的电活性物质得到转化，但检出限可达，而且对各类电活性物质灵敏度差别很小选择性高。般只对电活性物质有响应，适用于电活性物质的痕量测量，而不受非电活性物质的干扰。由于每种物质的氧化还原反应的电位不同，对于具有不同电极电位的物质，只要在电解池的两极间施加不同的电压，就可以控制电极反应，提高选择性线性范围宽。般线性范围可达个数量级，对些体系线性范围甚至可达到个数量级④结构简单。不需要紫外可见光检测器的光学元件，造价和使用成本都很低检测池体积小，柱外效应较小，噪声低，响应速度快。根据电化学检测器的工作原理，原则上凡是具有电活性的化合物都可以用安培检测器来检测。目前，液相色谱电化学检测器已在活体代谢分析临床化学生物医学食品卫生的检查和环境等领域获得广泛的应用。采用衍生化技术，还可将它扩展到非电活性物质的检测。金利通等通过在流动相中添加抗坏血酸，成功的用于测定异丙醇异丁醇叔丁醇和戊醇及甲酸甲酯甲酸乙酯等非电化学活性的化合物。等用分子印记聚合体作为样品前处理装置，液相色谱电化学测定了水体中痕量激素双酚，灵敏度高，检测速度快。近几年，随着新检测池新的修饰电极的不断引入，液相色谱电化学检测的研究领域将进步被扩展。高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物中的应用高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物检测中的应用酚酸和黄酮类化合物是类重要的有机化合物，它们的酚羟基是优良的氢或中子的给予体，对能引起蛋白质或生物组织膜及各种细胞器因产生过氧化作用而导致生物体在分子水平细胞水平及组织器官水平的各种损伤的过氧化自由基羟基自由基等有明显的清除作用，从而保护了各器官的细胞结,。由于它特殊的生理作用，研究酚酸和黄酮类化合物的各种测定方法具有十分重要的意义。高效液相色谱法在酚酸和黄酮类化合物抗氧化活性研究中的应用酚酸和黄酮类化合物是类天然的抗氧化剂，评价其抗氧化能力方法的研究已被广泛的关注。自由基法和法可直接用于评价植物提取物抗氧化能力，其原理是当抗氧化剂与自由基发生反应后，反应体系的颜色发生变化。通过测定吸光度的变化来评价抗氧化剂清除自由基的能力。采用光度计仅能够评价样品的总抗氧化能力。另外，利用些反应例如反应也可以评价植物提取物的抗氧化能力，其原理是利用抗氧化剂与捕获剂同时与自由基竞争反应，通过捕获剂反应前后量的变化可以评价样品的总抗氧化能力。近年来，利用高效液相色谱法集分离和检测于体的特性，将高效液相色谱法应用于抗氧化的研究中，不仅能够快速识别复杂混合物中抗氧化成分，而且可以用于定量评价复杂混合物中单组分的抗氧化能力。郭华等利用技术，以苯甲酸作为羟基自由基捕获剂，根据加入中草药提取液前后苯甲酸改变量，从而间接测定了中草药提取液对羟基自由基的清除率。等采用稳定自由基在线测定了复杂混合物中的单个抗氧化剂，表明在线法是种快速高通量筛选抗氧化剂的方法。等利用联用技术，结合红外光谱和核磁共振谱，从黄秋葵植物提取物中鉴定出四种具有抗氧化活性的槲皮素糖苷类化合物。等采用从菊科植物中鉴定出两种具有抗氧化活性的黄酮类化合物。本论文研究的内容在本章中，简单介绍了酚酸和黄酮类化合物，综述了高效液相色谱检测器电化学检测器及高效液相色谱法在酚酸和黄酮类化合物研究中的应用情况。在第二章中，建立了同时测定酸枣提取物中没食子酸原儿茶酸咖啡酸香豆酸阿魏酸芦丁槲皮素杨梅酮高良姜素山奈酚种酚类化合物含量的法。在第三章中，在测定其提取物中总酚酸和总黄酮含量的基础上，利用体外性法测定各提取物的还原能力对的络合能力对自由基的清除作用及对羟基自由基的清除作用。参考文献,张囡,杜丽丽,王冬等中药酚酸类成分的研究进展,中国现代中药原使变成，生成蓝色的化合物，颜色的深浅跟多酚含量成正相关，因此可以通过该比色方法来对多酚进行定量测定。不同溶剂提取的酸枣中总酚含量见表从表可知，酸枣在水中提取后总酚含量最大，甲醇次之，丙酮最少。三种有机溶剂提取的酸枣总酚含量与其提取率成正相关，水提物的总酚含量明显偏高。酸枣的总黄酮含量采用硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,般与芦丁标准系列比较定量。不同溶剂提取的酸枣中总黄酮含量见表表不同溶剂提取的酸枣的总酚酸与总黄酮含量溶剂种类总黄酮含量总酚含量水甲醇丙酮注酸枣提取物中黄酮含量以芦丁酸枣果肉表示酸枣提取物中总酚含量以没食子酸酸枣果肉表示。从表可知，酸枣在水中提取后的黄酮含量最大，甲醇和丙酮含量相当。黄酮含量与提取率和溶剂的极性呈正相关，在水中提取的酸枣黄酮含量和总酚含量最高，说明水对它们的提取最有效。从表可知，相同溶剂提取过的酸枣酚酸含量明显高于黄酮含量，酸枣的相关抗氧化的性质可能会与酚酸的关系更大，酚酸在酸枣的抗氧化功能中可能起着更重要的作用。从不同提取溶剂提取的酸枣的提取率总黄酮总酚酸含量的测定结果来看，水溶剂的提取率最高，水提取物的总黄酮总酚酸含量最高，由此可以说水可作为酸枣提取的最佳溶剂。酸枣不同溶剂提取物对的还原能力在还原能力测定实验中，酸枣中的抗氧化剂能将铁氰化钾中的还原成，进步生成普鲁士蓝，该物质在波长下有最大吸光值，因此测定处吸光值的高低可以间接反映抗氧化剂还原能力的大小。表为酸枣不同溶剂提取物对还原能力的测定结果。表酸枣不同溶剂提取物对还原能力酸枣样品抗坏血酸酸枣水提物酸枣甲醇提物酸枣丙酮提物注溶液的浓度为样品为。和,等人研究表明抗氧化剂的还原力与其抗氧化性之间存在联系抗氧化剂是通过自身的还原作用给出电子而清除自由基的还原力越强抗氧化性越强因此可通过测定还原力来说明抗氧化活性的大小。由表可知，不同溶剂酸枣提取物与抗坏血酸均具有较强的还原能力，且强度与所加剂量大小呈正相关。即所加剂量越大，吸光度值越大，还原力越强。在样品浓度是对照品的十倍的条件下，抗坏血酸的还原性还较样品强，由此可知本次实验制得的提取物抗氧化性小于对照品的抗氧化性。由实验结果可知，水提取物的还原能力最大，丙酮提取物次之，甲醇提取物最小。这与酚酸与黄酮含量基本呈正相关。由此可以说明酸枣中起抗氧化作用的成分中，酚酸与黄酮是主要成分之。酸枣提取物对的络合能力络合能力是评价抗氧化剂活性大小的另项重要指标。试剂和络合后生成紫色物质，当反应体系存在络合物时，该物质能够争夺使得颜色变浅，颜色越浅，表示络合能力越强。表酸枣提取物对的络合能力样品吸光值酸枣水提取物甲醇提取物丙酮提取物注样品浓度均为酸枣水溶液由表可知，用水提取后的酸枣具有的络合能力最强，甲醇次之，丙酮最弱。在此得到的络合能力测定结果与酚酸含量和黄酮含量呈正相关，说明酸枣中酚酸和黄酮在此起到关键性的作用。酸枣提取物对自由基的清除是种化学性质较为稳定的以氮为中心的自由基，不易被清除，若受试物能够清除它，则表示受试物具有较强的自由基清除能力。表为不同溶剂提取的酸枣对自由基的清除能力测定结果表对自由基的清除能力测定清除率酸枣样品清除率水提物甲醇提物丙酮提物注样品浓度均为酸枣提取物水溶液由表可知酸枣的这几种溶剂提取物清除自由基时浓度均较高，说明酸枣在这几种溶剂中的提取物对自由基均具有较强的清除能力，其中丙酮提取物清除率较高，当加入量为时，丙酮提取物的清除率为，水提取物为，甲醇为。酸枣提取物对羟基自由基的清除羟基自由基的化学性质非常活泼，可损伤蛋白质核酸脂质等多种生物大分子，尤其对脂质过氧化的作用最强。可直接作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸，引发不饱和脂肪酸过氧化反应并最终生成丙二醛。酚类物质能清除是由于酚类化合物提供了酚羟基上的氢，而使还原，此外，酚类物质还能通过对金属离子的络合，降低反应的速度，从而间接实现抗氧化作用。表为不同溶剂提取的酸枣对羟基自由基的清除能力测定结果。表对羟基自由基的清除能力测定酸枣样品清除率水提物甲醇提物丙酮提物注样品浓度均酸枣水溶液由表可知，酸枣甲醇水丙酮提取物对对羟基自由基均有清除能力，但是清除能力相对较弱，当加入量为时，酸枣丙酮提取物的清除率最高为，其次是酸枣甲醇提取物，酸枣水提取物。而且清除能力与量效呈正相关。同等条件下，丙酮提取物对对羟基自由基的清除能力强于水与甲醇提取物。这与酚酸含量测定结果没有很好的相关性，这可能与酚酸的种类不同存在形式和生物活性有定的关系。结论在本章中我们测定了酸枣不同溶剂水，甲醇，丙酮提取物的还原能力络合能力自由基的清除能力和羟基自由基的清除能力。实验结果表明，酸枣水提取物的还原能力与络合能力均最强，丙酮提取物对络合能力最弱，但是丙酮提取物的还原力又较甲醇提取物的还原力强，这可能与水提取物酚类化合物含量高有关。在对自由基的清除率和的清除率的实验中发现，丙酮提取物的酚酸和黄酮含量低于甲醇提取物和水提取物，但是丙酮提取物对自由基的清除率和的清除率都高于甲醇提取物和水提取物，说明酸枣中具有抗氧化活性作用的成分除了酚类物质以外还可能有其他抗氧化物质。参考文献,,郁建生,分光光度法测定复方草珊瑚注射液中总黄酮含量的方法的讨论中国医药杂志,曹炜,卢珂,陈卫军等不同种类蜂蜜抗氧化性的研究食品科学,酸枣酚类化合物的高效液相色谱测定及其抗氧化作用的研究西北大学化工学院食品科学与工程系西安摘要本文以种不同溶剂酸枣提取物为研究对象，建立了种测定酸枣酚类化合物的分析方法以及在测定其提取物中总酚酸和总黄酮含量的基础上，利用体外法测定各提取物的还原能力对的络合能力对自由基的清除作用及对羟基自由基的清除作用。实验结果表明，酸枣中含有没食子酸原儿茶酸咖啡酸香豆酸阿魏酸芦丁槲皮素杨梅酮高良姜素山奈酚等十种酚酸。种不同溶剂酸枣提取物均有显著的抗氧化性，呈剂量效应关系，酚酸含量还原能力抗氧化能力之间呈正相关。关键词酸枣酚类化合物高效液相色谱抗氧化目录摘要第章绪论酚酸类化合物黄酮类化合物高效液相色谱检测器电化学检测器高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物中的应用高效液相色谱法在酚酸和黄酮化合物检测中的应用高效液相色谱法在酚酸和黄酮类化合物抗氧化活性研究中的应用本论文研究的内容参考文献第二章酸枣提取物的法测定材料与方法仪器及试剂溶液配制色谱条件结果与分析色谱条件的优化线性关系考察精密度实验稳定性实验重复性实验样品的测定结论参考文