。滤出液离心，上清液离心，保留沉淀。沉淀用悬浮液稀释，得到粗的细胞膜微膜囊提取液。提取液含有蔗糖二硫苏糖醇苯甲基磺酰氟悬浮液含有三羟甲基氨基甲烷吗啉乙磺酸缓冲液蔗糖。氧化酶活性的测定参照方法并修改，采用上述细胞膜微膜囊，通过氧化酶产生的活性氧氧化，的量来表示该酶活性。反应体系包括缓冲液，和的细胞膜微膜囊，加入启动反应，减少量可通过检测。酶活性以。活性的测定参照李杨瑞和方法，稍作修改。利用细胞膜微膜囊跟反应液产生的磷含量来表示该酶的活性。取反应液加入，再加入的微膜囊启动反应，置于水浴锅中培养。反应之后加入反应终止液，置于水浴锅中培养，来终止反应，接着在紫外分光光度计上读取的值。终止液包括的钼酸铵抗坏血酸十二烷基磺酸钠。其中﹕﹕﹕﹕。酶活性以表示。实验重复次。脂氧合酶活性测定参照的方法略加改进。底物制备。底物为的亚油酸钠，即亚油酸钠和无氧水，混匀后用滴定至澄清，定容至，低温保存备用。粗酶液提取。取果肉，冰浴研磨，加入磷酸缓冲液值，下离心，上贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响清液用于酶活性测定。活性测定。反应体系中含底物，柠檬酸磷酸缓冲液值，温育，加酶液后开始计时，记录处的吸光值变化，酶活性以表示。实验重复次。蛋白含量测定参照方法测定，以牛血清蛋白为标准蛋白作标曲，计算蛋白含量。数据统计全部试验数据用进行标准偏差计算。结果与分析硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜完整率及含量的影响图硅酸钠处理及挑战对甜瓜果实细胞膜完整率和丙二醛含量的影响,图中小垂线表示标准误。甜瓜果实采后细胞膜完整率总体呈下降趋势，而硅酸钠处理延缓了果实细胞膜完整率的降低图。硅酸钠处理者与对照在第细胞膜完整率差异最大，处理者高于同期对照。挑战接种可明显增大对照和处理者细胞膜完整率的降低速率，但在接种后的期间硅酸钠处理者细胞膜完整率明显高于对照。硅酸钠处理明显增加了果实的含量图，处理者含量与对照处理后天数细胞膜完整率处理后天数含量贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响的差异随着贮藏时间的延长逐渐增大，第达到最大，高于同期对照。挑战接种可进步提高处理者和对照的含量，且挑战后处理者的含量显著高于挑战后的对照，两者含量的最大差异出现在第，含量高于同期对照倍。硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜氧化酶和活性的影响图硅酸钠处理及挑战对甜瓜果实氧化酶和活性的影响,图中小垂线表示标准误。硅酸钠处理果实细胞膜氧化酶活性在贮藏期间逐渐增大，第之后高于对照，而对照果实细胞膜氧化酶活性变化不大图。挑战接种明显提高了处理者和对照的氧化酶活性，两者在第达到最高峰，之后逐渐降低，而对照果实氧化酶活性在第下降到未接种对照水平，且挑战后处理者的氧化酶活性明显高于挑战后的对照，第差异达到最大，活性高于同期对照。与处理间相比，挑战后处理者和对照氧化酶活性的增加分别可至少持续和。甜瓜果实采后细胞膜活性总体呈下降趋势，且硅酸钠处理果实对照倍。硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜氧化酶和活性的影响图硅酸钠处理及挑战对甜瓜果实氧化酶和活性的影响,图中小垂线表示标准误。硅酸钠处理果实细胞膜氧化酶活性在贮藏期间逐渐增大，第之后高于对照，而对照果实细胞膜氧化酶活性变化不大图。挑战接种明显提高了处理者和对照的氧化酶活性，两者在第达到最高峰，之后逐渐降低，而对照果实氧化酶活性在第下降到未接种对照水平，且挑战后处理者的氧化酶活性明显高于挑战后的对照，第差异达到最大，活性高于同期对照。与处理间相比，挑战后处理者和对照氧化酶活性的增加分别可至少持续和。甜瓜果实采后细胞膜活性总体呈下降趋势，且硅酸钠处理果实活性的下降速率明显高于对照果实图。但挑战接种明显延缓了处理者活性的下降，且在挑战后第开始活性高于挑战后对照，挑战后第达到未接种对照水平，而挑战后对照果实处理后天数氧化酶活性处理后天数活性贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响活性的下降速率增大。硅酸钠处理及挑战接种对果实脂氧合酶活性的影响图硅酸钠处理及挑战对甜瓜果实脂氧化酶的影响,图中小垂线表示标准误。甜瓜果实采后细胞膜酶活性总体呈上升趋势，且硅酸钠处理果实酶活性的上升速率明显低于对照果实图。但挑战接种后甜瓜果实酶活性明显高于未挑战对照，且在挑战后第开始活性高于挑战后对照，第挑战后处理者与对照差异达到最大，活性低于同期对照，之后酶活性上升趋势减缓。讨论是细胞质膜和生物膜系统中脂质过氧化的主要产物，对病原菌具有直接毒性。本实验发现，硅酸钠处理甜瓜果实后果实组织中迅速积累，这表明脂质过氧化也参与了硅酸钠诱导果实产生的抗病性。果实细胞膜完整率的降低速率在硅酸钠处理及接种后明显抑制，细胞膜完整率的降低是病害发生中的常见现象，但是硅酸钠处理有效抑制了挑战后细胞膜完整率的降低速率，表明硅酸钠在胁迫下启动了细胞的各种保护机制，在定程度上维持了果实细胞膜的完整性。本研究还发现，硅酸钠处理经挑战接种诱导了甜瓜果实细胞膜氧化处理后天数活性贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响酶活性的升高，而且也诱导了活性的升高，说明在病原物胁迫下硅酸钠处理可能通过氧化酶催化形成的活性氧而激活钙信号，启动应答反应机制，提高果实抗病性，同时可以维持细胞质内稳态，抑制了果实组织衰老。另外能催化多元不饱和脂肪酸发生过氧化作用，及其氧化物可能直接参与了植物组织的衰老过程。此外报道可能在伤害及病虫害防御中扮演着重要的角色，它本身可能是通过其作用的产物如茉莉酸的信号作用，使植物体构建起防御体系。硅酸钠处理经挑战接种抑制了甜瓜果实细胞膜酶活性的升高，说明硅酸钠处理通过对酶活性的抑制来提高果实的抗病性。贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响参考文献毕阳,王春玲白兰瓜贮藏期的病害中国果品研究,郝福顺,陈珈植物细胞膜氧化酶的研究进展植物学通报,关军锋钙与植物衰老北京农业出版社,郭玉蓉,毕阳,曹孜义硅处理对甜瓜红粉病的影响园艺学报盛占武,毕阳,鄯晋晓等采后硅酸钠处理对马铃薯干腐病的抑制食品工业科技,毕阳,张维杀菌剂和热水处理损伤接种果实控制哈密瓜的采后病害植物保护学报马崇山脂氧合酶在果实成熟衰老及抗伤病中的作用广西科学,贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响,致谢在整个实验过程中，首先要特别的感谢毕阳老师给予我的悉心指导和帮助。另外还有高晓辉师兄，从开始的试验到后来论文的初稿写作以及最后的论文定稿，他们都付出了大量宝贵时间和心血，他们对我孜孜不倦的教诲以及做人做事的方法将对我以后从事任何工作都会产生深远的影响。此外还要感谢实验室的各位老师高雄杰师兄陈松江师兄袁莉师姐尹燕师姐李颖超师姐樊育林范存斐等同学的鼎力帮助，是大家的共同努力才使得试验得以顺利的开展。本研究得到国家自然基金项目采后可溶性硅处理对厚皮甜瓜果实抗病性的诱导机理研究的全面资助目录摘要前言材料与方法材料方法病原菌的分离纯化和保存孢子悬浮液的制备硅酸钠浸泡处理果实损伤接种取样方法丙二醛含量测定细胞膜完整率的测定细胞膜微膜囊提取氧化酶和活性的测定脂氧合酶活性测定蛋白含量测定数据统计结果与分析硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜完整率及含量的影响硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜氧化酶和活性的影响硅酸钠处理及挑战接种对果实脂氧合酶活性的影响讨论参考文献致谢贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响贺顺龙甘肃农业大学食品科学与工程学院兰州摘要本文研究了硅酸钠采后处理和粉红单端孢挑战接种对对银帝厚皮甜瓜果实细胞膜部分氧化还原体系的影响。结果表明硅酸钠处理明显延缓了甜瓜果实细胞膜完整率的降低，处理后第高于同期对照明显提高了果实细胞膜氧化酶，挑战处理后第高于同期对照延缓了脂氧合酶活性的升高，处理后第活性低于同期对照丙二醛含量有所增加，处理后第高于同期对照。关键词硅酸钠果实细胞膜前言甘肃省是我国厚皮甜瓜的主要产区之，甜瓜营养丰富甘甜爽口风味独特，深受大众喜爱。然而，由于其产期集中，且正值高温季节加之缺乏必要的冷链和有效的包装，采后腐烂颇为严重，造成厚皮甜瓜采后腐烂的主要病害包括黑斑病白霉病软腐病粉霉病等。果蔬采后病害发生的重要原因是受到病原物侵染时，细胞的膜结构和特性将发生改变，从而引起代谢失调，最终导致细胞死亡。质膜氧化酶是种以胞质为电子供体，催化胞外生成超氧阴离子的氧化还原酶，通过催化产生，细胞质内增加会促进植物组织乙烯合成并加速这些组织的衰老。质膜和细胞器外膜的酶能够把细胞质过多的转运到细胞外或细胞器贮藏起来。另外能催化多元不饱和脂肪酸发生过氧化作用，及其氧化物可能直接参与了植物组织的衰老过程。有报道表明硅可以有效降低厚皮甜瓜的采后病害。但是对其作用机理的探讨主要集中于硅酸钠处理对和活性的影响,但是对细胞膜相关物质含量及酶氧化酶和活性的影响鲜有贺顺龙采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响报道。本实验以厚皮甜瓜为试验材料，研究硅酸钠处理对细胞膜相关物质含量及酶活性的影响，探讨其降低采后病害的机理，以其为硅的进步扩大使用提供理论依据。材料与方法材料供试银帝甜瓜采自甘肃民勤县收成乡露天栽培大田中，花后天采收。单果套发泡网袋后入标准包装箱个箱当天运抵实验室后在常温条件下贮藏待用。硅酸钠由天津市科密欧化学试剂开发中心生产，分析纯。方法病原菌的分离纯化和保存参照方中达法。采集典型粉霉病发病甜瓜果实，用酒精表面消毒后切取病健交界处组织，经表面消毒后移至马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，于保温培养。待菌落形成后采用稀释法进行单孢分离纯化。纯化菌株经回接试验确定其致病力后于斜面上下保存待用。孢子悬浮液的制备参照方法。取下培养天的带菌平皿个，加入含的无菌水约，用玻璃棒刮下平板上的病原菌孢子，然后转入三角瓶中，在微型旋涡混合器上振荡秒，再用双层纱布过滤，滤液用血球计数板计数算出孢子悬浮液的浓度后，最后稀释至所需浓度个。硅酸钠浸泡处理果实硅酸钠诱导处理将表面用自来水冲净并晾干的果实浸入的硅酸钠溶液中内含的，取出晾干后，单果套发泡网袋，入包装箱个箱，于常