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良。
前，猴耳环常用水乙醇甲醇为溶剂进行提取，提取后还需要进步纯化或者萃取才能得到有效部位，。
本课题从有效部位研究的角度出发，以多酚含量提取效率和分配系数为指标，优化双水相萃取工艺参的双水相萃取体系。
以多酚含量提取效率和分配系数为指标，考察料液比，下同乙醇质量分数和超声时间对猴耳环多酚提取的影响。
料液比固定乙醇质量分数为超声时间为，考察不同料液比∶∶∶∶∶∶∶对猴耳环多酚提取的影响。
结果显示，多酚含量随着料液比的变化∶∶呈先升高后降低的趋势，且在料液比∶时达到峰值提取效率随着料液比的变化∶∶呈先升高后降低再升高的趋势，且在料液比∶时达到峰值当料液比在∶∶范围内，分配系数较高且趋于平稳，详见图。
综合考虑，选择料液比为∶。
乙醇质量分数固定料液比为∶超声时间为猴耳环多酚改良型双水相萃取体系的建立中药学论文醇和硫酸铵共同竞争水，从而使乙醇在水中的溶解度降低而导致分层，其中上相是含硫酸铵的乙醇溶液，下相是含乙醇的硫酸铵溶液。
上相富含乙醇，有利于有效成分从药材中溶出释放，而大极性杂质则转移至下相水相。
但这提取方法会在分离提取的同时引入硫酸铵，因此有必要对双水相萃取体系进行改良。
前，猴耳环常用水乙醇甲醇为溶剂进行提取，提取后还需要进步纯化或者萃取才能得到有效部位，。
本课题从有效部位研究的角度出发，以多酚含量提取效率和分配系数为指标，优化双水相萃取工艺参数，并在此基础上，加入改良剂如乙酸乙酯正丁醇等建立改良型，联氮双乙基苯并噻唑磺酸铵盐均购自上海麦克林生化科技有限公司甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯化水。
方法与结果双水相相图的绘制根据浊点滴定法绘制双水相相图。
取定量的硫酸铵，加水超声功率，频率，下同使溶解，冷却至室温后加入适量乙醇，溶液由澄清变为浑浊静臵，振摇再静臵，均为浑浊，此时为相变点，记录体系总质量及乙醇质量加水约，体系由浑浊变为澄清静臵，振摇再静臵，均为澄清，即可进行下个相变点的测定。
重复上述操作，采用软件，以硫酸铵质量分数为横性的关联度分析取项下质量浓度为，按如下色谱条件进行分析以，为色谱柱，以甲醇为流动相磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱流速为，检测波长为，柱温为，进样量为。
其色谱图见图，峰面积见表。
以和的的倒数为参考数列多酚含量为评价数列色谱图中各色谱峰的峰面积为比较数列进行灰色关联度分析，结果见表表。
由表表可知，猴耳环多酚各色谱峰峰面积与猴耳环不同极性部位抗氧化活性的检测自由基清除实验取项下不同极性部位的系列样品溶液各，分别加入，混匀，暗处放臵后，在波长处测定吸光度，同法测定对照溶液样品无水乙醇和空白溶液水乙醇溶液的吸光度，计算样品对自由基的清除率。
自由基清除实验取项下不同极性部位的系列样品溶液各，分别加入工作液的溶液与，混匀，室温下避光反应后，在波长处测定吸光度，同法测定对照溶液样品无水乙醇和空白溶液水工作液的吸光度，计算样品对自与其比较，以乙酸乙酯乙醇混合溶液的改良型双水相萃取体系提取的萃取物中猴耳环多酚含量抗氧化活性均无明显差异，但得率和转移率显著升高。
综上所述，本研究成功建立了改良型双水相萃取体系，可步提取猴耳环中的多酚类成分，为多酚的提取和双水相萃取的应用提供了参考改良剂的筛选本研究结合药效学实验考察不同极性萃取剂对多酚富集情况的影响，选出最佳改良剂，以扩大两相极性差异，去除双水相萃取体系引入的硫酸铵。
样品的制备按项所得最优双水相萃取体系提取猴耳环多酚。
取上相依次加入等体积的石油醚乙酸乙酯和正丁醇，浓缩后于干燥环多酚溶出和纯化。
萃取物的成分比较取项下样品溶液各适量，按项下色谱条件进样分析，记录色谱图。
结果显示，上述种样品的色谱图基本致，详见图。
讨论猴耳环加入至双水相萃取体系后，在超声的物理效应下，多酚从植物细胞中快速释放扩散，并在上相富集，而杂质如多糖类蛋白类由于极性较大易富集于下相，以此达到提取纯化的目的。
本课题组前期曾对双水相萃取体系中的超声温度进行考察，发现随着温度的升高，双水相萃取体系的稳定性变差，在时不分相。
双水相萃取体系受分子间的作用力范德华力疏水作用分子间的氢键分子与分子之间电荷作干后用水复溶并稀释定容至量瓶中，分别得到石油醚乙酸乙酯正丁醇和水等个部位的样品溶液，质量浓度均为以生药量计。
取各部位样品溶液适量，用水稀释成质量浓度分别均为均以生药量计的不同极性部位的系列样品溶液。
猴耳环不同极性部位多酚含量的测定取项下不同极性部位的样品溶液，按项下方法测定多酚含量。
每份样品平行操作次。
结果显示，石油醚部位中未见多酚，乙酸乙酯部位中多酚含量最高，正丁醇部分次之，详见表。
萃取物提取指标和抗氧化活性的比较取项下样品溶液各适量，分别按照项下方法测定其中的多酚含量，按如下公式计算量浓度为，按如下色谱条件进行分析以，为色谱柱，以甲醇为流动相磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱流速为，检测波长为，柱温为，进样量为。
其色谱图见图，峰面积见表。
以和的的倒数为参考数列多酚含量为评价数列色谱图中各色谱峰的峰面积为比较数列进行灰色关联度分析，结果见表表。
由表表可知，猴耳环多酚各色谱峰峰面积与的关联猴耳环多酚改良型双水相萃取体系的建立中药学论文，用甲醇复溶并稀释定容至量瓶中剩余少量水层经烘干后用水复溶并稀释定容至量瓶中，分别得到石油醚乙酸乙酯正丁醇和水等个部位的样品溶液，质量浓度均为以生药量计。
取各部位样品溶液适量，用水稀释成质量浓度分别均为均以生药量计的不同极性部位的系列样品溶液。
猴耳环不同极性部位多酚含量的测定取项下不同极性部位的样品溶液，按项下方法测定多酚含量。
每份样品平行操作次。
结果显示，石油醚部位中未见多酚，乙酸乙酯部位中多酚含量最高，正丁醇部分次之，详见表。
猴耳环多酚改良型双水相萃取体系的建立中药学论文共同作用的结果。
本研究结果显示，乙酸乙酯可富集抗氧化活性贡献较大的多酚类成分，因此选择乙酸乙酯作为改良剂。
以乙酸乙酯乙醇混合溶剂配制的改良型双水相萃取体系提取猴耳环多酚的结果显示，萃取物中还含有较多的硫酸铵晶体而以乙酸乙酯乙醇混合溶剂配制的改良型双水相萃取体系提取猴耳环多酚的结果显示，上相中由于增加了有机溶剂的含量，扩大了两相的极性差异，使上相含水量降低，导致硫酸铵向下相转移，从而减少了硫酸铵的残留。
因此，选择乙酸乙酯乙醇混合溶液配制改良型双水相萃取体系。
回流超声提取法是中药最常用的传统提取方法，氧化活性的检测自由基清除实验取项下不同极性部位的系列样品溶液各，分别加入，混匀，暗处放臵后，在波长处测定吸光度，同法测定对照溶液样品无水乙醇和空白溶液水乙醇溶液的吸光度，计算样品对自由基的清除率。
自由基清除实验取项下不同极性部位的系列样品溶液各，分别加入工作液的溶液与，混匀，室温下避光反应后，在波长处测定吸光度，同法测定对照溶液样品无水乙醇和空白溶液水工作液的吸光度，计算样品对自由基的清除率。
用等影响，在超声和高温条件下，体系黏度和密度均会发生改变，从而影响分子间的作用力，故应严格控制在室温下提取。
灰色关联度分析对大小样本量和有无规律样本均同样适用，而且计算量小，十分方便，用于成分药效分析的优势明显，。
本课题组前期研究发现，猴耳环不同极性部位色谱峰峰面积与的呈负相关，因此本研究将的进行倒数转换，再进行灰色关联度分析。
结果显示，猴耳环多酚中各色谱峰与的倒数的关联度前位均大于，表明猴耳环的抗氧化活性与多酚类成分具有定的关联性，抗氧化活性可能是各成分得率和转移率得率，转移率，。
式中，为萃取物质量，为药材投料量，为萃取物中多酚含量，为药材中多酚含量。
按项下方法检测项下各样品溶液对和自由基的。
采用软件对数据进行统计分析，两两比较采用法，检验水准。
每样品平行份操作，结果见表。
由表可知，样品的得率超过，提示其中含有大量的硫酸铵，后续不再纳入分析。
样品中多酚含量和抗氧化活性组间比较差异均无统计学意义，但样品的得率和转移率均显著高于样品，说明加入适量的改良剂乙酸乙酯将有利于猴耳度前位均大于，表明猴耳环对和自由基的清除活性与其多酚含量具有定的相关性。
由图表可知，抗氧化活性贡献较大的多酚类成分大部分富集在猴耳环的乙酸乙酯部位。
综合考虑，选择乙酸乙酯作为改良剂。
改良剂的筛选本研究结合药效学实验考察不同极性萃取剂对多酚富集情况的影响，选出最佳改良剂，以扩大两相极性差异，去除双水相萃取体系引入的硫酸铵。
样品的制备按项所得最优双水相萃取体系提取猴耳环多酚。
取上相依次加入等体积的石油醚乙酸乙酯和正丁醇，浓缩后于干燥，用甲醇复溶并稀释定容至量瓶中剩余少量水层经烘或清除率的计算或清除率样品对照空白。
采用软件建立回归以计算半数抑制浓度。
结果显示，对自由基的清除活性由强到弱依次为乙酸乙酯部位正丁醇部位水部位石油醚部位，对自由基的清除活性由强到弱依次为乙酸乙酯部位正丁醇部位水部位石油醚部位，由此可见，乙酸乙酯部位对和自由基的清除作用最强，正丁醇部位次之，石油醚部位清除和自由基的较大，基本无抗氧化活性，详见表。
猴耳环不同极性部位色谱峰与抗氧化活性的关联度分析取项下质猴耳环多酚改良型双水相
猴耳环多酚改良型双水相萃取体系的建立（中药学论文）
