和保守性。该基因区编码的蛋白通常称为分子或抗原，是移植排斥的主要决定簇。根据结构和功能可将分为三类。在结构上类分子可分成肽结合区样区跨膜区和胞浆区个部位。国内外关于鹅免疫方面的研究较少，本试验以我国优良的地方品种五龙鹅为试验对象，主要研究五龙鹅Ⅰ基因分子特性，获得如下研究结果根据中鸡，鼠，斑马鱼等的Ⅰ基因保守序列，使用与程序设计对引物，利用反转录聚合酶链式反应从有丝分裂原刀豆蛋白刺激活化的五龙鹅脾细胞中扩增出相应大小的基因，经酶切鉴定和鉴定，将目的片段与载体连接，转化到感受态中，提取质粒，对序列进行测定，扩增出的基因，将测得的序列递交到中，获得登陆号为。根据测得的基因序列，重新设计引物，提取基因组，利用方法从五龙鹅基因组中克隆了类分子的基因组序列并分析其基因组结构，经过酶切鉴定和鉴定，获得五龙鹅的基因组序列，共有个碱基，将测得的序列递交到中，获得登陆号为。利用生物软件和程序比较五龙鹅的序列和序列，发现鹅含有个外显子和个内含子。用技术建立了种实时的方法，用于检测鹅基因，无菌采取鹅心肝脾，肺肾胸腺法氏囊脑肌肉和胚胎组织，进行实时，该方法具有较好的敏感性和特异性，试验结果发现基因在青岛农业大学硕士学位论文摘要鹅的组织中按不同的表达量关系为法氏囊脾脏胸腺脑肺肌肉肾心肌胚胎肝，通过结果可发现免疫器官中基因的表达量要比其它器官的高。运用生物信息学的方法进步分析了五龙鹅基因核酸序列及氨基酸序列编号。核酸序列基因酶切图谱分析获得种常见限制性内切酶的酶切位点蛋白分子量为，等电点为蛋白的疏水性为，在第氨基酸的端有段较强的疏水区有两个蛋白质超家族，有的可能存在于线粒体内。三维结构中由两个长的螺旋，三个折叠构成，螺旋之间形成个空间凹陷。与其他个物种的氨基酸序列多序列比对的进化树，表明鹅的研究主要集中在鸡上，鸡的主要组织相容性复合体又称为型复合物。等首先是将其作为种红细胞抗原而发现的。发现血型系统与鸡的有关联和报道了鸡的位于号染色体上。根据分子编码蛋白的类型，把鸡的分子包含三个亚区ⅠⅡⅣ。高度多态性的和基因编码典型青岛农业大学硕士学位论文文献综述的分子，鸡有个Ⅰ位点其中个位点Ⅰ到Ⅳ定位于复合物上，其他两个位点Ⅴ和Ⅵ则位于鸡基因的区域。随着生物技术的发展，鸡的分别被克隆，其中的部分被测序。对于与抗体之间的关系，等证明与抗原的产生有关和等报道鸡对和沙门氏菌的抗体效价与鸡的有关等报道抗体对于的长期应答与鸡等位基因的改变具有相关性。与畜禽抗病性关系的研究目前，与疾病相关的机理尚不完全明了，其中分子模拟假说认为些病原微生物的抗原与抗原分子结构相似，这样可引起机体对这种病原微生物产生交叉免疫耐受，不能产生有效的免疫应答，保护了病原微生物同时病原微生物刺激机体产生相应的抗体，损伤了具有共同抗原的组织细胞。受体学说认为抗原作为种病毒的受体，如小鼠Ⅱ类抗原是乳酸脱氢酶病毒的受体，这种受体与病毒结合。还有人认为是种免疫应答基因，基因通过其产物抗原影响巨噬细胞递呈抗原或与其他细胞间相互作用，使机体对些疾病易感。另外，还有人认为基因与真正疾病的易感基因连锁不平衡，补体基因缺陷或扩展单体型连锁不平衡从而使与疾病的抗性有关。从年代末开始，科学家逐渐开始关注与畜禽疾病之间关系的研究，并取得了较大的发展,。反刍动物的与疾病关系的研究反刍动物抗病性的研究主要集中在牛上，在牛与疾病抗性之间，等报道基因与乳房炎的易感性有关等研究了Ⅰ类抗原与蜱侵染蠕虫侵染，结果发现特异性位点与较小牛蜱侵染数目减少之间有所联系，而位点与对蜱的易感性有关。有报道称与口蹄疫抗性有关和对牛白血病有关联。到目前已发现，单倍型与乳房炎易感性显著相关与持续性淋巴细胞增生症抗性有关与乳房炎的发病率显著相关，与胎盘滞留有显著相关，和与卵巢囊肿显著相关。有关羊与疾病的报道则相对较少，其中和在对腐蹄病的抗性和接种后免疫应答中发挥作用，对痒病的抗性也与羊的有关，此外还发现淋巴细胞表面Ⅰ类抗原对蛇形毛圆线虫获得性抗病力之间的关系，还证实了羊与线虫抗生和相关。青岛农业大学硕士学位论文文献综述猪的与疾病关系的研究在猪与疾病的抗性方面，等报道，美国个猪种对支气管败血波氏杆菌的免疫应答处于控制之下等在小型猪中发现，基因型和个体对绵羊红细胞母鸡蛋白溶菌酶和合成肽，是强应答者等发现腹泻造成的断奶前死亡率与的单倍型类型有关等发现遗传性皮肤恶性黑瘤与复合体有关此外等报道的不同单倍型对寄生虫的抗性也存在类型差异。和比较完整地列举了与疾病的联系，和以及等又对此进行了更新。鸡的与疾病关系的研究在鸡与疾病抗性关系方面，研究最多的与马立克氏病的关系。现已鉴定出许多与抗性相关的基因，如单倍型对有抗性，而单倍型对敏感。等和等报道了鸡对肉瘤病的抗性与的关系，其中单倍型表现出较强的抗性，而易感有些则对抗性呈互补性，如对易感，而则表现出较强的抗性，杂合子也比纯合子和有更强的抗性还有试验报道了鸡接种沙门氏菌后Ⅰ和Ⅱ基因的多态性，表明了鸡的与沙门氏菌的关联。经过二十多年的研究表明，牛羊猪鸡等畜禽体内的主要组织相容性复合物与些疾病的抗性有着密切的关系，但是对于其他畜禽如马鸭鹅等的研究却未见报道，另外对于的抗病机理还有待于进步研究，所掌握的与抗病性状基因连锁的等位基因也较少，缺乏可靠的遗传标记，利用进行抗病育种，不仅在外源基因的选择和分离基因的导人技术等方面还需进行大量的探索性工作。随着分子生物学和基因工程技术的进步发展以及抗病育种潜在的巨大经济效应，的研究必将成为世纪育种的个热门领域。此次试验以五龙鹅为试验对象。五龙鹅属中国白色鹅种的小型品种，以繁殖性能高而闻名，主要分布于山东省胶东半岛。经过二十多年的品种资源调查收集，运用家系选育闭锁选育育种技术及分子遗传标记等手段，使五龙鹅体型外貌生产性能及均匀度整齐致，具有明显的豁眼特征的白色小型品种，其繁殖性能达到国际领先水平，年被农业部确定为国家级保护地方品种。多年来，青岛农业大学优质水禽研究所直十分重视五龙鹅的基础研究，先后在种质特性体型指标相关分析早期血液蛋白酶多态性多型性与体重性状关系青岛农业大学硕士学位论文文献综述法估计产蛋性能的遗传趋势产蛋性能标记牧草结构日粮的消化代谢规律营养水平对生长发育及对基因表达影响生殖和消化等系统形态学与组织学观察等方面进行了较为全面系统的研究，已取得了显著科研成果。此次研究拓宽了五龙鹅的研究领域，对建立丰富全面的鹅研究平台具有较现实的意义。青岛农业大学硕士学位论文五龙鹅基因克隆及序列分析五龙鹅Ⅰ基因克隆及序列分析试验材料和方法试验动物选用青岛农业大学优质水禽研究所育种基地提供的成年五龙鹅健康雄鹅只。质粒和菌株质粒克隆载体，购自公司，全长，携带有氨苄青霉素抗性基因和基因，重组体可通过蓝白斑和氨苄抗性双重筛选鉴定，质粒如图。图质粒图谱菌株大肠杆菌菌株，由潘庆杰教授及董焕声同学惠赠。主要工具酶及试剂总抽提试剂盒购自大连宝生物公司反转录试剂盒青岛农业大学硕士学位论文五龙鹅基因克隆及序列分析购自大连宝生物公司聚合酶购自大连宝生物公司Ⅰ纯化试剂盒购自大连宝生物公司ⅠⅡ限制性内切酶酶购自公司。连接酶购自大连宝生物公司溴化乙啶，氨苄青霉素购自华美生物工程公司胰蛋白胨酵母提取物均为产品购自南京生兴生物公司。试验仪器扩增仪美国核酸蛋白测定仪日本岛津生物仪器公司凝胶成像系统美国低温高速离心机公司型电泳仪北京六仪器厂微型电泳槽上海琪特分析仪器有限公司分类号密级青岛农业大学硕士学位论文五龙鹅Ⅰ基因克隆组织表达及分子特性的研究,研究生姓名导师教授副教授专业预防兽医学研究方向生物技术中国青岛年月目录中文摘要ⅰ英文摘要ⅲ缩略符号ⅴ文献综述综述前言Ⅰ分子结构与作用机理畜禽的研究概况与畜禽抗病性关系的研究研究内容五龙鹅Ⅰ基因克隆及序列分析试验材料和方法实验动物质粒和菌株主要工具酶及试剂试验仪器所用溶液及其配制五龙鹅Ⅰ基因的扩增和测序结果与分析五龙鹅脾脏五龙鹅Ⅰ基因扩增扩增条件的优化插入片段的转化插入片段的检测重组质粒的序列测定测序结果讨论五龙鹅Ⅰ基因组克隆及序列分析试验材料和方法试验材料试验方法试验结果分析五龙鹅Ⅰ基因组基因的扩增与鉴定重组质粒的鉴定重组质粒测序结果五龙鹅Ⅰ基因组基因测序结果分析讨论利用对鹅基因的检测试验材料和方法试验材料质粒和菌株主要工具酶及试剂主要仪器试验方法五龙鹅基因逆转录五龙鹅基因片段的回收重组质粒的构建对表达量的检测试验结果分析目的基因的扩增检测目的基因的标准曲线的制备目的基因的讨论鹅基因的分子特性的分析材料与方法试验序列序列的提交核酸序列的基本分析鹅蛋白质级序列的基本分析鹅蛋白质二级结构和功能预测鹅蛋白质三级结构预测同源性分析与系统发育分析试验结果与分析核酸序列基本分析蛋白质级序列的基本分析鹅蛋白二级结构和功能预测鹅蛋白三级结构和功能预测同源性分析讨论结论参考文献附录致谢ⅰⅲⅴⅠⅠⅠⅠⅠⅠ青岛农业大学硕士学位论文摘要五龙鹅Ⅰ基因克隆组织表达及分子特性的研究摘要主要组织相容性复合体,是由紧密连锁的高度多态的基因位点所组成的位于染色体上个遗传区域，广泛存在于所有脊椎动物，具有高度的多态性和保守性。该基因区编码的蛋白通常称为分子或抗原，是移植排斥的主要决定簇。根据结构和功能可将分为三类。在结构上类分子可分成肽结合区样区跨膜区和胞浆区个部位。国内外关于