在人工授精工作的基础上于世纪年代开始在生产上探索并应用，其结果远不如象家畜精液冷冻那样拥有整套完备的成熟技术措施，这是狐属动物在人工饲养条件下繁殖力不高的表现。文献查新表明，稀释液是精子的保护剂，对精液的保存效果起决定性作用。关于银黑狐冷冻稀释液方面的研究报道很少。本选题设计不同稀释液对银黑狐精子低温保存的影响的进行研究，筛选出种高效低温保存银黑狐精子的稀释液配方，可以提高银黑狐人工授精技术的效率。冷冻精液的应用可进步提高优良种公狐的配种潜力，可进行种间杂交，可使母狐配种不受时间地域的限制。通过研究不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响，筛选出种高效低温保存银黑狐精子的稀释液配方，可以提高银黑狐人工授精技术的效率，获得更大的经济效益。为普及银黑狐的冷配提供科学依据，对发展我国养狐业集约化科学化和规范化饲养具有极其重要的意义。本研究对银黑狐精液用伊利尼变温液氨基乙酸卵黄牛奶葡萄糖卵黄种低温稀释液稀释保存，在保存的过程中对精子的质量从活率质膜的完整性顶体的完整性进行了检测。利用伊红苯胺黑检测精子的活率利用低渗肿胀实验检测精子质膜的完整性利用考马斯亮蓝染色检测精子顶体的状态。为探讨行之有效的精液低温保存的稀释液配方，提高银黑狐人工授精技术的效率提供依据。不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响材料与方法稀释液是精子的保护剂，对精液的保存效果起决定性作用。般的稀释液由糖类蛋白质脂类缓冲液保护剂和其他添加物质组成。动物精液种类不同，所用方法不同其稀释液的组成也不同。本试验选用伊利尼变温液氨基乙酸卵黄牛奶葡萄糖卵黄种稀释液对银黑狐精液进行低温保存，从精子活率质膜完整性顶体状态个方面对精子质量进行检测，旨在筛选出种高效低温保存银黑狐精子的稀释液配方，为普及银黑狐的冷配提供理论依据。材料试验动物试验动物为岁的健康种银黑狐只，均为雄性。试验地点精液采集于年月至月在吉林市左家狐场。稀释液配制及试验样品测试在吉林农业科技学院动物繁殖实验室完成。精液的采集采用手握法采精，将公狐固定于采精架上，呈站立姿势，待其安静后，用的高锰酸钾水对阴茎及其周围部位进行消毒。然后，用右手拇指食指和中指握阴茎龟头尖端，上下轻轻滑动，待阴茎稍有突起时将阴茎由公狐两后腿间拉向后方，上下按摩数次，约，公狐即可产生射精反射，左手持集精杯随时准备接取精液。然后对鲜精液进行品质检查，选取活力在以上，密度在个以上的精液用于冷冻。精液的稀释保存稀释液配方试验选用氨基乙酸卵黄牛奶葡萄糖卵黄种稀释液，种稀释液配方见表。不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响表银黑狐精液低温保存稀释液成分每成分稀释液配方氨基乙酸卵黄牛奶葡萄糖卵黄柠檬酸钠碳酸氢钠氯化钾葡萄糖氨苯磺胺氨基乙酸乳糖蔗糖奶粉甘油卵黄链霉素万青霉素万精液的稀释稀释液均为实验当日新配制，试验前将四种稀释液作水溶同温处理，选取活力在密度在个以上的精液，与注同行数据肩标大写字母不同表示差异显著同列数据肩标小写字母不同表示差异显著。从表可知种稀释液对蓝狐精液顶体完整性的保存效果依次为氨基乙酸葡萄糖卵黄卵黄牛奶。新鲜的精液中，具有完整顶体精子的百分率为。种稀释剂保存精子顶体完整比率非常高。当保存时，种稀释液顶体完整性还很高，之后顶体完整性比率不断下降，氨基乙酸稀释液下降缓慢。在时，氨基乙酸稀释液最好，为。银黑狐精液在不同稀释剂保存下不同方法间的相关系数表不同方法检测银黑狐精子在不同稀释液低温保存时质量的相关系数方法伊红苯胺黑低渗试验考马斯亮蓝伊红苯胺黑低渗试验考马斯亮蓝用低渗肿胀试验和考马斯亮蓝染色法同时检测精子头尾部膜的功能状态，用伊红苯胺黑染色和考马斯亮蓝染色法同时检测精子的活率和顶体的完整性，结果均高度相关，显示数据稳定可靠。不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响讨论稀释液对精子的体外保存起着决定性的作用，稀释液的成分影响精液的质量。卵黄对精液质量的影响试验选择的种稀释液中都加入了卵黄，通常卵黄被用来防止冷刺激，它可以直接渗透到质膜内，保持质膜稳定性，防止由于膜不稳定引起获能顶体反应导致的精子死亡。甘油对精液质量的影响试验中，氮基乙酸可作为精子呼吸的代谢基质，增强其存活时间。葡萄糖卵黄稀释液中加入了甘油，甘油作为种抗冻物质已广泛应用于冷冻精液中，但在低温稀释液中加入甘油，保存效果并不十分理想。这可能是由于低温保存时精子的新陈代谢作用比冷冻保存时活跃，而甘油具有弱毒性且能渗入到精子内，使精子的形态受到损伤。稀释液中的碳酸氢钠和氯化钾虽能补充保存过程中钠钾离子的缺失，但对精子保存效果并不理想。卵黄牛奶稀释液中的牛奶和卵黄都含有卵磷脂脂蛋白及其复合物，具有防止精子冷体克的作用，但二者在同稀释液中的保存效果不明显，是种低温稀释液中对精子保存效果最差的，与期望结果差异显著，其原因还需进步深入研究。不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响结论种稀释液对银黑狐精子低温保存效果依次为氨基乙酸葡萄糖卵黄卵黄牛奶。低温稀释液葡萄糖卵黄卵黄牛奶稀释液在保存氨基乙酸稀释液在保存时精液中精子的活率质膜及顶体的完整性仍高于，均可用于输精，氨基乙酸稀释液是种稀释液中对精子低温保存效果最好的。利用氨基乙酸稀释液低温保存银黑狐精子的稀释液配方，可以解决精子解冻后的低成活率和人工授精后的低繁殖率的问题，使得银黑狐精液冷冻技术得以推广，提高经济效益，对发展我国科学化集约化养狐有促进作用。不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响参考文献钱国成狐的人工授精技术特种经济动植物，耿孝媛,吴晓民,车利锋,等北极狐乌苏里貉精液细管冷冻技术研究经济动物学报，李新红，顾孝连，华修国，等甘油浓度对蓝狐精子深低温冷冻保存的影响及冻融前后精子的超微结构动物学研究,伊晓宇狐狸人工授精技术要点黑龙江动物繁殖，暨诚欣,刘志平蓝狐精子常温保存与低温保存的比较研究经济动物学报，郭春来,白玉妍,刘志平精清对蓝狐精子常温保存存活时间的影响经济动物学报，刘志平,白玉妍,张娟茹狐精液精子密度简易检测法的初步研究经济动物学报，左福元，赵智华等海福特牛精液品质及保存稀释液配方研究四川畜牧兽医学院学报，鲜红，郑鸿培猪精液常温保存研究进展黑龙江动物繁殖，刘玉堂精液冷冻保存的影响因素分析黑龙江动物繁殖，刘伟,金月,金日明,等不同稀释液对圈养黑熊精液品质的影响四川动物，马承宝,张洪海,刘国世,等蓝狐细管冻精的研究中国畜牧杂志，茹干达，杨利国，等波尔山羊精液低温保存液的研究黑龙江畜牧兽医，项智锋,王清华,张金洲,等稀释液清洁剂冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响安徽农业科学，不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响致谢本论文是在宋百军副教授的悉心指导下完成的。宋百军副教授具有丰富的学识和实践经验，在整个论文实验和论文写作过程中，对我进行了耐心的指导和帮助，提出严格要求，引导我不断开阔思路，为我答疑解惑，鼓励我大胆创新，使我在这段宝贵的时光中，既增长了知识开阔了视野锻炼了心态，又培养了良好的实验习惯和科研精神。在此，我向我的指导老师表示最诚挚的谢意,感谢吉林市左家马虎头养狐场的赵洪文先生提供试验动物和无私的帮助。最后，衷心地感谢在百忙之中评阅论文和参加答辩的各位专家教授,吉林农业科技学院学士学位论文论文题目不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响年级专业级野生动物与自然区保护管理学生姓名学号指导教师评阅教师完成日期年月日吉林农业科技学院不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响学生专业野生动物与自然保护区管理指导教师摘要用种稀释液对只岁的健康种银黑狐精液进行体外低温保存，采用伊红苯胺黑法检测精子活率，低渗肿胀法检测精子质膜的完整性，考马斯亮蓝染色法检测精子的顶体状态。结果表明氨基乙酸稀释液低温保存时精子的活率质膜的完整性顶体的完整性明显优于其他种稀释液，在第时，精子活率为，质膜完整性为，顶体完整性为。关键词银黑狐精液冷冻保存稀释剂不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响,不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响目录摘要前言材料与方法材料试验动物试验地点精液的采集精液的稀释保存稀释液配方精液的稀释精液的保存精液品质评价精子活率的检测子活率的检测质膜完整性的检测顶体状态的检测结果与分析伊红苯胺黑染色法检测精子活率低渗肿胀试验检测精子质膜完整性考马斯亮蓝染色法检测银黑狐精液中顶体完整精子的比率银黑狐精液在不同稀释剂保存下不同方法间的相关系数讨论卵黄对精液质量的影响甘油对精液质量的影响结论参考文献致谢不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响前言目前，狐人工授精技术作为养狐业的项重大技术，在引进芬兰蓝狐改良我国现有蓝狐品质的过程中，已愈来愈被广大养狐者所重视。随着人工授精技术的不断开展，精液的体外保存就显得十分重要。目前生产中主要使用鲜精进行人工授精，受孕率也比较理想，但精子的存活时间短，使优良的种狐资源难以得到充分利用，造成些优良精液的浪费。由于精子解冻后的低成活率和人工授精后的低繁殖率，使得银黑狐精液冷冻技术难以得到推广。精液的低温保存可以减少冷冻对精子的损伤，而且存活时间比常温时明显延长，可用于人工授精。但随着体外保存时间的延长，精子的受精能力会逐渐降低。所以，银黑狐精液低温保存及保存时精子质量的评价就显得非常重要。在我国，研究狐的人工授精开始于世纪年代，而冷冻精液的研究是在人工授精工作的基础上于世纪年代开始在生产上探索并应用，其结果远不如象家畜精液冷冻那样拥有整套完备的成熟技术措施，这是狐属动物在人工饲养条件下繁殖力不高的表现。文献查新表明，稀释液是精子的保护剂，对精液的保存效果起决定性作用。关于银黑狐冷冻稀释液方面的研究报道很少。本选题设计不同稀释液对银黑狐精子低温保存的影响的进行研究，筛选出种高效低温保存银黑狐精子的稀释液配方，可以提高银黑狐人工授精技术的效率。冷冻精液的应用可进步提高优良种公狐的配种潜力，可进行种间杂交，可使母狐配种不受时间地域的限制。通过研究不同配方稀释液对银黑狐精液冷冻保存质量的影响，筛选出种高效低温保存银黑狐精子的稀释液配方