上称量，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称取后及时盖上瓶盖熔化将称好的牛肉膏和称量纸同放入烧杯，加入少量水，加热，取出称量纸，加入称量好的蛋白胨和氯化钠，加琼脂。在熔化时注意玻璃棒要不断地搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂，最后定容至灭菌灭菌前，调节高压蒸汽灭菌倒平板待培养基冷却至左右时，在酒精灯火焰附近倒平板高考警示培养基的配制原则目的要明确根据微生物的种类培养目的等选择原料配制培养基，如培养自养型的微生物就不用加入有机营养物质。营养要协调注意各种营养物质的浓度和比例。要适宜各种微生物适宜生长的范围不同。微生物对主要营养物质的需求特点不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。纯化微生物的接种方法两种接种方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基上。在数次划线后培养，可以分离到由个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落将菌液进行系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征项目平板划线法稀释涂布平板法缺点不能计数吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌示意图平板划线操作的注意事项操作第步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表第次操作每次划线之前划线结束目的杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。第二次及其以后的划线操作总是从上次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线时最后区不要与第区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。武汉质检微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是导学号煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌解析无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿培养基添加剂指示剂或染色剂等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢，属于消毒为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌培养基常进行高压蒸汽灭菌。故操作错误。答案下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是导学号甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为，则所得的菌落不是由单的细胞或孢子繁殖而成乙中培养皿中所得的菌落都符合要求乙中的连续划线的起点是上次划线的末端解析灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，正确。稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在起繁殖成菌落，正确。平板划线法中最后次划线的末端处形成的菌落才是由单的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，错误。连续划线中，除了第次划线外，每次划线的起点是上次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单的细胞或孢子繁殖而成。答案技巧点拨消毒和灭菌的辨析项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌选择培养基的选择方法在培养基中加入种化学物质例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌加入高浓度的食盐可以分离出金黄色葡萄球菌。注意这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。微生物的筛选和计数改变培养基中的营养成分例如，缺乏氮源时可分离出固氮微生物石油作为唯碳源时可分离出消除石油污染的微生物。改变微生物的培养条件例如，将培养基置于高温环境中培养，可得到耐高温的微生物。筛选分解尿素的细菌与分解纤维素的微生物的比较项目土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离选择培养基以尿素为唯氮源的选择培养基富含纤维素的选择培养基鉴定方法在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，升高，说明细菌能分解尿素刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈特有代谢过程脲酶纤维素酶酶纤维二糖葡萄糖苷酶葡萄糖微生物的计数两种计数方法的比较比较项目间接计数法稀释涂布平板法直接计数法显微计数法原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个菌落，来源于样品稀释液中的个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算定容积的样品中微生物的数量比较项目间接计数法稀释涂布平板法直接计数法显微计数法公式每克样品中的菌落数稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液的体积稀释倍数每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在起时，平板上观察到的只是个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大设置对照和重复比较项菌落数在的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。下列说法错误的是导学号因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同只有得到了个或个以上菌落数目在的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出些细菌菌落解析样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约占，其次是放线菌，最少的是真菌，所以为获得不同类型的微生物，要按不同稀释倍数进行分离在同稀释度下只要得到个或个以上的菌落数目在的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。答案新课标Ⅰ卷，植物秸秆中的纤维素可被些微生物分解。回答下列问题导学号分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将分解成。在含纤维素的培养基中加入刚果红时，可与纤维素形成色复合物。用含有的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的。为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，同学设计了甲乙两种培养基成分见下表注表示有，表示无。酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂溶液水培养基甲培养基乙据表判断，培养基甲填“能”或“不能”用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是培养基乙填“能”或“不能”用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是。解析纤维素是种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质，能被土壤中些微生物分解利用分解纤维素的纤维素酶是种复合酶，般认为它至少包括三种组分，即酶酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。根据有无琼脂成分可推知，培养基甲为液体培养基，培养基乙为固体培养基纤维素分解菌分离和鉴别要用固体培养基，培养基甲不符合要求培养基乙不含纤维素粉，不能形成特定的红色复合物，乙培养基不符合要求。答案纤维二糖葡萄糖红透明圈不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌技巧点拨两种常用刚果红染色法的比较方法方法二过程培养基长出菌落覆盖倒出加入溶液倒掉溶液产生透明圈配制溶液灭菌按照溶液培养基比例混匀倒平板培养透明圈方法方法二优点显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落的混杂问题缺点操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂由于纤维素和琼脂土豆汁中都含淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显透明圈，与纤维素分解菌不易区分思维导图要点强记无菌操作技术包括消毒和灭菌，消毒包括煮沸消毒巴氏消毒化学药剂消毒和紫外线消毒等灭菌包括灼烧灭菌干热灭菌和高压蒸汽灭菌。培养基的制备包括计算称量溶化灭菌倒平板等步骤，倒置平板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次划线，稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。微生物的计数要求制作多个平板，且每个平板上能长出个菌落。尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯的碳源。海淀质检通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长在培养基中加入的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出导学号大肠杆菌霉菌放线菌固氮细菌只有答案解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长在培养基中加青霉素可以抑制细菌和放线菌等原核生物细胞壁的合成，而霉菌属于真核生物，故能生长在培养基中加入的酚可以抑制细菌和霉菌的生长，对放线菌的生长无影响。石家庄检测欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是导学号将土壤用无菌水进行系列的梯度稀释同浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板可将未接种的培养基在相同条件下作为对照进行培养用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌答案解析为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行系列的梯度