，在科玛嘉培养基上呈现翠绿色的光滑菌落通过菌落培养计数，证实白色念珠菌菌落计数与空白对照组相比，模型组明显增多，药物干预后，治疗组的菌落计数均有不同程度下降，有差异性，以联合用药组最为显著。病理学检测及病理学评分光学显微镜下空白对照组小鼠肠道组织腺体结构排列整齐完整，粘膜及粘膜下层无毛细血管淤血腺体肿胀炎症细胞聚集弥散分布等特点模型组小鼠肠道组织可见上皮下间隙增大，粘膜及粘膜下充血肿胀，腺体排列紊乱，毛细血管及微小静脉扩张充血，肠粘膜细胞坏死脱落，可见炎性细胞聚集浸润，病理学评分结果证实，两组相比有显著的差异性。药物干预后，治疗组粘膜层及粘膜下层固有层间隙变小，腺体排列稍整齐，血管稍有扩张，脱落及坏死减轻，可见少量炎性细胞在肠腔内存在，病理学评分结果以联合用药组最为显著。肠道粘膜细胞的凋亡检测及凋亡指数肠粘膜凋亡检测细胞表达部位在细胞核处，阳性细胞表达。空白对照组可见少量凋亡细胞，模型组小鼠粘膜细胞可见细胞体积缩小变形，与周围的细胞间隙增大，胞质浓缩胞膜裂解成块状，严重者可见以凋亡小体形成等特点的凋亡细胞，细胞核中呈现棕黄色或黄褐色。药物干预后，在肠道组织病理学评分中凋亡细胞的表达有不同的减轻，与模型组相比有显著差异性药物干预后，凋亡细胞有不同程度的表达，以联合用药组差异最为显著。肠粘膜凋亡基因表达表达部位在包浆处，主要分布于粘膜细胞层及腺体，呈棕黄色阳性细胞表达，有时呈弥散性分布的特点。与空白对照组相比，万方数据模型组的表达有统计学意义。治疗组与模型组相比，表达均有不同程度表达，但它们之间无明显统计学意义﹥。肠粘膜凋亡基因表达表达部位在包浆处，主要分布于粘膜细胞层及腺体，呈棕黄色阳性细胞表达。与空白对照组相比，模型组的表达增加，有统计学意义。治疗组与模型组相比，表达均有不同程度的增加，以联合组最为明显，有显著差异性。结论生长抑素与中药清胰汤合剂联合应用能够减少小鼠肠道内白色念珠菌的定植数目，减少细胞凋亡，对肠粘膜屏障起到定的保护作用。生长抑素联合中药清胰汤合剂的联合应用对肠粘膜屏障的保护作用更加明显。关键词白色念珠菌生长抑素清胰汤肠粘膜屏障万方数据用药组用药方法生长抑素组组小鼠给予浓度为的生长抑素溶液，采用尾静脉注射只清胰汤组组小鼠给予清胰汤灌胃只联合用药组组小鼠按前述方法依次同时等量给药空白对照组组及模型组组在同时间给予等量生理盐水，经尾静脉注射或灌胃药物持续干预天。药物干预期间，模型组组小鼠死亡只，其中只可能为灌胃针刺破食道，形成纵膈气肿而死亡，另外只灌胃后不久死亡，可能为灌胃引起的窒息生长抑素组组及清胰汤组组各死亡只，其中只由于尾静脉不慎注入少量空气，发生空气栓塞而死亡，另只灌胃后不久死亡，可能原因为灌胃引起的窒息。实验动物处置标本采集实验所用小鼠均采用颈椎脱臼法将其处死，碘伏液常规消毒腹部切口，打开腹腔，取出回肠末端回盲部及右半结肠部分，部分用生理盐水洗净粪便直至半透明状称重，采用毛玻璃研磨方式将其研磨充分并加入生理盐水，组织液备科玛嘉培养基接种培养另部分组织用中性福尔马林溶液固定小时后，给予常规组织脱水石蜡包埋，病理切片约后，染色法检测肠道组织凋亡细胞及凋亡基因的表达。肠道标本的检测方法指标及判定标准肠道组织液中白色念珠菌显色培养用移液器取上述研磨组织液，用无菌接种环接种于科玛嘉培养基上，置于恒温箱中培养后，进行白色念珠菌的菌落划线分区计数。肠道组织染色用福尔马林溶液固定后，经组织脱水石蜡包埋石蜡切片等步骤制成病理切片，光镜下观察，参照法评价标准，进行肠粘膜损害评分评分标准见表其具体的步骤如下万方数据包埋将石蜡置于烤箱内熔蜡脱水组织块置于熔蜡内室温冷却迅速将其蜡盒转移至冰箱内冷冻，以加速凝固切片制片及烤片冰冻切片常规切片制片放入摊片烤片机脱蜡水化二甲苯脱蜡次，每次无水酒精洗去二甲苯次酒精酒精酒精流水冲洗染色苏木素染液流水冲洗盐酸水化流水冲洗氨水返蓝流水冲洗伊红溶液流水冲洗脱水透明酒精脱水酒精无水酒精次，每次二甲苯浸次，每次干燥封片中性树脂胶封片贴标签干燥镜检记录染色结果苏木素将细胞核染成蓝色，伊红将细胞质染色成粉红色。评分按双盲法原则，由病理科老师给予指导，借助光学显微镜下依照标准进行小肠组织损伤评分。表法小肠组织损伤评分标准分数评分标准分分正常粘膜绒毛结构，无出血及炎症反应肠粘膜绒毛顶端上皮下间隙变宽，伴随有毛细血管淤血，固有层局部炎症细胞增多分肠粘膜绒毛顶端上皮下间隙进步变宽，固有层与上皮组织间剥离，炎症细胞在固有层弥散增多分绒毛两侧的上皮组织成块脱落分上皮组织完全脱落，仅有固有层结构，腺体肿胀，炎症细胞在固有层弥散分固有层破坏和不完整，出血和溃疡，炎症细胞大量聚集法检测肠道组织细胞凋亡采用法检测肠道组织细胞凋亡，其具体步骤如下冰冻切片给予常规切片制片烤片万方数据脱蜡水化二甲苯脱蜡次，每次无水酒精洗去二甲苯次，每次酒精酒精酒精冲洗次用吸水纸将标本周围溶液吸干，并用免疫组化油笔在标本周围处用标记，以限制滴加试剂的范围每张切片滴加工作液，在作用下处理组织冲洗次将每张切片放入用溶液配制的中，室温孵育，消除内源性过氧化物酶活性冲洗次将每张切片滴加现配的生物素标记液，使其均匀分散，在避光条件下孵育用冲洗次每张切片滴加标记反应终止液，室温避光条件下孵育用冲洗次滴加滴现配的工作液，在室温避光条件下孵育，可在光镜下根据颜色的发展变化来选择终止染色的时间用冲洗次苏木素复染，流水冲洗依次用酒精酒精酒精酒精酒精二甲苯次干燥封片中性树脂胶进行封片光学显微镜下观察记录拍照及图像分析系统进行凋亡数目统计。免疫组织化学法检测及的表达采用免疫组化技术检测及的表达，其步骤如下冰冻切片给予常规切片制片烤片脱蜡水化二甲苯脱蜡次，每次无水酒精洗去二甲苯次，每次酒精酒精酒精万方数据将切片用自来水冲洗并浸泡于水中待用根据抗的要求，对组织抗原进行修复取已配置的柠檬酸抗原修复液置入压力锅内，放置到电磁炉功率加热至沸腾，将电磁炉功率调低至，置切片于耐高温的染色架上，然后并放入沸腾的柠檬酸抗原修复液中，继续加热至沸腾，将压力锅离开电磁炉，打开压力锅盖，室温下自然冷却，取出染色架冷却至室温，用吸水纸将标本周围溶液吸干，并用免疫组化油笔在标本周围处用标记，以限制滴加试剂的范围每张切片上加滴内源性过氧化酶阻断剂试剂，室温下孵育用冲洗次每张切片加滴动物非免疫血清试剂，室温下孵育，目的是减少非特异性的背景染色再甩去该阻断液用冲洗次每张切片滴加抗兔抗和鼠抗，室温下孵育用冲洗次每张切片上滴加滴用生物素标记的二抗工作液试剂，室温下孵育用冲洗次每张切片滴加滴标记的链霉卵白素工作液试剂，室温下孵育用冲洗次滴加滴现配的工作液，在室温避光条件下孵育，可在光镜下根剧颜色的变化来选择终止染色的时间流水冲洗，苏木素复染，流水冲洗返蓝，流水冲洗依次用酒精酒精酒精酒精酒精二甲苯次干燥封片中性树脂胶封片光学显微镜下进行观察记录拍照，用图像分析系统进行值测定。统计学处理万方数据资料结果的表示采用均数标准差表示，所有的数据均结合统计软件进行单因素方差分析或秩和检验，用检验法进行组间比较，检验标准认为有统计学意义。万方数据第三章结果小鼠肠道白色念珠菌感染成模情况成模情况般形态观察实验第天，取造模组小鼠只和实验结束时模型组小鼠只及空白对照组小鼠只。大体观察可见空白对照组小鼠般情况好，活泼好动毛发有光泽造模组小鼠可见精神差饮食减少基本不活动毛发散乱无光泽等麻醉消毒，打开腹腔后，发现正常对照组小鼠肠道组织无明显异常，组织红润，肠蠕动功能正常而模型组小鼠出现肠管壁充血部分有肠管坏死，腹腔有少量暗红色积液见图。正常对照组模型组图空白对照组及模型组小鼠肠道成模情况镜下观察实验第天，所取空白对照组及模型组小鼠总共只肠道组织染色结果光学显微镜下可见空白对照组小鼠肠道组织腺体结构排列整齐完整，粘膜及粘膜下层无毛细血管淤血腺体肿胀炎症细胞聚集弥散分布等特点模型组小鼠肠道组织可见上皮下间隙增大，粘膜及粘膜下充血肿胀，毛细血管及微小静脉扩张充血，肠粘膜细胞坏死脱落，可见炎性细胞聚集浸润见图。万方数据正常对照组模型组图正常对照组及模型组染色成模情况菌落计数结果实验第天测定，测定空白对照组只小鼠及造模组只小鼠的白色念珠菌菌落计数分别为，有统计学差异性，有统计学意义见表。表空白对照组和造模组小鼠白色念珠菌菌落比较分组例数计数空白对照组造模组注与相比较。实验结束后，测定组只小鼠及组小鼠只肠道组织白色念珠菌菌落计数分别为，有显著差异性，有明显统计学意义见表。表空白对照组和模型组小鼠白色念珠菌菌落比较分组例数计数空白对照组模型组注与相比较。上述结果证明小鼠肠道白色念珠菌感染造模成功。万方数据分类号密级编号硕士学位论文生长抑素联合清胰汤对肠道白色念珠菌感染小鼠的实验性研究研究生姓名杨丰帅指导教师姓名职称周厚吾教授学科专业名称外科学研究方向肝胆胰疾病年月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收