袭能力，肿瘤细胞必须丢失许多上皮细胞的表型，使上皮层能够发生。

发生的细胞，方面失去了上皮细胞的典型形态，上皮细胞之间的相互作用消失，组织结构也相对松散，立方上皮细胞转变为纺锤形纤维细胞的形态，并且表现出侵袭性另方面，细胞的基因表达谱也发生改变，上皮细胞的标志性蛋白如上皮性标志物下调，并获得间质性标志物转录检测细胞经过转染后迁移侵袭能力的变化。

结果发现与阴性对照相比，过表达可抑制宫颈癌细胞迁移与侵袭能力，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，可逆转宫颈癌细胞的。

摘要目的探讨抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用。

方法检测宫颈癌细胞经过沉默表达后标志物表达水平利用迁移与侵袭实验检测沉默表达所引起的宫颈癌细胞迁移与侵袭能力变化预测是直接的靶基因并用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性及检测表达后标志物的蛋抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用肿瘤细胞论文突变型载体中，与对照组相比，并未明显下调载体荧光素酶活性，差异具有统计学意义图。

然后，我们利用与检测细胞经过或处理后的蛋白表达水平与表达水平，结果显示可在蛋白表达水平与表达水平下调表达，而利用抑制宫颈癌细胞表达后可上调基因的蛋白表达水平与表达水平，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，是直接的靶基因。

过表达逆转宫颈癌细胞的为了证实是否参与宫颈癌细胞，我们用转染宫颈癌细胞，观察过表达示我们，参与调节宫颈癌细胞上皮间质转化，沉默可逆转这过程。

是类长约个核苷酸机体内源性表达的非编码小分子，具有时空特异性，并参与基因转录后水平的调控，可同时调控多个蛋白质编码基因以及多条与肿瘤生长凋亡转移相关的分子通路。

近年来，有越来越多研究显示参与调控机制。

本研究为了从的表达水平阐明调控宫颈癌细胞的分子机制，我们通过靶基因预测软件发现基因可能接受的直接调控，并用双荧光素酶实验及验证了是直接的靶基因。

抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺及处理后对顺铂耐药性检测。

结果发现，与单用顺铂组相比，宫颈癌细胞在经过及预处理小时后，顺铂诱导的细胞生长抑制效应显著增强。

单用顺铂组药物抑制率约为，顺铂联用组药物抑制率约为，顺铂联用组药物抑制率约为，实验重复次进行统计学分析，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，过表达及沉默能显著提高宫颈癌细胞对顺铂敏感性。

讨论上皮间质转化是指上皮细胞通过特定的程序转化为具有间质特性细胞的复杂生物学过程，其主要的特征表现为上皮性标志物下调，并获得间质性标志物转录抑制因子等表达。

，中培养小时。

将配臵好的顺铂加至细胞中，同时设臵空白对照组无细胞溶剂对照组，每组设臵个复孔。

加药后细胞培养小时，再检测药物毒性。

弃去培养基，每孔加入与培养基，注意防止气泡产生，用锡箔纸将孔板包被避光，放臵于培养箱中培养小时，用酶标仪于波长下检测值，计算药物抑制率。

药物抑制率加药组均值空白组均值溶剂对照组均值空白组均值。

细胞培养细胞用含有胎牛血清青霉素与链霉素的培养基培养，每日于显微镜下观察细胞状态生长情况。

待细胞处于对数生长期约密度，进行细胞传代。

从培养箱取出细胞后，于生物安全柜中弃细胞培养液，加入少许细胞用溶液将残余培养基洗净，弃去溶液后再加入适量胰蛋白酶，于培，。

提取细胞和组织总蛋白，测定其浓度及纯度后进行变性，等量上样后进行电泳。

用湿转法将电泳分离的蛋白转移至膜，脱脂奶粉溶液室温下封闭。

加入抗∶或∶后在孵育过夜，洗涤次，每次。

加入抗∶或∶室温孵育，洗涤次，每次。

液暗室发光显影，采集图像并分析。

细胞培养细胞用含有胎牛血清青霉素与链霉素的培养基培养，每日于显微镜下观察细胞状态生长情况。

待细胞处于对数生长期约密度，进下降从而逆转宫颈癌细胞。

分别利用迁移与侵袭实验检测沉默表达所引起的宫颈癌细胞迁移与侵袭能力变化，发现细胞在经过沉默基因表达后迁移侵袭能力均减弱。

结果提示我们，参与调节宫颈癌细胞上皮间质转化，沉默可逆转这过程。

是类长约个核苷酸机体内源性表达的非编码小分子，具有时空特异性，并参与基因转录后水平的调控，可同时调控多个蛋白质编码基因以及多条与肿瘤生长凋亡转移相关的分子通路。

近年来，有越来越多研究显示参与调控机制。

本研究为了从的表达水平阐明调控宫颈癌细胞的分子机制，我们通过靶基因预测软沉默提高宫颈癌细胞顺铂化疗敏感性肿瘤细胞获得特征后不但会增强其迁移侵袭能力，也会产生耐药特性。

所以，我们为研究过表达及沉默是否会影响宫颈癌细胞对顺铂化疗敏感性，我们利用实验进行宫颈癌细胞经过及处理后对顺铂耐药性检测。

结果发现，与单用顺铂组相比，宫颈癌细胞在经过及预处理小时后，顺铂诱导的细胞生长抑制效应显著增强。

单用顺铂组药物抑制率约为，顺铂联用组药物抑制率约为，顺铂联用组药物抑制率约为，实验重复次进行统计学分析，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，过表达及沉默能显著提高宫颈癌细胞对顺铂敏感性。

讨论抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用肿瘤细胞论文养箱中放臵约分钟，显微镜下观察细胞形态，待细胞变圆，轻拍即悬浮时，加入完全培养基终止消化，留细胞悬液补足培养基臵于培养箱中培养。

细胞转染待细胞处于密度时，按上述方法消化细胞，将细胞悬液按个细胞量接种至孔板中，待细胞生长至密度时转染，按说明书将转染入细胞，购自于公司，该产品属于公司商业产品。

按照法提取细胞和组织总，按照反转录试剂盒说明书将提取的总反转成。

按照试剂盒说明书进行反应。

结果以值形式得到，所有样本同时对靶和内参照进行扩增，反应体系为，每个样本重复盒说明书进行反应。

结果以值形式得到，所有样本同时对靶和内参照进行扩增，反应体系为，每个样本重复次。

抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用肿瘤细胞论文。

细胞侵袭实验将凝胶臵于过夜次日将液化的与培养基以∶的比例稀释。

将滤膜孔径为的小室放入孔板中在小室内加入稀释液，以包被滤膜将培养板臵于孵箱中，令包被液晾干。

剩余步骤同细胞迁移实验。

实验将处于对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化，完全培养基终止，进行细胞计数，调整细胞密度为，将细胞接种至孔板，每孔加入细胞悬液，于培养箱表达后可上调基因的蛋白表达水平与表达水平，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，是直接的靶基因。

过表达逆转宫颈癌细胞的为了证实是否参与宫颈癌细胞，我们用转染宫颈癌细胞，观察过表达是否会影响标志物的表达。

首先，我们利用检测发现可显著提高宫颈癌细胞中的表达水平，差异具有统计学意义图。

然后通过实验证实过表达可导致上皮属性标志物的蛋白表达水平显著升高，而导致间质属性标志物与的蛋白表达水平下调，差异具有统计学意义图。

检测也发现过表达行细胞传代。

从培养箱取出细胞后，于生物安全柜中弃细胞培养液，加入少许细胞用溶液将残余培养基洗净，弃去溶液后再加入适量胰蛋白酶，于培养箱中放臵约分钟，显微镜下观察细胞形态，待细胞变圆，轻拍即悬浮时，加入完全培养基终止消化，留细胞悬液补足培养基臵于培养箱中培养。

细胞转染待细胞处于密度时，按上述方法消化细胞，将细胞悬液按个细胞量接种至孔板中，待细胞生长至密度时转染，按说明书将转染入细胞，购自于公司，该产品属于公司商业产品。

按照法提取细胞和组织总，按照反转录试剂盒说明书将提取的总反转成。

按照试剂件发现基因可能接受的直接调控，并用双荧光素酶实验及验证了是直接的靶基因。

皮间质转化是指上皮细胞通过特定的程序转化为具有间质特性细胞的复杂生物学过程，其主要的特征表现为上皮性标志物下调，并获得间质性标志物转录抑制因子等表达。

是肿瘤细胞获得转移干细胞和化疗耐药特性的重要机制，此过程的诸多环节均受肿瘤微环境的影响。

是跨膜型信号素蛋白，是基因家族表达产物之。

有研究表明在中也发挥重要的调节作用。

但关于在宫颈癌细胞中是否参与调节与化疗耐药的研究目前尚不明确，所以本研究深入探讨的作用及其机制。

本研究中，我们发现沉默可使细胞表达升高，表达可导致标志物的表达水平呈现与蛋白表达水平相同的趋势变化，差异具有统计学意义图。

为了证实过表达是否会影响宫颈癌细胞迁移与侵袭能力，我们分别利用迁移与侵袭实验检测细胞经过转染后迁移侵袭能力的变化。

结果发现与阴性对照相比，过表达可抑制宫颈癌细胞迁移与侵袭能力，差异具有统计学意义图。

以上结果提示我们，可逆转宫颈癌细胞的。

抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用肿瘤细胞论文。

图沉默表达对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响结晶紫染色过表达及抑制逆转宫颈癌细胞上皮间质转化及增加对顺铂化疗敏感性的作用肿瘤细胞论文野生型载体，同时将上预测可能与结合的位点突变构建突变型载体。

将分别与野生型或突变型载体共转入细胞，结果发现可显著下调野生型载体的荧光素酶活性，而在突变型载体中，与对照组相比，并未明显下调载体荧光素酶活性，差异具有统计学意义图。

然后，我们利用与检测细胞经过或处理后的蛋白表达水平与表达水平，结果显示可在蛋白表达水平与表达水平下调表达，而利用抑制宫颈癌细胞抑制因子等表达，。

是肿瘤细胞获得转移干细胞和化疗耐药特性的