全匹配。所有的结果都显示在图中。对于全匹配，几乎没有观察到什么响应数据未显示。该回应的单碱基错配，但反应明显小于全匹配图。对应背景荧光上观察到的发光强度，杂交的全匹配和在溶液中的单碱基错配的分别提高了倍和倍，这表明对目标序列的选择性比较高。两个碱基错配寡核苷酸显现出了个接近五分之分子信标中加入与环状区互补的目标链后，分子信标可与目标链形成相对刚性并且更加稳定的体系，使茎状部分碱基互补链被拉开，分子信标茎状部分中的空缺位点遭到破坏，荧光恢复。从四个碱基错配寡核苷酸的响应是可以忽略的，就像是从完全互补的寡核苷酸的响应。图含有双碱基错配的目标链对荧光强度的恢复结论荧光强度波长在这次试验研究中，将传统的分子信标结构改变，延长分子信标茎状部分并在其中设计个空缺位点，使得荧光杂环小分子可以与空缺位点对面的碱基特异性结合，来构建非标记信号增强型荧光分子信标。在这个过程中，由于与碱基结合后，结构发生变化，使得的荧光会发生淬灭。向分子信标体系加入与环状部分完全互补的目标链，通过荧光检测，发现荧光有定的恢复。同时也考察了含有错配碱基的目标链对荧光的恢复。实验结果表明，完全互补的目标链可以很明显的与含有错配碱基的目标链区分。当非标记分子信标增加时与全匹配杂交产生强烈荧光现象，然而，荧光强度稍微点点的增加都会导致得到不匹配的序列。因此，非标记的分子信标在这项研究中是有用的探针，可以用来区分他们的目标,,,,,黄留玉最新技术原理方法及应用第二版，北京化学工业出版社，刘森聚合酶链反应第版,北京化学工业出版社，刘明钟原子荧光光谱分析第版，北京化学工业出版社，静国忠基因工程及其分子生物学基础分子生物学基础分册第二版北京北京大学出版社，谢辞本论文是在宝鸡文理学院化学化工学院张红鸽老师的指导下完成的，值此论文完成之际，我谨向张老师以及所有给予我帮助关心我进步的老师和同学表示诚挚的感谢。回想这段时间，由于开始理论知识的不足，还有实验操作方面的不熟练，在自己的实验过程中遇到了很多问题，然而在面对个个的问题和解决的过程中，也让我学到了很多东西。不但丰富了自己的理论知识，同时实验技能也得到了很大的提高。值此之际，衷心的感谢我的指导老师张红鸽老师，在整个毕业论文的完成中，给了我很大的支持和鼓励，也经常询问我的实验情况，并给予我所需要的帮助。同时，我也感谢和我起在进行毕业论文实验的同学，大家互相讨论，互相学习，互相帮助，得到共同提高。通过这次毕业论文，我的实验操作能力和综合能力都有所提高，对于我今后的学习和工作都将是宝贵的财富,总之，论文的完成凝聚着众多帮助过我的老师和同学的汗水和希望，敬请让我留存于心，在将来的生活和学习中，我会加倍努力表达对他们的诚挚谢意。在此即将毕业之际，祝福学校，祝福老师，祝福同学，祝福所有的人,有志者，事竟成，破釜沉舟，百二秦关终属楚苦心人，天不负，卧薪尝胆，三千越甲可吞吴。共勉,和单碱基错配的序列。不同于传统的分子信标，在这项研究中的非标记的分子信标和其他有用的功能的测试效果都是比较显著的。在使用分子信标进行碱基错配分析时，对错配位点的位置没有特别的要求，改变错配碱基的位置，并不能改变分子信标的特异性，也不会影响反应结果的准确性，同时证明了分子信标比普通线性核酸探针的应用具有更大的灵活性，所以分子信标的应用前景是非常广阔的。参考文献,,,,,,,,,,,,,配两碱基错配四碱基错配非互补结果和讨论非标记分子信标的设计如图所示，非标记分子信标是由个小的荧光分子组成的，含有个核苷酸的链，并含有个核苷酸的链。链是个碱基序列互补的斜体由个碱基构成在末端的上。合成体，是由胞嘧啶的相反的缺口位点组成，个发夹结构下划线基地组成的个碱基对干和个环序列斜体下划线的基地和写，是由退火溶液和构成的。把氨基三甲基,萘啶添加到复合溶液形成更复杂的氨基三甲基,萘啶溶液。上面描述的就是非标记分子信标的设计，称之为。通过对氨基三甲基,萘啶的实验，不成对的胞嘧啶将会在复杂的缺口位点紧密结合，导致其荧光猝灭。个打开的发夹结构将会从中释放出氨基三甲基,萘啶。探针的表征为了证明所示的方法的可行性，我们评估了的荧光在遗传微粒上的缺失以及在目标基因变化后的荧光情况。图显示了氨基三甲基,萘啶的荧光光谱在含有氯化钠和四乙酸二氨基乙烯的的二甲胂酸钠缓冲溶液变化情况。在分子的复杂结构情况下，氨基三甲基,萘啶荧光表现出的发射波段在处的和最多曲线。然而，氨基三甲基,萘啶除了比分子结构复杂外图，曲线，其荧光表现出显著的猝灭现象，氨基三甲基,萘啶的荧光从减少到。在氨基三甲基,萘啶的荧光强度略有下降时，观察到个的，或完全匹配的双链的存在。个小的荧光分子可以通过氢键的为成对碱基结合在双链上。这导致分子的荧光猝灭。这些结果表明，氨基三甲基,萘啶纳入分子结构的复合物的干基部分的缺口位点中，是通过氢键来结合胞嘧啶的。在对的其他的的反应进行研究，如图所示，在加入的目的后，氨基三甲基,萘啶的荧光强度在恢复了倍图，曲线。当可以被分配到另外的目标时，增加回收氨基三甲基,萘啶荧光的强度。影响的考察fl这些结果表明，虽然在氨基三甲基,萘啶和胞嘧啶碱基之间互补的氢键发挥了很重要的作用，但是缺口位点依然对荧光猝灭效率产生了影响。所荧光强度波长以在中我们选择和的缺口位点。在紫外线范围内的光谱可以用来监测的构象转变。如果确定的构象发生变化，结合后的氨基三甲基,萘啶在复杂的茎部分的缺口位点，镉的实验进行了复杂之前和之后的氨基三甲基,萘啶结合。在没有氨基三甲基,萘啶和遗传微粒时，分子结构的复合物显示在处取得负峰值，在处取得正峰值，这是在个茎