苷为橙皮素单细胞中，成功构建重组表达菌株和。

经甲醇诱导发酵后得到粗酶液，所得粗酶液均具有催化橙皮苷水解为橙皮素单葡萄糖苷的活性，转化率分别为和。

因此，更有利于表达，在催化生产橙皮素单葡萄糖苷及其他天然产物上有良好的应用潜力，可为产业化生产新橙皮苷及奠定物质基础。

酶解橙皮苷分别加入为的磷酸氢钠柠檬酸缓冲液橙皮苷混匀，加入粗酶液到混合后的橙