1、密度为，再次超速离心，于，离心，用吸管小心吸出离心管上层的橙黄色液体即。提纯的在含的磷酸缓冲液液中透析，用法进行蛋白定量，过滤除菌，保存。在氧化前，先将置于无的液中透析，以除去。将置于含的溶液中，于氧化小时。氧化修饰后的置于含的中，透析小时，每小时换液次以终止氧化。过滤除菌，试剂蛋白定量，调蛋白浓度至，保存备用。采用琼脂糖凝胶电泳法取氧化前后的，经的琼脂糖凝胶电泳，中的脂过氧化物，在氧化过程中增加，颜色也由淡黄色变为乳白色。琼脂糖电泳显示的电泳迁移速率快于未氧化的。经处理后，由于阴离子含量增多，琼脂糖电泳显示，电泳迁移率明显快于未氧化的，表明已被化学修饰。图图琼脂糖胶观察和的电泳迁移率细胞分组实验不同浓度，处理，实验用的与孵育不同时间，即，。逆转录聚合酶链反应检测的表达用试剂提取细胞总。
2、用不同浓度的，孵育小时后，检测和蛋白表达。结果显示，使和蛋白的表达下调图，且呈浓度依赖关系，组与组比较，和蛋白的表达下调最明显，因此可认为是刺激小时后，使得表达明显下调的最适浓度。图不同浓度的对表达的影响，与组比较图用不同浓度的对蛋白表达的影响，与组比较作用于不同时间对表达的影响用孵育不同时间检测和蛋白表达。结果显示，使和蛋白的表达下调图，且呈时间依赖关系，组与组比较，和蛋白的表达下调最明显，因此可认为是刺激后，使得表达明显下调的最适时间。图作用于不同时间对表达的影响，与组比较图作用于不同时间对蛋白表达的影响，与组比较小结上有和蛋白和基因表达不同浓度可诱导和和蛋白的表达下调，且呈剂量依赖性，孵育不同时间和和蛋白的表达下调，且呈时间依赖性。分类号密级编号硕士学位论文干扰的和表达并增加单层。
3、⋯⋯⋯材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验三参与对和表达的调节⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。
4、留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名导师签名年月日年月日目录英文缩略语索引⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。
5、达的影响，以及人脐静脉内皮细胞受到这种氧化型脂蛋白刺激后对单层细胞通透性的变化。方法每次实验前小时，给换新鲜培养基培养后加处理因素。不同浓度，处理，检测细胞，和蛋白的表达，再用分别处理不同时间用和分别检测细胞，和蛋白的表达。结果上有与蛋白质的表达使与蛋白的表达下调，且成时间与剂量依赖关系。实验二对单层通透性的影响目的观察对人脐静脉内皮细胞单层通透性的影响。方法用不同浓度的，分别或者与共同孵育，空白组作为对照，通过系统检测单层细胞对和的通透性情况，采用荧光分光光度法测定和的含量。结果能显著增加单层对和的通透性，且作用随着浓度增加而增强，在时有显著作用能使诱导的单层通透性降低。实验三参与对和表达的调节目的探讨是否通过促进细胞内生成参与调节细胞和的表达。方法用分别与孵育，空白组作为对照，用与。
6、内皮细胞对的通透性研究生姓名李媛彬指导教师姓名职称易光辉教授学科专业名称病理学与病理生理学研究方向动脉粥样硬化的防治年月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保。
7、，溶于无水中，紫外分光光度计测定的比值在之间。取总约，用公司逆转录试剂盒合成，再取逆转录产物进行循环。的引物序列为上游引物‟‟，下游引物‟，扩增片段长度为。的引物序列为上游引物‟，下游引物‟，扩增产物长度为。内参照采用，引物序列为上游引物‟‟，下游引物‟‟，扩增产物长度为。的反应条件为预变性，变性，退火，延伸，个循环，继续延伸。的反应条件为预变性，变性，退火，延伸，个循环，继续延伸。的反应条件为预变性，变性，退火，延伸，个循环，继续延伸。反应结束后，取产物在的琼脂糖凝胶中电泳，加样量均为，溴化乙锭染色。电泳条带采用型凝胶图像分析系统做积分吸光度测定和分析，以各组目的基因与内参照基因的扩增片段的吸光度值的比值来比较待测基因的表达差异。印迹检测，蛋白的表达收集细胞，经洗涤次，加入悬浮裂解液。
8、裂解细胞后，于离心，小心吸出上清液，用法进行蛋白质定量。泳道加入蛋白质和等体积的凝胶加样缓冲液，煮沸使蛋白变性。积层胶，分离胶，电泳分离细胞蛋白质，将蛋白质用湿转膜仪转移至膜上。脱脂牛奶室温封闭后，加入抗，孵育洗膜次加入辣根过氧化物酶标记的二抗，孵育洗膜次。然后用荧光检测试剂激发荧光，显示于光片，显影，定影后进行图像分析。统计学处理实验所得数据采用均数标准差表示，单因素方差分析，两组间比较采用方差分析及检验，由统计软件完成，为差异有显著性意义。实验结果检测的和和蛋白的表达取状态良好，处于对数生长期人进行实验。每次实验前小时换新鲜培养基。用和的方法分别检测上和和蛋白的表达。结果显示，在上存在有和基因和蛋白的表达用孵育后，和蛋白表达降低图。图用和的方法分别检测上和和蛋白的表达。显示在和处有。
9、透性研究生李媛彬导师易光辉教授专业病理学与病理生理学中文摘要研究背景关于动脉粥样硬化的发生，目前普遍认为与血浆中脂蛋白水平的升高，血管内皮细胞的损伤导致的动脉壁通透性增加以及脂蛋白穿过内皮屏障在内皮下沉积等有关。在动脉粥样硬化斑块和泡沫细胞中检测到了氧化修饰的低密度脂蛋白，提示与的发生发展密切相关。但迄今为止未见促进内皮细胞对通透性机制方面的报道。桥粒芯糖蛋白和桥粒芯胶蛋白属于桥粒钙粘素蛋白家族成员，存在于血管内皮细胞间隙，发挥了血管壁与血液间的物理屏障作用，维持细胞与细胞之间的完整性。因此内皮细胞与细胞间的这种桥粒连接在通透性调控方面起了重要的作用。本研究意在探讨对内皮细胞和表达的影响，以及由此导致对内皮细胞通透性的影响。实验对细胞，表达的影响目的观察对人脐静脉内皮细胞上跨膜蛋白和表。
10、分别检测与蛋白质的表达水平。用的预处理再加分别与孵育，用染色法检测细胞内活性氧的生成情况用与分别检测与蛋白质的表达水平用激光共聚焦显微镜观察细胞的免疫反应性。结果使与蛋白质的表达下调。增加细胞内活性氧的生成和降低与蛋白质的表达，同时降低免疫反应性，且均能抑制上述结果。结论具有干扰和的表达并增加血管内皮对的通透性的作用活性氧的产生增加可能是所介导的单层内皮细胞通透作用的途径之。关键词动脉粥样硬化桥粒芯糖蛋白数生长期细胞进行实验。低密度脂蛋白的分离氧化修饰及鉴定参考文献的方法制备低密度脂蛋白，新鲜人血浆购自长沙市血站。取新鲜人血浆，加入以防腐和防氧化。置超速离心机作序列超速离心，首先，离心，用吸管小心吸出漂浮于离心管上层的乳白色液体及次层淡黄色液体。收集离心管下层液体，加入固体溴化钾使最终。
11、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯论文正文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验对上和表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验二对单层通透性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。
12、明显的条带在上也存在有和蛋白的表达能降低和蛋白的表达。对和和蛋白表达的影响不同浓度对和蛋白表达的影响用不同浓度的，孵育小时后，用和分别检测和蛋白表达。结果显示，使和蛋白的表达下调图，且呈浓度依赖关系，组与组比较，和蛋白的表达下调最明显，因此可认为是刺激小时后，使得表达明显下调的最适浓度。图不同浓度的对表达的影响，与组比较图用不同浓度的对蛋白表达的影响，与组比较作用于不同时间对表达的影响用不同时间的，孵育小时后，检测和蛋白表达。结果显示，使和蛋白的表达下调图，且呈时间依赖关系，组与组比较，和蛋白的表达下调最明显，因此可认为是刺激后，使得表达明显下调的最适时间。图用不同时间的作用于不同时间对表达的影响，与组比较图用不同时间的作用于不同时间对蛋白表达的影响，与组比较不同浓度对和蛋白表达的影响。
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红色党政风中国共产党成立100周年从百年历史看党的初心和使命PPT 编号18060