抗酸性细菌。

三鞭毛染色原理细菌的鞭毛能被碱性复红酒精饱和溶液着色，是因为在染色过程中随着酒精的蒸发其染料沉积在鞭毛上，使鞭毛着色。

碱性复红作为主要染料，而丹宁酸为媒染剂。

方法采用点种法接种的变形杆菌或其他鞭毛菌，近离接种点的菌，鞭毛细，菌体较短远离接种点的菌，鞭毛粗，菌体长，用无菌接种环取远离接种点的菌混悬于盛有无菌蒸溜水的平皿内，不要研磨以免鞭毛脱落，置室温放置，使鞭毛膨大。

用毛细滴管将菌液滴于洁净的玻片上，缓慢倾斜玻片任菌液流开，始之成为均匀薄膜，将玻片置温箱内，任其自然干燥，切勿用火焰固定。

在干燥标本片上滴加鞭毛染色液滴，使覆盖于薄膜上，作用后轻轻用水冲，干后镜检观察。

结果菌体染成红色或深紫色，鞭毛染成淡红色或淡紫色，染色时间越长，鞭毛越粗。

四荚膜染色原理荚膜为细菌细胞壁外围的黏液层，对染料的亲和力很低，用般染色不易着色，必须通过荚膜染色方法或衬托染色，方能清晰辨认出荚膜。

方法用有荚膜的细菌培养物涂片，火焰固定，固定标本后加结晶紫染液，室温保持后，倒去染液，然后用硫酸铜水溶液冲洗染液，勿水洗。

待干后镜检观察。

结果菌体为深紫色，荚膜为无色或淡紫色。

二培养接种划线接种方法斜线法曲线法方格法放射法四格法。

斜线法曲线法方格法放射法四格法二培养基血平板巧克力血平板伊红美蓝平板麦康凯平板平板平板三生化反应碳水化合物的代谢试验糖醇苷类发酵试验原理不同种类细菌含有发酵不同糖醇苷类的酶，因而对各种糖醇苷类的代谢能力也有所不同，即使能分解种糖醇苷类，其代谢产物可因菌种而异。

检查细菌对培养基中所含糖醇苷降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

方法在基础培养基中如酚红肉汤基础培养基加入的特定糖醇苷类。

所使用的糖醇苷类有很多种。

将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置孵育箱内孵育数小时后，观察结果若用微量发酵管，或要求培养时间较长时。

结果能分解糖醇苷产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应如酚红变为黄色，产气的细菌可在小倒管小管中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。

不分解糖则无变化。

应用是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。

葡萄糖代谢类型鉴别试验试验原理细菌水解七叶苷的能力。

七叶苷被细菌分解生成的七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物。

方法将被检菌接种于胆汁七叶苷培养基中，孵育后，观察结果。

结果培养基完全变黑为阳性，不变黑为阴性。

应用主要用于鉴别肠球菌与其他链球菌的区别，以及肠杆菌科的些种些厌氧菌如脆弱拟杆菌等的初步鉴别。

肠球菌本试验为阳性。

二细菌对于蛋白质和氨基酸的代谢试验明胶液化试验原理些细菌可产生种胞外酶明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。

方法将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于培养，逐日观察结果。

若用孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置冰箱内，再看结果。

结果培养基呈液化状态为阳性。

应用肠杆菌科细菌的鉴别，如沙雷菌普通变形杆菌奇异变形杆菌阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。

有些厌氧菌如产气荚膜梭菌脆弱类杆菌等也能液化明胶。

另外多数假单胞菌也能液化明胶。

阴性阳性吲哚靛基质试验原理些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚靛基质，当加入吲哚试剂对二甲氨基苯甲醛后则形成红色的玫瑰吲哚。

培养基蛋白胨水培养基。

方法将待检菌接种于上述培养基中，于培养，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。

结果于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

应用主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

硫化氢试验原理些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸如胱氨酸半胱氨酸产生硫化氢，硫化氢遇铅或亚铁离子则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀。

此试验可间接检测细菌是否产生硫化氢。

培养基醋酸铅培养基。

方法将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于培养观察结果。

结果培养基变黑为阳性，不变为阴性。

应用主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。

如沙门菌属爱德华菌属亚利桑那菌属枸橼酸杆菌属变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。

沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。

尿素分解试验原理些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性。

培养基尿素培养基。

方法将待检菌接种于尿素培养基，于培养观察结果。

结果培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。

应用主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。

奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。

另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

阳性阴性阴性苯丙氨酸脱氨酶试验原理些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化铁试剂后产生绿色反应。

培养基苯丙氨酸琼脂培养基。

方法将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于培养，滴加三氯化铁试剂滴，自斜面上方流下。

结果出现绿色为阳性。

应立即观察结果，延长反应时问会引起褪色。

加氯化铁试剂出现绿色为阳性应用主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

变形杆菌属普罗威登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠杆菌种中其他细菌均为阴性。

氨基酸脱羧酶试验原理具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺赖氨酸尸胺，鸟氨酸腐胺，精氨酸精胺和二氧化碳，使培养基变碱。

使指示剂显示出来。

培养基氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。

方法将被检菌分别接种于赖氨酸或鸟氨酸或精氨酸培养基和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡或矿物油，于培养，每日观察结果。

结果孵育后，对照管应呈黄色，测定管呈紫色指示剂为溴甲酚紫为阳性若测定管呈黄色为阴性。

若对照管呈现紫色则试验无意义，重新做试验。

氨基酸对照鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸为阳性赖氨酸为阴性氨基酸对照第章临床微生物学检验技术安徽医科大学徐元宏细菌形态学检验制片涂片取洁净载玻片张，用标记笔分为二，用接种环取生理盐水环，分别置于玻片两端，接种环灭菌后，取金黄色葡萄球菌斜面培养物少许与盐水混匀，并涂成均匀薄膜涂片。

接种环灭菌后以同样方法再取大肠埃希菌少许，与另端生理盐水混匀后涂成均匀薄膜。

如用液体材料，如痰尿液脓汁等可直接涂片，不必加生理盐水。

干燥涂片最好在室温下自然干燥，必要时可将标本面向上，小心间断地在弱火高处烘干，但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。

固定涂片干燥后，将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次，共约，注意温度不可太高，以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。

固定目的杀死细菌使菌体与玻片粘附较牢，在染色时不致被染液和水冲掉菌体蛋白变性易着色。

涂片干燥固定染色镜检二革兰染色法原理革兰阳性细菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入。

革兰阳性菌的等电点低，革兰阴性菌的等电点较高，在相同条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。

革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。

染色方法标本涂片干燥和固定。

染色在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴，室温作用，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。

再滴加碘液数滴，室温作用，冲洗。

滴加酒精数滴，轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片，使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的酒精无色为止约需，立即用细流水将酒精冲掉。

再滴加稀释石炭酸复红液复染约后用细流水冲洗。

标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后用油镜观察。

结果紫色为革兰阳性菌，红色为革兰阴性菌。

二抗酸染色原理分枝杆菌细胞壁含脂质较多，其中主要成分为分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到染色目的。

方法萋纳石炭酸复红染色，加温促使菌体着色流水冲洗，盐酸酒精脱色吕氏美蓝复染。

结果未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌，脱色经复染呈蓝色的细菌为非抗酸性细菌。

三鞭毛染色原理细菌的鞭毛能被碱性复红酒精饱和溶液着色，是因为在染色过程中随着酒精的蒸发其染料沉积在鞭毛上，使鞭毛着色。

碱性复红作为主要染料，而丹宁酸为媒染剂。

方法采用点种法接种的变形杆菌或其他鞭毛菌，近离接种点的菌，鞭毛细，菌体较短远离接种点的菌，鞭毛粗，菌体长，用无菌接种环取远离接种点的菌混悬于盛有无菌蒸溜水的平皿内，不要研磨以免鞭毛脱落，置室温放置，使鞭毛膨大。

用毛细滴管将菌液滴于洁净的玻片上，缓慢倾斜玻片任菌液流开，始之成为均匀薄膜，将玻片置温箱内，任其自然干燥，切勿用火焰固定。

在干燥标本片上滴加鞭毛染色液滴，使覆盖于薄膜上，作用后轻轻用水冲，干后镜检观察。

结果菌体染成红色或深紫色，鞭毛染成淡红色或淡紫色，染色时间越长，鞭毛越粗。

四荚膜染色原理荚膜为细菌细胞壁外围的黏液层，对染料的亲和力很低，用般染色不易着色，必须通过荚膜染色方法或衬托染色，方能清晰辨认出荚膜。

方法用有荚膜的细菌培养物涂片，火焰固定，固定标本后加结晶紫染液，室温保持后，倒去染液，然后用硫酸铜水溶液冲洗染液，勿水洗。

待干后镜检观察。

结果菌体