将小鼠心脏固定于多聚甲醛中，过夜。再进行冰冻切片。将心脏自心尖去掉沿与主动脉根部垂直的方向，用包埋剂包埋，垂直固定于冰冻切片机的托盘之上。自主动脉根部向心尖方向进行冰冻连续切片，操作箱体温度维持在之间，组织切片厚度为，收集主动脉窦环状切片，将标本置于防脱玻片上，保存，用于油红染色。显微镜采集标本图像，计算机图像分析软件处理图像，计算斑块面积百分比斑块面积主动脉官腔面积，最后进行统计分析。主动脉窦油红染色油红属于偶氮染料，能与甘油三酯结合呈小脂滴状。当组织切片上滴加染液时，燃料与组织内的脂质中，是脂质呈橘红色或红色的小脂滴。油红染色的步骤如下用异丙醇配制浓度为的油红母液，使用时用蒸馏水以的比例稀万方数据释油红母液，将稀释液用滤纸过滤，备用。将切片置于烘箱中烤片将载玻片于异丙醇溶液中浸泡，去掉粘附在组织上的包埋剂滴加稀释并过滤后的油红染色液异丙醇分化，去掉粘附在载玻片上多余的染液滴加苏木素，复染自来水洗，反蓝，晾干水溶性封片剂封片显微镜拍照，计算机软件分析图片，进行统计学分析。小鼠主动脉油红大体染色将多聚甲醛固定好的主动脉取出，自来水冲洗，以去除多聚甲醛的刺激性气味，减少其对人体的伤害。使用眼科剪剪除主粘附在动脉周围的脂肪组织和结缔组织，于油红染液中染色，用异丙醇溶液分化，洗去粘附在主动脉壁上的染液，至动脉壁呈乳白色或透明状后终止。最后用眼科剪将整条主动脉纵向剪开，置于载玻片上平铺固定，观察主动脉壁上脂质堆积情况，数码相机采集图像。小鼠主动脉弓染色苏木精伊红染色法，简称染色法，是对细胞不同部位进行不同着色的种染色方法。其染色原理是苏木精染色液为碱性，与细胞核内的染色质和胞质中的核糖体有很好的亲和性，使其染成蓝紫色，而伊红为酸性染料，主要能使细胞质和细胞外基质中的成分染为红色。实验步骤为石蜡切片从固定于多聚甲醛中的中动脉上剪取主动脉弓部，流水冲洗，组织依次经浓度的乙醇溶液脱水，二甲苯透明，浸入石蜡中包埋成块状切片。染色二甲苯ⅠⅡ脱蜡各酒精梯度溶液中各蒸馏水洗苏木精染色自来水洗盐酸乙醇至褪色自来水冲洗反蓝酒精梯度脱水二甲苯透明至，中性树胶封片，显微镜拍照。万方数据法检测小鼠血清中的含量酶联免疫吸附实验简称法，即将已知的抗原抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体与种酶链接成酶标抗原抗体，检测时，把标本和酶标抗原抗体与固相载体上的抗原抗体反应。本实验中采用公司试剂盒，应用双抗体夹心法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子白介素水平。具体操作步骤如下将血清室温解冻，如有沉淀，转分，离心，取上清。提前将试剂盒从冰箱取出，室温平衡标准品的稀释与加样按照操作说明书在酶标包被板上设置个标准孔，配制浓度分别为的标准品溶液，每个浓度个复孔加样设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同和待测样品孔。在待测样品孔中先加样品稀释液，然后再加待测样品，轻轻晃动混匀加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁温育封板膜封板后温育配液将倍浓缩洗涤液用蒸馏水倍稀释，备用洗涤揭掉封板膜，弃去液体，甩干，用注射器每孔加满洗涤液，静置秒后弃去，重复次，在滤纸上拍干加酶每孔加入酶标试剂，空白孔除外温育操作同洗涤操作同显色每孔先加入显色剂，再加入显色剂，轻轻震荡混匀，避光显色分钟终止每孔加终止液，此时蓝色立转黄色测定以空白孔调零，波长依序测量各孔的吸光度值。测定应在加终止液后分钟以内进行。本试剂盒的检测限为。万方数据免疫组化法免疫组化是应用免疫学基本原理，即抗原抗体特异性结合，对组织内抗原进行定性定位的种研究方法。具体操作步骤如下取肝脏石蜡切片，洗次，甩干过氧化氢孵育，消除内源性过氧化物酶的活性洗次将置于溶液中的切片放入微波炉内加热，室温冷却洗次，甩干孵抗用液按比例稀释抗体，每个组织上滴加稀释液，孵育洗次，甩干滴加试剂，孵育洗次，甩干滴加试剂，室温孵育洗次，甩干滴加试液，显微镜下观察颜色变化，当组织中出现黄色或棕黄色颗粒是，水洗终止显色苏木素复染，分化，透明，封片，显微镜采集图像，计算机软件分析图片。免疫印迹是检测蛋白质表达水平的种实验方法。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，将蛋白样品按分子量的大小分离，再将目的蛋白转移到膜上，然后利用抗体进行检测。“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。实验步骤组织总蛋白的提取将新鲜肝脏组织置于研钵中，加液氮，迅速冷冻研碎，加裂解液使用前加入重复碾压至组织成液体。液体转移至管中，冰上裂解，然后，离心，取上清，保存，备用法检测蛋白浓度制胶根据目标蛋白的分子量选择不同浓度的分离胶万方数据分离胶浓度有时，对应的最佳分离范围分别是煮蛋白蛋白样品上样缓冲液，混合，加热，冷却至室温后，掌式离心机离心，上样电泳恒压，浓缩胶，分离胶转膜先将膜于甲醇溶液中活化，然后制作“三明治”从下往上依次为海绵垫滤纸胶，注意赶走气泡。整个操作过程在转膜液中进行。恒流，冰浴。封闭用配制脱脂奶粉溶液，孵育，过夜或者室温孵育抗按推荐比例将抗用稀释，孵育，或过夜洗膜，次次孵育二抗按推荐比例用稀释二抗洗膜，次次显影灰度值扫描并进行统计学分析。统计学分析实验数据采用均数标准差表示，多组之间比较采用方差分析，由统计软件分析。统计结果，则显示有统计学意义。万方数据实验结果烟酸姜黄素酯对高脂喂养小鼠血脂的影响小鼠高脂喂养周后，采用自动生化仪检测血脂四项指标，由表可知，与对照组相比，模型组血清中含量明显升高含量明显降低，说明在本实验中，高脂饮食导致了小鼠血清中脂质水平的升高，加速了动脉粥样硬化斑块的形成与模型组相比，阳性药物辛伐他汀降低了的含量，起保护作用的的含量得以升高，取得了与实验设计相符的结果烟酸姜黄素酯降低了小鼠血清中和的含量，而且高剂量效果更好，但没有明显升高，提示烟酸姜黄素酯调节小鼠血脂的机制可能与降低和有关。表烟酸姜黄素酯对小鼠血脂的影响，对照组，模型组分组对照组模型组辛伐他汀组低剂量组高剂量组万方数据分类号密级编号硕士学位论文烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化小鼠脂质调节和炎症反应的初步研究研究生姓名姚海伦指导教师姓名职称廖端芳教授覃丽副教授学科专业名称药理学研究方向心血管药理学年月万方数据万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名导师签名年月日年月日万方数据目录中文摘要二英文摘要三主要缩略语英文索引四论文正文前言实验技术路线实验材料实验方法实验结果讨论结论参考文献五综述六硕士期间发表的论文七致谢万方数据烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化小鼠脂质代谢和炎症反应的初步研究研究生姚海伦导师廖端芳指导老师覃丽摘要目的通过预防性给药治疗，观察烟酸姜黄素酯，对小鼠血脂主动脉中斑块面积以及肝脏中脂质蓄积的作用情况通过研究烟酸姜黄素酯对小鼠中和的作用，探寻烟酸姜黄素酯对动脉粥样硬化病变的作用机制。方法只小鼠适应性喂养周之后，按随机数字表将小鼠分为五组，即正常组对照组高脂组模型组阳性药物组辛伐他汀组低剂量组和高剂量组，分别给予辛伐他汀低剂量高剂量的灌胃治疗，其中对照组给予普通饲料，其他组给予高脂饲料猪油胆固醇普通饲料喂养。实验过程中观察小鼠的状态，饮食量和饮水量，并每周同时间记录小鼠的体重。给药周之后动物处理，采用全自动生化仪检测小鼠血清中血脂四项的含量油红染色法观察小鼠主动脉以及主动脉窦中斑块的大小及形态染色法观察主动脉弓部斑块形成的情况法检测小鼠血清中炎症因子的含量免疫组化和法检测小鼠肝脏中和的表达情况。万方数据结果小鼠高脂喂养周后，与对照组相比，血清中总胆固醇低密度脂蛋白升高，高密度脂蛋白降低，并且观察到其主动脉窦板块明显增多，主动脉整体染色和主动脉弓染色都可观察到斑块的增多，提示高脂喂养加快小鼠动脉粥样硬化形成的进程，模型构建成功。烟酸姜黄素酯预防性给药周后，小鼠血清中的和明显降低，并且高剂量效果更为显著，提示烟酸姜黄素酯降低高血脂。主动脉窦油红染色主动脉整体油红染色和主动脉弓染色提示烟酸姜黄素酯减少高脂喂养的小鼠动脉粥样硬化斑块。小鼠肝脏免疫组化结果显示烟酸姜黄素酯下调和水平。小鼠肝脏免疫组化血清结果显示烟酸姜黄素酯能降低炎症因子水平，对也有定的调节作用。结论烟酸姜黄素酯预防性给药能抑制高脂喂养所致的小鼠动脉硬化斑块的形成烟酸姜黄素酯抑制动脉硬化斑块形成的作用可能与其调节肝脏脂质代谢及炎症反应有关。关键词烟酸姜黄素酯小鼠动脉粥样硬化脂质炎症万方数据，