酸的含量测定标准曲线为，其中纵坐标为峰面积，横坐标表示聚苹果酸浓度。发酵液的前处理取复筛目标菌株的发酵液经离心后，各取上清液，加入等体积的，水解，用于后续的聚苹果酸检测。发酵液上清水解液的稀释经水解后的水解液，在离心，取上清，加入到加有纯水的离心管中。进样用微孔滤膜过滤入进样瓶中，选用自动进样进行进样，以每个样品跑样。数据处理根据苹果酸的含量测定标准曲线为处理得如图表和图结果稀释倍数为倍表出芽短梗霉摇瓶发酵水解液中聚苹果酸含量表编号峰面积聚苹果酸含量聚苹果酸含量平均值丙丙丙丙丙丙丙丙丙丙丙丙图不同诱变株摇瓶发酵液中聚苹果酸含量平均值图结果与讨论结果经摇瓶复筛，结果如图和表所示，在株用于复筛的突变株中，只有丙的聚苹果酸产量比出发菌株的产量提高了，较野生菌株提高了，较大程度的提高了出芽短梗霉的聚苹果酸产量，证明了猜想。其余三株突变株聚苹果酸产量虽不及，但相对于原始菌都有定程度的提高。讨论本实验中，最初在深孔板复筛后得到的四株高产菌丙丙丙丙中，经摇瓶发酵验证，只得到了株丙高产菌。由于丙二酸的浓度均为，说明本实验中紫外诱变的最佳剂量是照射。紫外照射时致死率为，符合致死率在及稍低剂量。照射和的致死率为，存活率仅为，在丙二酸筛选条件下此时的致死率有可能过高，导致菌株存活率较低。般情况下，在存活率约的诱变条件下，诱变效果较好，适于筛选突变菌株。品学报,,程若东,王浩,周华,等出芽短梗霉积累聚苹果酸途径及调控研究化工学报徐志平复合诱变出芽短梗霉选育普鲁兰高产菌株湖北大学,靳建忠,王慧娟,孔维甲,葛海涛,张宁,李炳学紫外诱变选育出芽短梗霉高产普鲁兰糖白化突变菌株食品科学孟国庆头孢菌素高产菌株选育及发酵特性研究山东轻工业学院,孙波,徐宁以玉米粉为原料乳酸高产菌株的选育和产酸条件的研究食品工业,周其洋酱油生产菌菌种改良及其工艺的研究江南大学,孟国庆,赵林,戴秀君,李越中,李世旭,刘新利头孢菌素高产菌株的推理选育中国抗生素杂志王昆蓉,谢云,张洪兰,冉启平,俞岩青制霉菌素预处理选育麦考酚酸高产菌株中国抗生素杂志王光耀高产率生产乳酸拟干酪乳杆菌的高通量选育方法建立及应用上海华东理工大学，王光耀,刘慧兰,王永红,储炬,张嗣良高通量选育高速率产乳酸拟干酪乳杆菌食品工业刘慧兰产乳酸耐高温凝结芽孢杆菌的诱变及进化选育华东理工大学,昝占全生物质资源发酵生产药用高分子材料聚苹果酸的研究西南大学,吴天祥,陈岩复合诱变曲霉选育高产壳聚糖菌株及培养及优化中国酿造,孔板复筛与摇瓶复筛结果有定的差距，原因可能是深孔板因为是高通量筛选，虽然操作简便，但由于每孔只有培养基，操作过程比较小的差错可能就会造成比较大的误差，所以结果与摇瓶结果相比有很大差距。本实验利用菌种选育的两方面，即菌种诱变和目的菌的筛选。筛选方面，首先是丙二酸的压力筛选，丙二酸筛选聚苹果酸高产菌是通过影响菌株琥珀酸脱氢酶的活性进而的过程来影响代谢产物苹果酸的产量,从而影响聚苹果酸的产量。再经过溴甲酚绿变色圈法初筛，得到株变色圈直径与菌落直径比值较出发菌大的菌株，而最后摇瓶结果显示只有株聚苹果酸高产菌。原因可能是初筛整个过程都是人工操作，没有比较精准的检测方法，采用的是的直尺，最小刻度为，直接测直径的大小，其中存在很多偶然性因素影响读数，最终产生的误差比较大。而摇瓶发酵最后的结果是通过精密度比较高的获得，误差相对比较小，结果比较接近事实产量。第章结论通过本实验，主要得到以下结论经紫外诱变丙二酸筛选获得了聚苹果酸高产突变株丙，摇瓶发酵产量达，比出发菌株提高了，比野生菌提高了，为工业化生产打下了基础。此种选育方法证明了丙二酸耐受性菌株确实能够定向选育出聚苹果酸高产菌，克服了随机筛选的盲目性，提高了菌种筛选的效率。因出芽短梗霉是真菌，细胞壁比较厚，孢子对有害物质的耐受性强，对诱变剂不敏感，采用制霉菌素改变其细胞膜通透性的方法，提高出芽短梗霉对紫外线以及丙二酸的敏感性，有利于诱变筛选获得高产菌株。丙二酸是琥珀酸脱氢酶强有力的竞争性抑制剂，而琥珀酸脱氢酶是催化琥珀酸氧化成为延胡索酸进而促进三羧酸循环的酶，通过向出芽短梗霉的培养基中加入丙二酸，琥珀酸脱氢酶活性受到抑制，三羧酸循环即被阻断，使得线粒体内的柠檬酸大量积累，进而反馈抑制柠檬酸合酶的活性，使得草酰乙酸积累，则苹果酸脱氢产生草酰乙酸的平衡向生成苹果酸的方向移动，最终使得苹果酸大量积累。而苹果酸是发酵合成聚苹果酸的前体，苹果酸积累增多，聚苹果酸积累也会相应的增多。利用溴甲酚绿是酸碱指示剂的性质，聚苹果酸中含有多个羧基，具有较强的酸性，因此可以使溴甲酚绿产生颜色变化，而且不同浓度的酸对溴甲酚绿的颜色有影响，酸的浓度越大，溴甲酚绿初筛培养基的黄色越深。而且酸的浓度不同，变色圈的大小也不同。据此可以根据变色圈直径与菌落直径比值和培养基变色的深浅来初步筛选出聚苹果酸高产菌株。利用深孔板筛选聚苹果酸高产菌，既节省成本和降低实验操作复杂程度，又达到了高通量筛选的目的。参考文献戈进杰生物降解高分子材料及应用北京化学工业出版社，丁锐,李光吉生物高分子聚苹果酸及其衍生物的合成与应用前景高分子通报靳挺,李宁慧,方彦文,厉望,施亚芳,武玉学,尚龙安生物医用高分子材料聚苹果酸的生物合成及其代谢途径研究浙江大学宁波理工学院,余文兵，周华，韦萍生物降解材料聚苹果酸的合成方法及应用进展化工进展靳挺,武玉学,陈真,赵龙煜出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的研究中国得比较浑浊，而且瓶壁上有丝状悬浮物，取下三角瓶，用紫外可见分光光度计测定种子液的值，进而判断菌种生长情况。般大概是出芽短梗霉处于对数期的时候，生长最为旺盛。所以般取此时的菌种进行诱变等操作。出芽短梗霉的紫外诱变致死率曲线的制作取的菌液经已灭菌的垫有两层滤纸的漏斗过滤后，用无菌水稀释至。将的菌液稀释倍后加入经灭菌后的平板培养皿中，并加入灭菌的搅拌子，在电磁搅拌器搅拌作用下，的紫外灯管处紫外均匀照射。将紫外照射后的菌液在暗室红光下按每个平板菌液进行涂布。涂布后的平板需要放在避光，左右的环境中培养后观察结果，结果如表所示。其中，致死率对照组菌落总数处理后菌落总数对照组菌落总数注意由于紫外线照射过的细胞易发生光修复作用，培养时放在暗处或用黑纸黑布包裹进行避光培养表紫外照射时间与出芽短梗霉致死率的关系紫外时间致死率图紫外诱变时间对出芽短梗霉菌致死率的影响据孙波等研究报道在紫外诱变效应中，正突变常常出现在致死率较高的剂量。般致死率以或者更低剂量有利于正突变株的产生，诱变效果较好。由图可知，诱变处理时致死率大约在及稍