质酮放射免疫检测试剂盒，由晶美生物 工程有限公司提供。根据标记的与未标记的皮质酮抗原竞争性结合其特 异性抗体的原理进行检测。反应系统中皮质酮抗原抗体复合物的形 成量受样品中未标记的皮质酮抗原量的影响，即样品中未标记皮质酮的 含量越高，则皮质酮抗原抗体复合物的形成就越少，通过测定抗原 抗体复合物的放射性，计算相关参数，绘制标准曲线，直接读出样品中 皮质酮的含量。实验步骤严格按试剂盒说明书操作。 海马糖皮质激素受体的检测海马糖皮质激素受体 ，原位杂交试剂盒，由博士德生物 工程有限公司提供，采用漂浮法检测。取视交叉至乳头体的脑组织，行 快速连续冰冻切片，检测步骤严格按试剂盒说明书进行，均为无菌操作。 采用细胞图像分析系统分析结果。 下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素阳性神经元的检测下丘脑 促肾上腺皮质激素释放激素 ,阳性神经元采用免疫组化试剂盒进行检测， 试剂盒由博士德生物工程有限公司提供。取视交叉至乳头体的脑组织， 行快速连续冰冻切片，检测步骤严格按试剂盒说明书进行。采用细 胞图像分析系统分析结果。 白细胞介素和干扰素的检测白细胞介素, 和干扰素,酶联免疫试剂盒，均由晶美生物工程有限公司提供。 形态学观察 大鼠海马光镜形态学观察取大鼠视交叉至乳头体的脑组织， 常规光镜下观察。 大鼠海马透射电镜形态学观察依据鼠脑立体定位图谱，取海 马矢状切面组织块，常规电镜下观察。 大鼠肺组织光镜形态米松组大鼠海马锥体细胞形态不规则，细胞器变性理 肺组大鼠海马锥体细胞胞浆疏松，多数线粒体扩张出现空泡疏肝理肺组大鼠海马锥体细胞核形态较规则，核膜光滑，核异染色质分布较均 匀，胞浆疏松，线粒体丰富但致密。 疏肝理肺方对应激条件下哮喘大鼠血浆和的影响应 激组与正常组比较，血浆水平明显升高，水平明显 降低哮喘应激组与哮喘组比较，血浆水平明显升高 ，水平明显降低疏肝理肺组与理肺组比较， 血浆水平无明显降低，水平明显升高。见表。 表各组大鼠海马和下丘脑阳性神经元比较略 ▣▣, ▢▢, , 表各组大鼠血浆和浓度比较略 ▣▣, ▢,▢▢, 疏肝理肺方对应激条件下哮喘大鼠肺组织形态的影响正常组 大鼠支气管及肺泡结构正常应激组大鼠支气管周围及肺泡壁有少量炎 细胞浸润哮喘组和哮喘应激组大鼠支气管周围及肺泡壁有大量炎细胞 浸润，支气管管腔狭窄，上皮细胞脱落，腔内有分泌物地塞米松组大 鼠支气管周围及肺泡壁亦有较多炎性细胞浸润理肺组和疏肝理肺组大 鼠支气管周围及肺泡壁炎细胞浸润明显减轻。 讨论 应激是指机体受到各种应激原刺激时出现的以下丘脑垂体肾上腺皮 质,轴过度激活为主的系列神 经内分泌反应。适度的应激刺激对人体的健康和功能活动起着促进作用， 使机体能够适应内外环境的变化但长期持续的轴功能亢进，可导 致机体对各种感染性因素处于易感状态，造成免疫功能的障碍。应激时， 轴激活，下丘脑室旁核,的小细胞 神经元分泌，刺激垂体前叶释放促肾上腺皮质激素 刺激肾上腺皮质合成和 分泌糖皮质激素。本研究结果表明在应激条件下，哮喘大鼠血浆皮质 酮水平明显升高，说明束缚应激刺激可导致应激条件下哮喘大鼠轴 功能亢进，使血浆皮质酮水平升高。疏肝理肺组大鼠血浆皮质酮水平与 哮喘应激模型组比较明显降低，但理肺组大鼠血浆皮质酮水平与哮喘应 激组比较无统计学差异，说明疏肝理肺方可通过抑制应激条件下轴的兴奋性，降低血浆皮质酮水平。 海马不仅是轴的高位调节中枢，而且是应激损伤的敏感区，刺 激海马可抑制应激诱导的皮质酮分泌，这种作用是由所介导的。 海马是含量最多的大脑区域，在应激引起内源性糖皮质激素升高的过 程中起着复杂的调节作用。有报道指出慢性社会应激或束缚应激 能不同程度地下调海马区的表达，抗抑郁药治疗后可明显 增加海马和盐皮质激素受体的表达，并能阻止应激诱导的 区的表达下调。本研究结果表明在应激条件下，哮 喘大鼠海马区的表达明显减少疏肝理肺组大鼠海马 区的表达与哮喘应激组比较明显升高，而理肺组大鼠海马 区表达与哮喘应激组比较无明显差异，说明疏肝理肺方可通过 调节应激反应，降低血浆皮质酮水平，升高海马区的表达， 从而对应激条件下哮喘大鼠轴功能紊乱起到了定的调节作用。 支气管哮喘属于中医哮证喘证范畴。素问脏气法时论 云肺病者，咳喘逆气肩背痛汗出„„表明本病病位在肺。朱 丹溪认为哮主乎痰。症因脉治哮病云哮病之因，痰饮留 伏，结成窠臼，潜伏于内，饮食之伤或外有时令之风寒束肌表，则哮喘 之症作矣。清代李中梓云因内有壅塞之气，外有非时之感，膈有 胶固之痰，三者相合，闭拒气道，搏击有声，发为哮喘。诸病源候 论云呷嗽者„„痰气相击，随嗽动息„„由此可见，痰饮是哮 喘发病的关键因素。古代医家早已认识到痰与七情的关系。证治汇补云惊恐忧思，痰乃生焉。肝气郁滞，失于疏泄，横克脾土，脾失 健运而痰浊内生肝郁化火，炼液成痰，此皆因郁而生痰。郁痰贮于肺 脏，壅阻肺气，不得宣降，而发咳喘哮证。说明情志失调可导致痰 饮内生，从而诱发哮喘。金匮要略痰饮咳嗽病提出病痰饮者，当 以温药和之。疏肝理肺方由小青龙汤和四逆散组成。小青龙汤中麻黄 桂枝发汗解表，以解外有非时之感干姜细辛半夏温肺化饮， 以除膈中胶固之痰，兼助麻黄桂枝解表，同时可顺内有壅塞之 气五味子敛气芍药养血甘草益气和中，三药互配可制诸药之辛 燥，以防太过。八味相配，使风寒解水饮去肺气复舒宣降有权。 四逆散方是调理气机的基本方之，方中炙甘草甘温益气以健脾，柴胡 透邪疏肝解郁，枳实下气破结，芍药益阴养血柔肝。枳实柴胡相配， 升降，增强疏肝理气之功柴胡芍药相配，散敛，疏肝理脾 而不伤阴芍药炙甘草酸甘化阴，柔肝缓急。四药互配，使邪去郁解 气血调畅。近代药理学研究表明四逆散方中柴胡的活性成分柴胡皂苷 有抑制中枢神经兴奋和抗炎的作用白芍总苷可对抗应激后升高的血浆 促肾上腺皮质激素，同时能促进脾淋巴细胞增殖，增强免疫功能枳实 可疏肝理气，还可抑制炎性细胞释放组胺。枳实的有效成分挥发油 对中枢神经系统亦有抑制作用。有报道认为肝郁多表现出神经内 分泌免疫系统功能的改变，如肝郁证患者去甲肾上腺素羟色胺和多巴 胺等中枢神经递质，肾上腺皮质功能以及免疫系统多项指标均发生变化 ，说明中医肝的功能与现代医学的神经内分泌免疫网络密切相关探讨防治应激条件下大鼠哮喘的作用 论文摘要目的探讨心理因素对哮喘发病的影响和调肝法调节应激 防治哮喘的作用机制。方法用卵蛋白加束缚应激刺激建立应激条件下 哮喘大鼠模型，采用放射免疫分析法酶联免疫吸附法原位杂交免 疫组化光镜及电镜等方法，检测各组大鼠血浆皮质酮白细胞介素 干扰素海马糖皮质激素受体和下丘脑促肾上腺皮质激素释放激 素,阳性神经元， 并观察肺和海马组织形态学的变化。结果疏肝理肺方可明显降低血浆 皮质酮水平，升高血浆干扰素，降低血浆白细胞介素，减少下丘脑 室旁核阳性神经元，上调海马区糖皮质激素受体的表达， 减轻海马神经元的损伤，并可明显减轻应激条件下哮喘大鼠肺组织的病 理改变。结论疏肝理肺方通过抑制应激条件下哮喘大鼠下丘脑垂体肾 上腺皮质轴功能的亢进及调节免疫系统的功能，从而起到防治哮喘的作 用。 论文关键词应激哮喘疏肝理肺法 , , , , 支气管哮喘是种多病因疾病，发病机制十分复杂，严重危害人类 的健康。其发病受生物心理和社会三方面因素的影响，其中精神心理 因素在哮喘的发生发展和转归中起着重要的作用。现代社会工作和生 活节奏日益加快，竞争日趋激烈，机体长期处于紧张状态下，通过影响 神经内分泌系统继而干扰机体的免疫功能，从而诱发或加重哮喘。 中医学很早就认识到不良的环境或精神刺激与躯体疾病的发生发 展有密切的关系。肝主疏泄，调畅气机，在心理应激调节中起着决定性 的作用。现代医学认为任何形式的应激都可导致神经内分泌功能紊乱， 造成免疫功能障碍，使机体对各种感染性疾病呈易感状态。大量研究表 明肝主疏泄功能与现代医学的神经内分泌免疫网络密切相关，调肝法 有调整神经内分泌免疫功能失调的作用。本实验运用疏肝理肺方治疗应 激条件下的哮喘大鼠，探讨心理因素对哮喘发病的影响以及调肝法调节 应激防治哮喘的作用机制。 材料与方法 实验动物分组及模型建立雄性大鼠只，体质量 ，随机分为组正常组哮喘组应激组哮喘应激组地塞米松组 理肺组和疏肝理肺组，每组只。哮喘组哮喘应激组地塞米松组 理肺组和疏肝理肺组大鼠分别予以腹腔注射抗原液含卵蛋白氢氧化铝干粉和灭活百日咳杆菌致敏正常组和应激组大鼠则分别予以 腹腔注射等量生理盐水。致敏后第天起，应激组哮喘应激组地塞 米松组理肺组和疏肝理肺组大鼠予以双后肢立式固定，行束缚应激刺 激共周致敏后第天起，哮喘组哮喘应激组地塞米松 组理肺组和疏肝理肺组大鼠另分别予以卵蛋白雾化吸入 共周。 药物及给药方法理肺方,即小青龙汤， 由麻黄桂枝炙甘草细辛干姜半夏五 味子和白芍组成疏肝理肺方, 即小青龙汤合四逆散，由麻黄桂枝炙甘草细辛 干姜半夏五味子白芍柴胡和炙枳实组 成。理肺方和疏肝理肺方用水煎制后滤液，制成浓缩口服液，分别含生 药和。地塞米松片于灌胃前用生理盐水 配制成混悬液，浓度为。致敏后第天起，地塞米松组理肺 组和疏肝理肺组大鼠分别予以地塞米松混悬液理肺