面，见于些癌细胞和血液淋巴细胞培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来自血，脾或骨髓在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团生存空间大，提供数量大，传代方便不需消化，易于收获，可获得稳定状态观察不方便培养细胞的生长和增殖过程培养细胞生命期所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。原代培养期也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第次传代阶段，般持续周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的，也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强。细胞生存性差。初代培养细胞多呈二倍体核型由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。传代期初代培养细胞经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。反复传代就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。般情况下当传代次左右，细胞增殖逐渐为判定细胞生长旺盛与否的个重要标志。般以细胞分裂指数表示，即细胞群中每个细胞中的分裂相数。般细胞的分裂指数介于，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达。特点是细胞增生最活跃活力最旺盛的阶段培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均是理想的实验用细胞在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续天后，随细胞数量不断增多生长空间渐趋减少最后细胞相互接触汇合成片。细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制。细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。停滞期细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。此时细胞数量不再增加，故也称平台期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累降低。此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。培养细胞的体外生长环境无污染环境超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。滤器压力蒸汽消毒器湿热消毒，用途广电热干燥箱干热消毒，小时。主要用干玻璃器皿消毒滤器过滤除菌大多数培养用液，如人工合成培养基血清酶液等均采用滤过法除菌超净工作台为细胞操作提供无菌环境紫外灯紫外线消毒。主要用于培养室空气操作台塑料培养皿和培养板等表面消毒基质玻璃基质塑料饲养细胞生物性基质处理培养表面金属气体环境和氢离子浓度缓冲液←←液相环境水新鲜配置的三蒸水或去离子水平衡盐溶液无的缓冲液天然培养基天然培养基有血清血浆和组织提取液如鸡胚和牛胚浸液。优点营养成分丰富，培养效果好缺点来源受限。成分复杂，影响对些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染合成培养基合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如等。合成培养基主要成分是氨基酸维生素碳水化合物无机盐和其它些辅助物质。优点标准化生产，组分和含量相对固定。成本低缺点缺少些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充定量的天然培养基如血清。血清中含有多种蛋白质白蛋白球蛋白铁蛋白等多种金属离子激素促贴附物质，如纤粘蛋白冷析球蛋白胶原等。各种生长因子转移蛋白不明成分口腔细胞培养及其应用武汉大学口腔医学院郭继华第节细胞培养细胞培养的基本原理细胞培养模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活生长增殖，并维持其结构功能。培养细胞的形态特点贴壁型细胞必须贴附于支持物表面才能生长。大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型成纤维细胞型胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状火焰状漩涡状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌平滑肌细胞等等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。上皮型细胞细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，起源于内外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物消化管上皮肝胰肺泡上皮等皆成上皮型形态。游走细胞型在支持物上呈散在生长，般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。多型细胞型有些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。悬浮型细胞于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于些癌细胞和血液淋巴细胞培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来自血，脾或骨髓在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团生存空间大，提供数量大，传代方便不需消化，易于收获，可获得稳定状态观察不方便培养细胞的生长和增殖过程培养细胞生命期所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。原代培养期也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第次传代阶段，般持续周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞群是异质的，也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强。细胞生存性差。初代培养细胞多呈二倍体核型由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。传代期初代培养细胞经传代后便改称做细胞系。在全生命期中此期的持续时间最长。在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。反复传代就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。般情况下当传代次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。衰退期此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何点多发生在传代末或衰退期，由于种因素的影响，细胞可能发生自发转化。转化的标志之是细胞可能获得永生性或恶性性。细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系。无限细胞系的形