，得原核表达载体，该载体转化大肠埃希氏菌后可诱导表达出分子量约为的重组蛋白。

以目前广泛使用的原核表达系统大肠埃希菌来构建核心基因的表达载体。

同真核表达系统相比，大肠埃希菌具有较多的优点，其表达目的蛋白快速高效经济。

其本身繁殖力强。

但由于原核细胞缺乏真核细胞所特有的翻译后加工修饰系统，如糖基化等，使不少具有生物活性的糖蛋白不能利用原核表达系统表达而且蛋白的高水平表达常形成包涵体，而包涵体的溶解纯化步骤繁琐，也正因为如此，以包涵体形式表达的重组蛋白的分离纯化以及融合蛋白的复性成为了原核表达系统应用过程中遇到的主要障碍之。

本研究还可以优化地方，如工程菌在大肠杆菌中诱导时间的优化，可以选择多个时间段诱导比较蛋白表达量，从而选择个最佳的诱导时间湖南理工学院本科毕业论文实胶回收纯化试剂盒购自公司购自公司购自公司院本科毕业论文材料和方法醋酸溴化乙锭硼酸磷酸氢二钠磷酸二氢钠醋酸钠。

试剂盒购自公司质粒提取试剂盒购自公司。

兔抗人北京博奥森产品。

聚苯乙烯酶联板深圳金创华产品。

国产分析纯苯酚氯仿无水乙醇异丙醇甘油氯化钠琼脂湖南理工学。

产品胰蛋白胨酵母提取物。

产品氨苄青霉素琼脂糖丙烯酸胺甲叉双丙烯酞胺。

公司产品⑿Ⅰ仪，超净工作台苏州净化设备厂实验酶及主要试剂公司产品限制性内切酶酶，Ⅱ验设备厂水浴振荡器，哈尔滨东联电子技术开发有限公司高速冷冻离心机，广州天美超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技离心机，低温恒温水槽，京六仪器厂垂直电泳槽，上海天能科技电泳仪，北京六仪器厂水平电泳槽，北京六仪器厂凝胶成像系统，恒振荡器，太仓市实，北京拓普分析仪器有限公司酶标仪型，型电热恒温水槽上海博讯实业有限公司层析仪，水平摇床，北子天平，恒温磁力搅拌器，金坛市富华仪器有限公司核酸蛋白检测仪，自动酶标洗板机型原核表达载体，用于抗体和核心抗原的联合检测，使感染的窗口期缩短至周，从而达到准确快速便捷的检测目的。

湖南理工学院本科毕业论文材料和方法材料与方法材料实验仪器电，但该方法在技术和设备上要求较高，费时，检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广。

湖南理工学院本科毕业论文前言针对上述检测中存在的些不足之处，我们通过大肠杆菌中表达并纯化核心蛋白，构建个抗体的出现有个平均为周周的窗口期，即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的存在。

所以抗不适合作为感染的早期诊断指标。

而的检测方法虽然具有早期敏感和特异等特点以预防和阻止其进步传播。

因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判断有重大意义。

当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。

但感染后到抗统计，在的有丙肝高危险因素的人群中，仅有检测过丙肝。

并且对丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。

丙肝，市场上既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加激活多种病毒及细胞基因启动子，具有广泛的反式激活作用还可与宿主细胞中参与凋亡转录调控转化膜重排及免疫逃逸等的调节分子发生相互作用。

目前，国内公众对丙肝流行现状缺乏全面准确的了解。

据的研究中发现，核心蛋白可以通过与内部核糖体进入位点的结合，特异性的抑制型和帽依赖型的翻译。

所以，的核心蛋白可被看作个多功能蛋白，能够影响多种细胞信号转导途径，激的研究中发现，核心蛋白可以通过与内部核糖体进入位点的结合，特异性的抑制型和帽依赖型的翻译。

所以，的核心蛋白可被看作个多功能蛋白，能够影响多种细胞信号转导途径，激活多种病毒及细胞基因启动子，具有广泛的反式激活作用还可与宿主细胞中参与凋亡转录调控转化膜重排及免疫逃逸等的调节分子发生相互作用。

目前，国内公众对丙肝流行现状缺乏全面准确的了解。

据统计，在的有丙肝高危险因素的人群中，仅有检测过丙肝。

并且对丙肝治疗尚未完全纳入医保，公众对丙肝认知水平也较低，调查过程中，约的公众不知道丙肝。

丙肝，市场上既没有非常明确的药物，也缺少有效的疫苗加以预防和阻止其进步传播。

因此，的早期诊断对于筛查的传染源指导临床治疗和预后判断有重大意义。

当前，医疗机构主要通过对血清中抗和的检测来筛查丙肝。

但感染后到抗抗体的出现有个平均为周周的窗口期，即使患者被高度感染，抗体检测技术也较难检测的存在。

所以抗不适合作为感染的早期诊断指标。

而的检测方法虽然具有早期敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，费时，检出率低，难以在常规工作或基层实验室推广。

湖南理工学院本科毕业论文前言针对上述检测中存在的些不足之处，我们通过大肠杆菌中表达并纯化核心蛋白，构建个原核表达载体，用于抗体和核心抗原的联合检测，使感染的窗口期缩短至周，从而达到准确快速便捷的检测目的。

湖南理工学院本科毕业论文材料和方法材料与方法材料实验仪器电子天平，恒温磁力搅拌器，金坛市富华仪器有限公司核酸蛋白检测仪，自动酶标洗板机型，北京拓普分析仪器有限公司酶标仪型，型电热恒温水槽上海博讯实业有限公司层析仪，水平摇床，北京六仪器厂垂直电泳槽，上海天能科技电泳仪，北京六仪器厂水平电泳槽，北京六仪器厂凝胶成像系统，恒振荡器，太仓市实验设备厂水浴振荡器，哈尔滨东联电子技术开发有限公司高速冷冻离心机，广州天美超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技离心机，低温恒温水槽，仪，超净工作台苏州净化设备厂实验酶及主要试剂公司产品限制性内切酶酶，Ⅱ。

公司产品⑿Ⅰ。

产品胰蛋白胨酵母提取物。

产品氨苄青霉素琼脂糖丙烯酸胺甲叉双丙烯酞胺。

兔抗人北京博奥森产品。

聚苯乙烯酶联板深圳金创华产品。

国产分析纯苯酚氯仿无水乙醇异丙醇甘油氯化钠琼脂湖南理工学院本科毕业论文材料和方法醋酸溴化乙锭硼酸磷酸氢二钠磷酸二氢钠醋酸钠。

试剂盒购自公司质粒提取试剂盒购自公司胶回收纯化试剂盒购自公司购自公司购自公司购自公司。

分子量标准核酸电泳分子量标准和蛋白质电泳分子量标准蛋白均购自公司。

引物由上海生物工程有限公司合成菌株和载体菌株大肠杆菌为湖南康润药业有限公司实验室保存。

原核表达载体为湖南康润药业有限公司实验室保存。

实验血浆实验所用的阳性血浆和阴性血浆，为湖南康润药业有限公司实验室提供。

方法主要溶液的配制缓冲液。

缓冲液Ⅰ，。

缓冲液Ⅱ尿素。

缓冲液，尿素。

电泳缓冲液，硼酸加水定容至，用前稀释倍即成应用液。

缓冲液用水配制。

称取无水，加定容至，湖南理工学院本科毕业论要病因之，主要由输血引起，与肝细胞癌及肝硬化关系密切，对人类危害巨大。

目前全球范围内感染的患者约有亿人，我国约万左右。

感染己成为严重的世界公共卫生问题之，但迄今尚无疫苗和特异有效的治疗药物。

是种单股正链病毒，其基因组长约，其核心蛋白位于病毒多肽的氨基末端，被宿主的信号肽酶切割后产生，由个氨基酸残基组成。

此蛋白被认为是病毒的核壳蛋白，与其它的结构与非结构蛋白相比，其氨基酸序列高度保守。

核心蛋白高度碱性，无糖基化位点，且具有细胞毒性，其结构特点使其难以在真核系统中表达。

为了表达核心区基因片段，本研究拟构建核心蛋白的原核表达载体并将表达蛋白进行纯化，用于丙型肝炎核心抗原和丙型肝炎抗体联合检测。

多项研究均表明核心蛋白能够导致肝细胞恶变和肿瘤的发生，除了参与病毒核衣壳的形成，核心蛋白还能调节基因转录，影响细胞分化，细胞信号转导途径，抑制宿主免疫反应等。

核心蛋白氨基酸序列上有多个和细胞的抗原表位，能诱导不同病毒株的交叉免疫应答，并具有调控多种细胞基因影响细胞生长增生及凋亡的能力，可能是引起宿主细胞癌变的重要因素。

因此，核心蛋白具有的多种功能促使人们从不同角度对其进行研究，以期探讨的致病机制，为预防和治疗感染提供新的策略。

本研究旨在在大肠杆菌中原核表达核心基因片段，通过逆转录扩增核心区基因片段，将其连接到经同样酶切的原核表达载体中，转化大肠埃希氏菌，以诱导，鉴定。

结果表明，将目的基因与表达载体进行连接，得原核表达载体，该载体转化大肠埃希氏菌后可诱导表达出分子量约为的重组蛋白。

以目前广泛使用的原核表达系统大肠埃希菌来构建核心基因的表达载体。

同真核表达系统相比，大肠埃希菌具有较多的优点，其表达目的蛋白快速高效经济。

其本身繁殖力强。

但由于原核细胞缺乏真核细胞所特有的翻译后加工修饰系统，如糖基化等，使不少具有生物活性的糖蛋白不能利用原核表达系统表达而且蛋白的高水平表达常形成包涵体，而包涵体的溶解纯化步骤繁琐，也正因为如此，以包涵体形式表达的重组蛋白的分离纯化以及融合蛋白的复性成为了原核表达系统应用过程中遇到的主要障碍之。

本研究还可以优化地方，如工程菌在大肠杆菌中诱导时间的优化，可以选择多个时间段诱导比较蛋白表达量，从而选择个最佳的诱导时间湖南理工学院本科毕业论文实验讨论诱导时的浓度优化，本实验中加入的对蛋白表达量的影响不明显，还可以在这个基础上增加或减少其浓度，比较结果，从而选取个最佳的浓度。

湖南理工学院本科毕业论文参考文献参考文献中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫病学分会丙型肝炎防治指南中华肝脏病杂志