记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答下列问题过程需要的酶有和。要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为态然后将在缓冲液中混合培养完成转化过程。含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过和。如果要确保再生植株中含有抗虫基因，可在过程的培养基中加入。限制酶连接酶感受重组质粒和感受态细胞脱分化再分化卡那霉素解析基因表达载体构建过程中，需要用同种限制酶切割目的基因和载体，使它们产生相同的粘性末端，再用连接酶把这两个片段连接起来。农杆菌转化法导入目的基因时，首先必须用处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态然后将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程。植物组织培养过程的关键步骤是脱分化和再分化。因为只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长，故若要确保再生植株中含有抗虫基因，可在过程的培养基中加入卡那霉素。浙江四校高三联考抗凝血酶Ⅲ蛋白是种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题图为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。图中过程指的是利用法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是。在胚胎移植前，需进行，目的是确定要培育的个体能产奶。显微注射动物体细胞的全能性般不能表现性别鉴定从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。从牛胃细胞中提取，再通过形成。以此为模板通过扩增目的基因，有时需要在引物的端设计填“限制酶”“连接酶”或“聚合酶”识别序列，以便构建重组分子。为提高重组分子的比例，在构建重组分子如图所示时最好选用作限制酶。逆转录限制酶Ⅰ和Ⅰ经研究发现，如果将该凝乳酶的第位和位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤。找到相对应的脱氧核苷酸序列定向改造凝乳酶基因将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞等答案合理即可解析图是培育转基因牛的简易流程图，所以过程指的是将目的基因导入受精卵，采用的方法为显微注射法。动物体细胞的全能性般不能表现，所以选择受精卵作为受体细胞。只有母牛才能产奶，所以进行胚胎移植前需要对胚胎进行性别鉴定。以为模板获得的过程称逆转录。技术用于快速扩增目的基因，而基因工程中只需用限制酶来切割。目的基因两末端碱基序列不同以及切开的质粒两末端碱基序列不同才能避免各自的自连，进而提高重组的比例。命题点克隆技术如图可表示细胞融合技术的些过程，请据图回答若细胞为动物细胞，融合为的过程说明了细胞膜具有的特点。若到的过程是体外受精过程，则精子必须进行处理，卵子必须发育到时期，用处理，可以获得较多的卵子。流动性获能减数第二次分裂中期促性腺激素若细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解掉了，这种酶可能是酶。细胞到细胞的过程中，常用的物理方法是融合完成的标志是形成的细胞还要应用技术把培养成植株。培养过程中，所用的固体培养基除了添加水无机盐糖等营养物质，还必须加入和细胞分裂素等调节物质。细胞壁纤维素酶和果胶离心振动电刺激形成了新的细胞壁植物组织培养生长素若细胞为骨髓瘤细胞，细胞为能产生抗体的淋巴细胞，那么细胞称为细胞，这种细胞既能无限增殖，又能产生。从中选择出它的方法是在特定的培养基中培养。该过程中所形成的有种仅限于两个细物细胞，融合为的过程说明了细胞膜具有的特点。若到的过程是体外受精过程，则精子必须进行处理，卵子必须发育到时期，用处理，可以获得较多的卵子。流动性获能减数第二次分裂中期促性腺激素若细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶降解掉了，这种酶可能是酶。细胞到细胞的过程中，常用的物理方法是融合完成的标志是形成的细胞还要应用技术把培养成植株。培养过程中，所用的固体培养基除了添加水无机盐糖等营养物质，还必须加入和细胞分裂素等调节物质。细胞壁纤维素酶和果胶离心振动电刺激形成了新的细胞壁植物组织培养生长素若细胞为骨髓瘤细胞，细胞为能产生抗体的淋巴细胞，那么细胞称为细胞，这种细胞既能无限增殖，又能产生。从中选择出它的方法是在特定的培养基中培养。该过程中所形成的有种仅限于两个细胞的融合。杂交瘤特异性抗体选择解析动物细胞融合体现了细胞膜的结构特点具有定的流动性若表示体外受精过程，则精子进行获能处理，卵子必须发育到减数第二次分裂中期，另外用促性腺激素可进行超数排卵处理。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专性原理，可以用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁得到原生质体原生质体融合常用物理方法如离心振动和电刺激，化学方法如聚乙二醇细胞融合完成的标志是杂种细胞形成新的细胞壁。杂种细胞还要经过植物组织培养过程中的脱分化和再分化形成杂种植株，应向固体培养基中加入生长素和细胞分裂素。若细胞为骨髓瘤细胞，细胞为淋巴细胞，经过动物细胞融合形成杂交瘤细胞，特点是既能无限繁殖又能产生特异性抗体。需要用特定的选择培养基进行筛选，以获得杂交瘤细胞。制备单克隆抗体的过程中融合后的细胞有三种情况细胞自身融合的细胞骨髓瘤细胞自身融合的细胞及细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。答题时不能混用的两种细胞重组细胞和杂交细胞重组细胞体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞之后形成的细胞叫重组细胞。杂交细胞动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。明确单克隆抗体制备过程中的两次筛选第次筛选利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即型细胞为效应细胞，为骨髓瘤细胞，不需要型细胞。第二次筛选利用多孔板法和抗原抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示叶片洗净灭菌切条酶解原生质体悬液过滤离心纯净的原生质体培养基中培养愈伤组织胚状体植株培育胚状体利用了这项生物技术，胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了。培养基中除了含有定的营养外，还必须含有等植物激素，还需要对培养基进行严格的。如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的，若为了获得三七的细胞产物，则只需要培养到若为了获得三七的人工种子，则需要培养到。如果愈伤组织是棉花叶肉细胞培养产生的，通过基因工程要获取抗虫棉，目的基因导入棉花愈伤组织细胞常用的方法是法。植物组织培养植物细胞的全能性细胞分裂素生长素灭菌愈伤组织胚状体农杆菌转化从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，必须要经过。有丝分裂减数分裂原代培养传代培养植物体细胞杂交细胞融合脱分化再分化解析离体植物细胞通过脱分化形成愈伤组织，通过再分化形成具有根和芽的胚状体，再通过细胞分裂分化发育成个完整的植株。该技术称为植物组织培养，其原理为植物细胞的全能性。培养基的成分为水无机盐维生素氨基酸蔗糖植物激素生长素和细胞分裂素等等培养基要求进行严格的灭菌。要获得细胞的代谢产物，将三七叶肉细胞培养到愈伤组织即可获得人工种子需培养至胚状体棉花为双子叶植物，导入抗虫基因常用农杆菌转化法。离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分化和有丝分裂形成愈伤组织，再分化和有丝分裂形成具有根和芽的胚状体。浙江部分重点中学月调研年，科学家首次对哺乳动物小鼠成功进行了核移植实验，实验流程如下核移植小鼠染色体组型与鼠相同填“灰”或“黑”。利用技术将重组胚胎移入白鼠子宫内让其继续发育，暂不移入的胚胎可将其置于条件下保存。灰胚胎移植冷冻低温液氮年，英国科学家培育克隆羊“多利”的实验方法与本题所涉及的实验方法基本相似，所不同的是克隆羊移植的细胞核不是来自具有发育潜能多样性的囊胚期的细胞，而是来自成熟母羊的细胞，克隆羊“多利”的成功证实了。利用核移植技术产生的动物可以用于等方面的研究。内细胞团体乳腺高度分化的动物细胞的细胞核具有全能性药物生产答案合理即可优良种畜的培育与扩大治疗性克隆拯救濒危动物答案合理，不与前空答案重复即可解析根据细胞核移植对象不同，可将核移植技术分为胚胎细胞核移植技术体细胞核移植技术等。题中的克隆小鼠属于胚胎细胞核移植，因为灰鼠提供了细胞核，所以核移植小鼠的染色体组型与灰鼠相同。利用胚胎移植技术将重组胚胎移入白鼠子宫内让其继续发育，暂不移入的胚胎可将其置于冷冻低温液氮等条件下保存。克隆羊“多利”的产生利用的是体细胞核移植，说明动物细胞核仍保持有该物种遗传特性所需要的全套遗传物质，故高度分化的体细胞的细胞核具有全能性。核移植技术主要应用在利用转基因克隆动物进行生物药物生产培育优良种畜且扩大良种种群拯救濒危动物治疗性克隆研究生物学基本问题等方面。下图是实验室做的通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究。据图回答下列问题细胞的名称分别是。骨髓瘤细胞抗原刺激过的细胞或效应细胞杂交瘤细胞过程类似于植物组织培养技术中的过程。与纤维母细胞相比，诱导干细胞的全能性较。过程的实质是。生产单克隆抗体般不直接培养效应细胞，主要原因是。脱分化高基因的选择性表达效应细胞高度分化，不能无限或大量增殖处需要筛选，从而得到细胞，且培养该细胞的气体环境为。能产生特异性抗体的杂交瘤的空气的方法规律动物细胞培养的特殊条件胰蛋白酶的使用首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织，以制备单细胞悬液培养过程中发生接触抑制时，同样需要用胰蛋白酶使细胞分散开。避免杂菌污染的措施培养液及培养用具灭菌处理，加入定量的抗生素，定期更换培养液。特殊的营养条件液体培养基加入动物血清血浆等通入氧气以满足代谢的需要通入二氧化碳以维持培养液的。第讲基因工程和克隆技术专题八现代生物科技专题高考导航专题八现代生物科技专题考纲要求高考印证年年年基因工程基因工程的诞生Ⅰ基因工程的原理及技术Ⅱ基因工程的应用Ⅰ克隆技术植物的克隆Ⅰ动物的克隆Ⅰ专题八现代生物科技专题备考策略命题趋势多以最新基因工程研究成果为载体，考查基因工程的工具与操作程序。以工农业生产畜牧业生产和医学实践中的具体事例为命题背景，考查克隆技术相关知识。备考指南表解比较法理解限制酶连接酶和载体的作用。实例分析法理解基因工程的原理与过程。列表比较法理解两个不同植物组织培养和动物细胞培养的不同植物体细胞杂交与动物细胞融合的不同。图解法理解单克隆抗体的制备过程。基因工程的工具限制性核酸内切酶来源主要从原核生物中分离纯化出来。作用结果产生。特异性识别双链分子的种特定核苷酸序列。切割两个核苷酸之间的化学键。粘性末端连接酶作用将具有的两个片段连接在起。质粒从存在位置看在细菌中于拟核之外。从化学成分上看为双链环状分子。从功能上看能自主复制。从结构上看常含有抗生素抗性基因。相同粘性末端基因工程的操作步骤目的基因的获取途径方法具体操作直接分离从自然界已有的物种中分离，如从中获取人工合成化学合成已知核苷酸序列的，直接利用合成仪用化学方法合成，不需要模板基因文库较小基因方法具体操