的分类鉴定中，表型特征是类重要的指标。

利用乳糖产生酮基乳糖是原生物型土壤杆菌的独有特征，本研究中培养基对原生物型土壤杆菌选择性不强，分离的株菌的酮基乳糖产生试验中仅有株为阳性。

培养基对原生物型表现出高度的选择性，这与等对澳大利亚农田土壤的分析结果是致的。

对亚碲酸盐保护，基金年山东省农业重大应用技术创新项目济南市泉城高端外国专家项目山东省科学院国际合作项目山东省重点研发计划。

对照菌株，含质粒，为产胭脂碱和农杆菌素碱的生物型致病性土壤杆菌菌株属非致病性土壤杆菌以上菌株均由澳大利亚阿德莱德大学教授提供。

感病土壤及樱桃根癌组织取样地点取样地点位于山东泰安岱岳区夏张镇尹家庄村金旺大樱桃专业合作社的樱桃种植基地，土壤类型为棕壤，经检测土壤中总氮磷钾和有机质的含量分别为和。

试验地块有连续年的中国樱桃育苗史，冠瘿病发病年，部分地块发病严重。

取样时，小心完整地挖出感病植株根部，取部分根际土臵于冰盒中。

然后清水清洗根部，用锋利的刀子取下瘤状组织，臵于冰盒中带回实验室。

根癌病原菌分离根部瘤状组织上病原菌分离采用常规分离法，选株扩增为阳性，与胡萝卜切片和番茄植株活体接种致。

植物根癌病的生物防治与病原菌携带的质粒类型密切相关，明确致病菌在侵染植物形成瘤状组织时产生的生物碱的类型，对筛选有效的生防菌至关重要。

如放射性土壤杆菌可利用章鱼碱和胭脂碱作为氮源，抑制由葡萄土壤杆菌引起的冠瘿病菌株可抑制由胭脂碱型章鱼碱型农杆菌碱型引起的冠瘿病工程生防菌可抑制胭脂碱型土壤杆菌引起的冠瘿病。

本研究利用方法检测的株致病菌均为胭脂碱型，与利用传统的高压纸电泳法鉴定结果致。

本研究分析表明，引起山东泰安大樱桃根癌病的主要致病菌为原生物型的土壤杆菌，产生的生物碱类型为胭脂碱型，可选用作为生防菌进行防治，这与本文作者前期的田间试验结果相致。

采用分子生物学方法确定病原菌的分类特征，可缩短鉴定时间，有助于病害早期诊断，为有针电力泰安樱桃根癌病致病菌分离与生物型鉴定研究果树园艺论文株都可使番茄茎部产生瘤状组织。

在试验过程中，为了不把瘤状组织与胡萝卜正常愈伤组织相混淆，只使用了基底面，因为正常愈伤组织总是生长在离体培养周或周以上的胡萝卜片的顶端表面。

在胡萝卜切片的基底面检测土壤杆菌的致病性是种比接种植株更严格的致病性检测方法。

本研究分别选择了株原生物型和型的菌株进行致病性检测，结果发现型病原菌以上具有致病性，而原生物型仅有有致病性，说明引起该地区冠瘿病的主要病原菌是原生物型。

在细菌鉴定及系统发育地位研究方面，是最常用的分子工具，通常认为同源性大于的细菌可视为同种，然而在土壤杆菌庞大的分支系统中，许多亲缘关系较远的菌株同源性大于，已不能准确地确定菌株的系统分类学地位。

基因是广泛存在于细菌中重要的持家基因，在重组和损伤修复过程中起关键作用，常用于包括土壤引起的葡萄根癌病具有防治效果等。

如何快速准确地鉴定出致病菌和致病菌的类型，对于种苗检疫病害预测预报和制订防治对策都具有重要意义。

图基于基因的樱桃根癌病菌系统发育树图病原菌个致病性相关基因的检测表致病土壤杆菌质粒的种生物碱类型分子检测致病菌质粒生物碱类型化学检测检测了原生物型和原生物型中株致病菌接种胡萝卜切片后，产生的瘤状组织生物碱的类型，结果发现株致病菌产生的冠瘿碱类型全部为胭脂碱型图，未检测到章鱼碱类的生物碱，由此认为分离的致病性土壤杆菌质粒类型均为胭脂碱型。

图菌株诱发胡萝卜产生的瘤状组织中生物碱类型的高压纸电泳图讨论以樱桃根部瘤状组织和感病土壤为研究对象，利用选择性培养基发现瘤状组织中原生物型土壤杆菌达到的数量级，原生物型菌数仅占根际土壤中原生物型根癌农杆菌为结合生物型检测鉴定出以上的致病菌属原生物型，只有株致病菌为原生物型。

根据质粒上致病相关基因保守序列设计对引物，株有致瘤活性菌株中株扩增到目的条带。

经分子生物学测定和高压纸电泳检测，所有致病菌株的质粒均为胭脂碱型。

建立了致病型土壤杆菌的分子生物学快速鉴定方法，为定向选择生防菌株提供基础。

关键词侵染植物根癌病樱桃生物型鉴定致病菌由致病性土壤杆菌，是严重的细菌性病害之，其寄主范围达百余科上千种植物。

在核果类浆果类坚果类果树和其他观赏植物中最易发生。

主要危害植物根茎侧根和枝干部位，典型症状是在受害植株的根部根茎处甚至茎上形成大小不的瘤状组织使植株发育受阻，影响果树苗木的生长。

土壤杆菌，属于细菌域，细菌界，变形细菌门，变形对的耐受程度将分离纯化的病原菌接种至含不同浓度的培养基中，培养以上观察待测菌株对的耐受程度，般原生物型的耐受程度高。

致病菌的分子生物学鉴定挑取在培养基上生长的待测菌株，接种至液体培养基中，摇床培养菌量约，采用细菌提取试剂盒，按照说明书的方法提取基因组。

通过凝胶电泳检测的质量并稀释至浓度为，分装并储存于用于进步分析。

致病菌的和基因的扩增测序选用细菌通用引物，和基因的通用引物序列分别为和养基上生长的为砖红色菌落，原生物型土壤杆菌只能利用赤藓糖醇作为碳源，在培养基上生长为乳白色菌落。

初步说明从泰安樱桃根癌组织和感病土样中分离的菌株以原生物型为主。

图樱桃瘤状组织中分离的待测菌株在和培养基上的菌落形态分离菌株的致病性检测从培养基上纯化出株菌株，上纯化出株菌株，分别接种胡萝卜切片和番茄枝条验证其致瘤活性。

结果显示上分离的株菌株只有株具有致瘤活性，接种周后可使胡萝卜次生木质部周围产生乳黄色的瘤状组织，也可使番茄茎部接种部位产生瘤状突起图从培养基上分离的株菌，除外，其他株均具有致瘤活性。

致病菌的生理生化检测任意选取株病原菌分离的株，分离的株，以有致病活性的为原生物型对照菌株，进行酮基乳糖生成等生理生化指标检测。

结果表明株中只有和对照菌株的酮基乳糖反应为阳性图，符合原生效果等。

如何快速准确地鉴定出致病菌和致病菌的类型，对于种苗检疫病害预测预报和制订防治对策都具有重要意义。

对的耐受程度将分离纯化的病原菌接种至含不同浓度的培养基中，培养以上观察待测菌株对的耐受程度，般原生物型的耐受程度高。

致病菌的分子生物学鉴定挑取在培养基上生长的待测菌株，接种至液体培养基中，摇床培养菌量约，采用细菌提取试剂盒，按照说明书的方法提取基因组。

通过凝胶电泳检测的质量并稀释至浓度为，分装并储存于用于进步分析。

致病菌的和基因的扩增测序选用细菌通用引物，和基因的通用引物序列分别为上的致病菌属原生物型，只有株致病菌为原生物型。

根据质粒上致病相关基因保守序列设计对引物，株有致瘤活性菌株中株扩增到目的条带。

经分子生物学测定和高压纸电泳检测，所有致病菌株的质粒均为胭脂碱型。

建立了致病型土壤杆菌的分子生物学快速鉴定方法，为定向选择生防菌株提供基础。

关键词侵染植物根癌病樱桃生物型鉴定致病菌由致病性土壤杆菌，是严重的细菌性病害之，其寄主范围达百余科上千种植物。

在核果类浆果类坚果类果树和其他观赏植物中最易发生。

主要危害植物根茎侧根和枝干部位，典型症状是在受害植株的根部根茎处甚至茎上形成大小不的瘤状组织使植株发育受阻，影响果树苗木的生长。

土壤杆菌，属于细菌域，细菌界，变形细菌门，变形菌纲，根细菌目，根瘤菌的高压纸电泳法鉴定结果致。

本研究分析表明，引起山东泰安大樱桃根癌病的主要致病菌为原生物型的土壤杆菌，产生的生物碱类型为胭脂碱型，可选用作为生防菌进行防治，这与本文作者前期的田间试验结果相致。

采用分子生物学方法确定病原菌的分类特征，可缩短鉴定时间，有助于病害早期诊断，为有针对性地开展生物防治提供理论基础。

参考文献王金生植物病原细菌学北京中国农业出版社，梁亚杰，赵家英，马德钦，等应用生物型放射土壤杆菌防治葡萄冠瘿瘤形成的研究微生物学报，魏艳丽李纪顺，等土壤杆菌对樱桃冠瘿病病原菌的抑制作用及田间防治效果植物保护，张克勤，译贵阳贵州人民出版社，虞剑平，蒋兴邨，邵启全质粒基因在单子叶植物石蒜和金针菜中的表达遗传学报，李茜，刘伟，郭荣君，等毛桃种子表面根癌土壤杆菌的荧光定量电力泰安樱桃根癌病致病菌分离与生物型鉴定研究果树园艺论文型特征，其他株致病菌的酮基乳糖反应均为阴性。

将株病原菌接种到含不同浓度的培养基上，经培养结果表明随着浓度的增加，所有待测菌株生长量都呈下降趋势，其中菌株和对照菌株对最敏感，的浓度可抑制其生长，其他菌株在的培养基上还可生长。

电力泰安樱桃根癌病致病菌分离与生物型鉴定研究果树园艺论文。

生理生化指标鉴定参照等的方法检测待测菌株的酮基乳糖产生及对的耐受程度等。

将分离纯化的病原菌接种至培养基上，臵于培养箱内培养至有明显菌落形成时，向平板上倒入试剂，室温放臵以上，如果菌落周出现黄色则为阳性，判断为原生物型。

培养基组分乳糖，酵母膏，琼脂粉，蒸馏水，。

试剂柠檬酸钠，蒸馏水为阳性，判断为原生物型。

培养基组分乳糖，酵母膏，琼脂粉，蒸馏水，。

试剂柠檬酸钠，蒸馏水。

结果与分析樱桃根癌病病原菌分离以阿糖醇和赤藓糖醇为碳源，分别制备选择性培养基和，相同土壤和瘤状组织样品经不同培养基培养，发现在培养基上菌落为乳白色，在培养基生长出的菌落呈砖红色图，且培养基上长出的菌落数比培养基上多。

在两种培养基上长出的大多数菌落呈圆形突起，边缘齐整，与土壤杆菌群落形态相似。

但也有个别菌落形态上存在差异，剔除差异大的单菌落后，检测的块不同樱桃根部瘤状组织上长出的菌落数平均为，上为感病土样在培养基上的菌落数为，培养基上几乎没有菌落生长。

等研究了原生物型土壤杆菌只能利用阿糖醇作为碳源，在是最常用的分子工具，通常认为同源性大于的细菌可视为同种，然而在土壤杆菌庞大的分支系统中，许多亲缘