学按限制酶的组成与修饰酶活性关系，切断核酸的情况不同，分为ⅠⅡⅢ三类Ⅱ类限制性核酸内切酶的特点自学只有限制性活性，无甲基化修饰活性。切割特异性最强，且就在识别位点范围内切断。仅需参与，无需。是分子生物学中应用最广的限制性内切酶。通常在重组技术提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言。三基因工程载体基因工程中常用的载体主要包括质粒噬菌体和病毒三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因单的限制酶切点等。质粒自学是存在于天然细菌体内的种于细菌染色体之外的双链环状，具有复制的能力，通常带有细菌的抗药基因。最早使用的质粒是人工构建的，该质粒分子大小为，带有抗四环素和抗氨苄青霉素基因，含Ⅰ，Ⅰ，Ⅲ等单的限制酶切点。质粒的分子结构噬菌体自学可通过转染方式将其送入细菌体内进行增殖。常用的为人工构建的噬菌体载体。噬菌体两端的片段对于其包装是必需的，因而应予保留而其式将重组噬菌体导入大肠杆菌等宿主细胞。重组导入宿主细胞后，即可在适当的培养条件下进行培养以扩增宿主细胞。对于质粒，还可通过在培养基中加入氯霉素，抑制细菌蛋白质合成及染色体的复制，以单独扩增细胞中的质粒。五重组的筛选和鉴定筛由于重组体导入宿主细胞的比例通常较低，因此需要对含有重组体的宿主细胞进行筛选并作鉴定。可采用以下方法进行抗药性标志对于带有抗药基因的质粒重组体，可采用插入灭活法进行筛选。如中带有抗氨苄青霉素和抗四环素基因，当将目的基因插入抗四环素基因后，就可引起该基因失活，细菌对氨苄青霉素耐药，而对四环素敏感。在含氨苄青霉素的培养基上能够生长，而在含四环素的培养基上不能生长的细菌即为带重组体的细菌。遗传选择标记氨苄青霉素抗性，基因此基因编码内酰胺酶，该酶能水解氨苄青霉素内酰胺环，使之失效而使细菌产生耐药。四环素抗性，基因该基因编码种膜相关蛋白以阻止四环素进入细胞不同的质粒具有不同的抗药基因，质粒的基因若被外源基因插入而失活，就失去了耐药性，因此抗药基因常作为基因工程的筛选标志。遗传选择标记绒布二标志补救当宿主细胞存在种基因及其表达产物的缺陷时，可采用此方法筛选重组体。即在载体分子中插入相应的缺陷基因，如宿主细胞重新获得缺陷基因的表达产物，则说明该细胞中带有重组体。三电泳筛选经过粗筛后的含重组体的细菌，还需进行限制酶谱分析进步鉴定。将单细菌进行扩增后分别提取其，用重组时所用的同限制酶进行酶切，再将其与不含目的基因的载体起进行电泳比较分析，如发现出现目的基因片段的电泳带即证明重组体中带有目的基因。四免疫学方法筛选这是利用特异抗体与目的基因的表达产物作为抗原之间相互作用进行筛选，而不是直接去鉴定靶基因。六克隆基因表达自学第四节分子生物学实验技术自学第五节基因诊断和基因治疗自学第十三章基因重组与分子生物学技术第节自然界的基因转移和重组自学第二节基因重组技术基因重组是指片段在细胞内细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。基因工程是指采用人工方法将不同来源的进行重组，并将重组后的引入宿主细胞中进行增殖或表达的过程。基因工程主要步骤载体和目的基因的分离载体和目的基因的切断载体和目的基因的重组重组的转化和扩增重组的筛选和鉴定。二重组中的工具酶限制性核酸内切酶可以识别的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链，被称为基因工程的手术刀限制性核酸内切酶的命名自学按酶的来源的属种名而定，取属名的第个字母与种名的头两个字母组成的三个斜体字母作略语表示如有株名，再加上个字母，其后再按发现的先后写上罗马数字。例如从流感嗜血杆菌株中先后分离到种限制酶，则分别命名为ⅠⅡ和Ⅲ。二限制性核酸内切酶的分类自学按限制酶的组成与修饰酶活性关系，切断核酸的情况不同，分为ⅠⅡⅢ三类Ⅱ类限制性核酸内切酶的特点自学只有限制性活性，无甲基化修饰活性。切割特异性最强，且就在识别位点范围内切断。仅需参与，无需。是分子生物学中应用最广的限制性内切酶。通常在重组技术提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言。三基因工程载体基因工程中常用的载体主要包括质粒噬菌体和病毒三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因单的限制酶切点等。质粒自学是存在于天然细菌体内的种于细菌染色体之外的双链环状，具有复制的能力，通常带有细菌的抗药基因。最早使用的质粒是人工构建的，该质粒分子大小为，带有抗四环素和抗氨苄青霉素基因，含Ⅰ，Ⅰ，Ⅲ等单的限制酶切点。质粒的分子结构噬菌体自学可通过转染方式将其送入细菌体内进行增殖。常用的为人工构建的噬菌体载体。噬菌体两端的片段对于其包装是必需的，因而应予保留而其中间部分则可进行改造或置换，使之具有种单的限制酶切点。目的基因与噬菌体进行重组时，可采用插入重组方式，也可采用置换重组方式。第三节基因重组基本过程自学基本过程分分离获得目的基因和载体。切将目的基因和载体进行用适当的限制性内切每切出特定的切口。接用连接酶将目的基因和载体相拚接，形成重组子。转将重组子用恰当的方法转入宿主细胞中，产生克隆。筛根据重组子