目经费预算情况本项目申请科研经费万元。

其中设备仪器购置费万元材料样品加工费万元土建安装费万元资料调研费万元实验检测费万元鉴定费万元。

三项目实施支撑条件项目技术来源本项目技术由项目申请人建立。

项目实验检测条件项目申请人所在学院生命科学学院拥有食品科学国家重点建设学科生物化学与分子生物学省级重点学科和食品科学教育部重点实验室。

这些重点学科和重点实验室设施完善先进，具有进行本项目研究实验条件和实验场地，为本项目完成提供了保障。

项目申请人所在江西省生物化学与分子生物学重点实验室实验条件先进，具有型仪，全自动测序仪型高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱超纯水系统各种规格电泳仪紫外分光光度计设施先进细菌培养室等仪器设备。

现已完成了本项目所需科研平台建设工作。

项目申请人长期从事分子生物学研究工作，熟练掌握了分子生物学研究技术。

课题组已开展了本项目前期研究工作，目前正在进行嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌环介导等温扩增研究，基本掌握了等温扩增专用引物设计软件使用和等温扩增操作要点，这为本项目顺利完成奠定了技术基础。

项目申请单位人才资源情况项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建工程重点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。

生命科学学院有专任教师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。

项目组人员专业结构职称结构项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生物学专业人员组成，专业结构合理。

科研人员中，教授人副教授人研究生人。

其中具有博士学位教师人。

项目新增投资筹集情况本项目申请科研经费万元。

四项目预期经济效益预期市场需求病原菌检测是食品检测和临床诊断中常规项目，食品检测部门和医疗机构对检测试剂需求量巨大。

等温扩增技术在病原菌检测工作中有很大潜力。

然而，目前国外仅有将其用于病毒和检测研究报道，在病原菌检测领域尚无以此技术开发商业试剂，国内也未见这方面研究开发报道。

因此，开发病原菌环介导等温扩增试剂具有广阔前景。

预期盈利水平目前以传统方法检测个样品中种致病菌收费约元。

本项目建立检测技术检测个样品试剂成本约元，如果以元销售，可获利润元。

个小型试剂生产企业年至少可生产检测万个样品试剂，每年获利万元。

因此，该技术推广可产生明显经济效益。

预期产业化前景本项目是针对严重影响人类健康病原菌检测问题提出，研究成果实用性强，易于转化。

在产品研制工作中采用了现代分子生物学新技术，产品科技含量高，生产成本低，利润空间大。

本产品生产不需特殊大型设备，产品定型后可向中小型生化试剂生产企业转让，因此，本项目产业化前景广阔。

我省具有定生产能力试剂生产企业经技术培训后可生产本产品。

项目实施风险分析课题组已开展了本项目前期研究工作，目前正在进行嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌环介导等温扩增研究，基本掌握了等温扩增专用引物设计软件使用和等温扩增操作要点，这为本项目顺利完成奠定了技术基础。

项目异性环介导等温扩增技术开发出简便快速经济检测试剂。

项目技术先进性，对相关领域技术进步推动作用环介导等温扩增是利用个特殊设计引物和具有链置换活性聚合酶，在恒温条件下特异高效快速地扩增新技术。

该技术在内能扩增出靶序列拷贝。

技术以其特异性强灵敏度高快速准确和操作简便等优点在核酸科学研究疾病诊断和转基因食品检测等领域得到了日益广泛应用。

该技术推广对生物学食品科学及医学领域中检测和诊断技术进步有推动作用。

项目目前进展情况课题组开展了大量前期研究工作，已完成了本项目所需科研平台建设任务，开展了嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌环介导等温扩增研究，取得了阶段性研究成果，这些工作为本项目顺利完成奠定了基础。

二技术方案论述项目技术关键点和创新点，项目完成时达到技术水平技术关键本项目技术关键之是引物设计。

与常规引物不同，环介导等温扩增引物设计难度大，组引物要求有个位点与靶序列完全匹配才能够进行扩增。

目前我们已从国际基因组数据库中下载了部分病原菌基因组，并根据基因组特点采用等温扩增软件设计了部分引物，现正通过实验确定这些引物性能。

本项目另技术关键是最佳等温扩增体系优化。

通过对引物浓度内引物和外引物最佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条件进行优化，能够获得最佳实验条件。

创新点既往对病原菌检测般采用细菌分离培养鉴定法，但该方法准确率低，所需时间长，往往延误临床正确诊断和治疗。

近年来，人们将技术用于病原菌检测。

技术虽然较传统方法灵敏快速，但需要较昂贵仪器设备。

更为重要是，方法容易产生非法。

以上述研究结果为基础，建立常见病原菌环介导等温扩增和多重环介导等温扩增快速检测技术。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法灵敏度分析将常见病原菌目标基因克隆至载体，转化后提取质粒，倍比稀释成含目基因拷贝数为，以其为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法灵敏度。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法特异性分析分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法特异性。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法与国际标准方法及常规扩增方法比较分析以两个外引物做常规扩增，并与扩增结果进行比较分析，进步判断技术灵敏度特异性和稳定性。

常见病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法在食品检测和临床诊断中应用研究将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同样品检测准确率。

病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒研制根据本项目所建立最佳反应体系和反应产物显示方法，研制开发快速检测病原菌试剂盒包括单病原菌检测试剂盒和多种病原菌同时检测试剂盒。

工艺流程引物优化组合反应体系建立灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对照样品收集核酸提取引物设计基因序列分析三项目技术质量指标本项目建立方法对病原菌检测准确率达到。

本项目建立方法对病原菌目基因检测灵敏度达到拷贝。

本项目建立方法不产生非特异性扩增产物。

对病原菌目基因等温扩增过程在分钟内完成，显色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内完成。

四项目执行过程中各阶段目标年度第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完善实验条件。

第二季度样品采集，病原菌提取。

第三季度等温扩增反应体业经技术培训后可生产本产品。

项目实施风险分析课题组已开，并与扩增结果进行比较分析，进步判断技术灵敏度特异性和稳定性。

常见病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法在食品检测和临床诊断中应用研究将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同样品检测准确率。

病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒研制根据本项目所建立最佳反应体系和反应产物显示方法，研制开发快速检测病原菌试剂盒包括单病原菌检测试剂盒和多种病原菌同时检测试剂盒。

工艺流程引物优化组合反应体系建立灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对照样品收集核酸提取引物设计基因序列分析三项目技术质量指标本项目建立方法对病原菌检测准确率达到。

本项目建立方法对病原菌目基因检测灵敏度达到拷贝。

本项目建立方法不产生非特异性扩增产物。

对病原菌目基因等温扩增过程在分钟内完成，显色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内完成。

四项目执行过程中各阶段目标年度第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完善实验条件。

第二季度样品采集，病原菌提取。

第三季度等温扩增反应体系优化，温育条件优化。

第四季度扩增反应产物检测方法建立快速显色法电泳分析法。

年度第季度环介导等温扩增快速检测病原菌方法操作程序确定，多重等温扩增同时检测多种病原菌实验技术建立。

第二季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法准确度分析。

第三季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法灵敏度分析。

第四季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法与常规扩增方法比较分析。

年度第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法在食品和临床标成果转化基本上不存在市场风险。

五项目预计社会效益环境效益对社会发展作用本项目实施将开发出具有自主知识产权病原菌检测技术和配套试剂盒。

该检测方法简单快速便宜，不需要昂贵仪器设备，易于在基层食品检测部门和医院推广。

这对于保障我省食品安全和人体健康具有重要意法。

以上述研究结果为基础，建立常见病原菌环介导等温扩增和多重环介导等温扩增快速检测技术。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法灵敏度分析将常见病原菌目标基因克隆至载体，转化后提取质粒，倍比稀释成含目基因拷贝数为，以其为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法灵敏度。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法特异性分析分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法特异性。

常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法与国际标准方法及常规扩增方法比较分析以两个外引物做常规扩增，并与扩增结果进行比较分析，进步判断技术灵敏度特异性和稳定性。

常见病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法在食品检测和临床诊断中应用研究将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同样品检测准确率。

病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒研制根据本项目所建立最佳反应体系和反应产物显示方法，研制开发快速检测病原菌试剂盒包括单病原菌检测试剂盒和多种病原菌同时检测试剂盒。

工艺流程引物优化组合反应体系建立灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对照样品收集核酸提取引物设计基因序列分析三项目技术质量指标本项目建立方法对病原菌检测准确率达到。

本项目建立方法对病原菌目基因检测灵敏度达到拷贝。

本项目建立方法不产生非特异性扩增产物。

对病原菌目基因等温扩增过程在分钟内完成，显色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内完成。

四项目执行过程中各阶段目标年度第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完善实验条件。

第二季度样品采集，病原菌提取。

第三季度等温扩增反应体系优选题的必要性项目所处技术领域产业政策本项目属生物高技术领域，是国家重点支持的研究领域，项目主要针对严重影响人类健康的主要病原菌的检测与诊断需要进行检测技术的研究与试剂盒的开发，本项目的实施可产生具有自主知识产权的科研成果。

本项目技术含量高，市场竞争力强，项目完成后能够产生较好的经济效益和社会效益，项目符合国家产业技术政策。

病原菌检测工作