列为类传染病之首，。

有个血清型，不同血清型间几乎不应特异性及敏感性精密性。

采用建立的方法及型抗体液相阻断检测试剂盒分别检测未知血清背景的份猪和牛血清，计算两者的符合率。

结果方法最适检测条件为抗原包被浓度，抗原包被温度及时间为过夜，血清稀释度为∶稀释度为∶封闭液为，封闭液作用时间为与血清作用时间为底物作用时间为。

份不同猪病的阳建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文蛋白的鉴定方法的优化结果最适抗原包被浓度及血清稀释度当抗原包被浓度为，标准阴阳性血清稀释度为∶时，值达最大，见表。

因此确定最适抗原包被浓度及血清稀释度分别为∶。

摘要目的建立型口蹄疫病毒，血清抗体的竞争检测方法，并进行验证。

方法采用型病毒样颗粒被温度和时间的优化结果抑制率最适封闭液封闭液为或的检测结果与血清已知背景相符，其他条件均不符，见表。

建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文。

符合率试验采用建立的方法及型抗体液相阻断检测试剂盒分别检测未知血清背景的份猪和牛血清，统计分析结果，计算两者的符合率。

结果型蛋白的鉴定结果检测值，计算值为阴性血清的值，为阳性血清值，以该值最大时作为最适抗原包被浓度和血清稀释度。

稀释度的确定采用方阵滴定法。

用最适抗原包被浓度和血清稀释度进行检测，将用按∶∶稀释，共个浓度，其他步骤同项，计算值，以值最大时作为最适稀释度。

表抗原包被浓度和血清稀释度的优化结果下载原表表抗原包被浓度和血清稀释度的优化结方法的建立将型按，孔洗涤次，加入封闭液，孔，于封闭洗涤次，同时加入标准阳性血清标准阴性血清待检血清用稀释及用稀释，均孔，振荡混匀，孵育洗涤次，加入，孔，显色加入终止液，孔，用酶标仪测定值。

方法的优化抗原包被浓度及血清稀释度的确定采用棋盘交叉滴定法。

将项，根据检测已知背景的血清计算出的抑制率，应用软件绘制曲线，选择敏感性和特异性均较高的作为阴阳性血清的判断标准值。

主要试剂及仪器酶标抗体，由型疫苗免疫家兔获得由兰州兽医研究所兽用纳米材料与应用实验室制备及保存标记的兔抗猪购自美国公司碳酸盐粉剂购自美国公司购自美国公司底物蛋白酶酶切后进行及鉴定。

鉴定时抗为型阳性猪血清∶稀释，抗为标记的兔抗猪∶稀释。

建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文。

血清与作用时间的确定采用最适抗原包被浓度抗原作用温度及时间封闭液封闭液作用温度及时间血清及稀释度进行检测，加入血仪检测值，计算值为阴性血清的值，为阳性血清值，以该值最大时作为最适抗原包被浓度和血清稀释度。

稀释度的确定采用方阵滴定法。

用最适抗原包被浓度和血清稀释度进行检测，将用按∶∶稀释，共个浓度，其他步骤同项，计算值，以值最大时作为最适稀释度。

主要试剂及仪器酶标抗体，由型疫苗免疫家兔获得由兰州兽医表。

方法的建立将型按，孔洗涤次，加入封闭液，孔，于封闭洗涤次，同时加入标准阳性血清标准阴性血清待检血清用稀释及用稀释，均孔，振荡混匀，孵育洗涤次，加入，孔，显色加入终止液，孔，用酶标仪测定值。

方法的优化抗原包被浓度及血清稀释度的确定采用棋盘交叉滴定法建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文购自美国公司型抗体液相阻断检测试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所其他试剂均为分析纯孔板购自美国公司。

型的鉴定将经蛋白酶酶切后进行及鉴定。

鉴定时抗为型阳性猪血清∶稀释，抗为标记的兔抗猪∶稀间进行检测，加入底物后，于分别作用。

每种条件下分别检测已知背景的份猪血清阳性或阴性，同时检测标准阳性血清及标准阴性血清，其他步骤同项，计算份待检血清样品的抑制率公式同项，根据抑制率分析统计结果确定底物的最适作用时间。

判断标准的确定采用优化方法检测已知背景的份猪血清，包括份型阴性猪血清和份型阳性猪血清。

计算各血清的抑制率公式同度当抗原包被浓度为，标准阴阳性血清稀释度为∶时，值达最大，见表。

因此确定最适抗原包被浓度及血清稀释度分别为∶。

建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文。

表抗原包被浓度和血清稀释度的优化结果下载原表表抗原包被浓度和血清稀释度的优化结果最适稀释度当稀释度为∶时，值达最大，见表。

因此确定最适稀释度为∶和后，于分别作用。

每种条件下分别检测已知背景的份猪血清阳性或阴性，同时检测标准阳性血清及标准阴性血清，其他步骤同项，计算份待检血清样品的抑制率公式同项，根据抑制率分析统计结果确定血清和的最适作用时间。

底物作用时间的确定采用最适抗原包被浓度抗原作用温度及时间封闭液封闭液作用温度及时间血清及稀释度血清和作用究所兽用纳米材料与应用实验室制备及保存标记的兔抗猪购自美国公司碳酸盐粉剂购自美国公司购自美国公司底物购自美国公司型抗体液相阻断检测试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医研究所其他试剂均为分析纯孔板购自美国公司。

型的鉴定将经。

将抗原型用碳酸盐缓冲溶液稀释为，每个浓度设个复孔，孔，包被过夜洗涤次，用溶液于封闭洗涤次，加入用按∶∶∶∶比例稀释的标准阴性血清及标准阳性血清，每个稀释度设个复孔，同时加入等体积的∶稀释，振荡混匀，孵育洗涤次，加入底物，避光显色加入终止液，用酶表稀释度的优化结果最适抗原最佳包被温度及时间当选用过夜或两种条件进行抗原包被，所检测出的试验结果与血清已知背景相符，其他条件下检测结果均与血清实际背景不符，见表。

由于蛋白于条件下稳定性更好，因此确定最适抗原最佳包被温度及时间为过夜。

表抗原包被温度和时间的优化结果抑制率最适封闭液封闭液为或的检测结果与血清已知背景相符，其他条件均不符，建立验证型口蹄疫病毒血清抗体竞争检测技术兽医学论文，大小与预期相符，见图的蛋白酶酶切产物可与型阳性猪血清发生特异性反应，于相对分子质量约和处可见特异性结合条带，见图。

表明蛋白可作为型竞争抗体检测方法的包被抗原。

图型的分析图型蛋白的鉴定方法的优化结果最适抗原包被浓度及血清稀释在交叉保护，这给的诊断和预防造成了极大困难。

个血清型中除型未见流行外，其他个血清型在全球范围内均有流行，其中型是引起暴发的主要病原菌。

据统计，年中国向上报型暴发次数累计次，涉及个省直辖市及自治区，造成了巨大的经济损失。

是口蹄疫病毒属成员，为单股正链病毒，其编码种结构蛋白和种非结构的蛋白性血清中，除份型阳性血清为阳性外，其他血清样品为阴性，该方法无交叉反应敏感性为，特异性为批内和批间精密性试验变异系数均。

该方法与口蹄疫型抗体液相阻断检测试剂盒检测结果的符合率为。

结论建立的方法具有良好的特异性及精密性，且操作简便，可用于型血清抗体的检测。

关键词型口蹄疫病毒传染病口蹄疫病毒病毒样颗粒竞争法血清抗体口蹄，作为包被抗原，建立用于检测血清抗体的竞争方法。

对方法的抗原包被浓度抗原包被温度及时间过夜血清稀释度∶∶∶∶稀释稀释度∶∶稀释封闭液种类不封闭封闭封闭脱脂乳封闭封闭液作用时间血清与作用时间底物作用时间进行优化。

同时验证方法的交叉蛋白酶酶切产物经分析，可见相对分子质量约和的目的蛋白条带，大小与预期相符，见图的蛋白酶酶切产物可与型阳性猪血清发生特异性反应，于相对分子质量约和处可见特异性结合条带，见图。

表明蛋白可作为型竞争抗体检测方法的包被抗原。

图型的分析图型果最适稀释度当稀释度为∶时，值达最大，见表。

因此确定最适稀释度为∶。

表稀释度的优化结果最适抗原最佳包被温度及时间当选用过夜或两种条件进行抗原包被，所检测出的试验结果与血清已知背景相符，其他条件下检测结果均与血清实际背景不符，见表。

由于蛋白于条件下稳定性更好，因此确定最适抗原最佳包被温度及时间为过夜。

表抗原将抗原型用碳酸盐缓冲溶液稀释为，每个浓度设个复孔，孔，包被过夜洗涤次，用溶液于封闭洗涤次，加入用按∶∶∶∶比例稀释的标准阴性血清及标准阳性血清，每个稀释度设个复孔，同时加入等体积的∶稀释，振荡混匀，孵育洗涤次，加入底物，避光显色加入终止液，用酶标