基为，但氨基酸序列完全致，栽培大豆及杂交后代中碱基序列与发表序列完全致。图从大豆中直接克隆全长片段全长片段连入载体后菌落检测，表达载体的构建用和双酶切克隆载体简称和表达载体简称质粒图，用琼脂糖凝胶电泳检测并回收酶切产物，连接每度过夜连接，构建表达载体图，将插入表达载体，获得携带的原核表达载体，经及酶切鉴定图，图正确。图重组质粒酶切电泳鉴定酶切电泳图泳道酶切，泳道,图和中基因全长序列与比对图谱图质粒检测，泳道泳道对照泳道泳道，双酶切连接图表达载体的构建图质粒酶切验证电泳图，泳道泳道双酶切和转化洋葱表皮细胞及荧光观察挑取分别含有和的大肠杆菌单菌落摇菌过夜，提取质粒，用事先准备好的金粉包裹质粒，将包裹好的质粒用基因枪轰击洋葱表皮，轰击后的洋葱表皮在培养机培养小时后荧光显微镜观察图。可以发现转入载体的洋葱表皮细胞，绿色荧光布满整个细胞，而插入基因的载体转化后的洋葱表皮细胞，可观察到中央大液泡占据了细胞大部分体积，液泡周围有强烈的荧光信号，细胞内的其它位置无明显荧光信号。图中的液泡由三个小液泡组成，液泡之间的膜结构清晰可见，我们判断逆向转运蛋白定位于液泡膜上，这与的研究结果致。基因的原核表达全长克隆利用试剂盒提取大豆总，反转录成，用特异引物和扩增，琼脂糖凝胶电泳检测，扩增片段与预期片断大小致，为图。分别将叶片中扩增出的连接载体，并进行菌液图及测序鉴定。图洋葱表皮荧光瞬时表达观察的瞬时表达的瞬时表达,图大豆中基因全长电泳图泳道基因全长泳道表达载体的构建用和双酶切和载体图，图，回收酶切产物，构建表达载体图，将插入表达载体，获得携带的原核表达载体，经及酶切鉴定图正确。图酶切泳道泳道图酶切鉴定泳道泳道图全长片段连入载体后菌落检测泳道基因全长泳道图酶切泳道，泳道酶切图原核表达载体的构建双酶切连接诱导表达将含有质粒的阳性克隆宿主菌经过夜培养。含有的菌株经的诱导，培养，取菌液离心收集菌体，提取细菌总蛋白上清液，经电泳图，在约处发现目的条带，而对照菌体没有，说明质粒成功在中正确表达出融合蛋白。讨论近年来研究表明，逆向转运蛋白在植物抗盐适应机制中起非常重要作用。植物逆向转运蛋白主要分为两种，种是以为代表的基因家族，这类基因表达的蛋白定位于质膜上，主要作用是将排除细胞，从而降低细胞内水平，维持植物的正常生理活动。另种是为代表的液泡膜逆向转运蛋白，这类主要是通过将区隔化到液泡内，从而维持细胞内离子平衡，保证细胞正常代谢活动进行。对克隆到的不同物种来源的逆向运转蛋白基因进行同源比较图质粒在中表达泳道和诱导和泳道和诱导和分析发现，液泡膜型逆向转运蛋白基因间具有高度同源性，质膜型逆向转运蛋白基因间也具有高度同源性，但质膜型和液泡型之间的同源性则较低，表明液泡型与质膜型的亲缘关系较远。植物液泡膜逆向转运蛋白对盐胁迫的表达特性也不相同，有的植物盐胁迫后表达量上升，但在根茎叶中表达丰度不同，有的植物诱导前后表达量不变，有的植物只有在盐胁迫下该蛋白才具有表达特性。半定量是目前研究基因转录水平的有效手段，并可进行定量分析，与传统的杂交相比较，具有特异性高操作简便可靠性强等优点。目前该技术已成功应用于检测多种基因的相对表达量汪以真等胡廷章等，。本研究使用半定量方法检测供试大豆材料根和叶中逆向转运蛋白基因在胁迫下水平上表达差异，结果表明，该基因在大豆中既有材料本身表达差异，也有盐胁迫后表达差异。即处理前，对盐敏感的栽培大豆叶和根中基因均有较高表达量，尤其是叶中更为显著。而耐盐性较强的野生大豆和杂交后代表达量均很低。在诱导后，和叶和根中基因的表达量均有显著增加，叶和根中基因的表达量也有所上升，但上升幅度没有和明显。