液的蓝色条带跑至分离胶时改设电压为，约后电泳结束的电泳条件为开始时以恒流电泳，待上样缓冲液的蓝色条带跑至分离胶时改设电压为。转膜预冷后的转膜缓冲液提前倒出部分于托盘中，用于浸泡滤纸和海绵取膜于无水甲醇中浸泡，同时取出胶，比对切割所需目的胶片段将转膜夹板置于托盘中，白色板在下，黑色板在上，依次放置白色夹板万方数据三峡大学硕士学位论文海绵层滤纸膜目的蛋白胶层滤纸海绵，确保滤纸与膜膜与目的蛋白胶目的蛋白胶与层滤纸之间没有气泡之后将夹板固定好放入转膜槽中接通电源，在条件下恒流，进行转膜的转膜条件为转膜过程中放出大量热量，定要注意降温。封闭将膜取出，进行标记，牛奶封闭液。抗孵育按∶按∶的比例配制抗，振荡摇匀过夜。洗膜取出含目的蛋白的膜，并回收抗，用洗膜次，每次。二抗孵育按比例配制二抗并孵育含目的蛋白的膜，室温振荡摇匀。洗膜从二抗中取出含目的蛋白的膜万方数据三峡大学硕士学位论文,万方数据三峡大学硕士学位论文,万方数据三峡大学硕士学位论文目录英文缩略词表引言延伸条件扩增次。后电泳并进行仪器分析。肝组织中和蛋白表达检测组织蛋白提取将低温高速离心机进行预冷，取的肝组织放入管中，加入预冷的，在冰浴条件下剪成尽量小的均碎片离心，弃去上清后，重新加入预冷的，再剪碎，充分混匀离心，同时配置裂解液弃去上清后，向沉淀中加入的裂解液，充分混匀后转移到玻璃匀浆器中，在冰浴条件下匀浆直至无肉眼可见组织块，呈现均的混合液，冰上裂解，每隔漩涡震荡混匀次离心。取上清即为总蛋白。法蛋白质定量工作溶液的配制将与按体积比∶充分混合在起标准蛋白溶液和待测样本稀释液配制取孔板，取孔板中倍于样品个数的孔加入的双蒸水和的样本总蛋白并充分混匀，另取两排个孔，依次将标准蛋白稀释为，使最终每孔体积为。微板测定向每孔中加入的工作溶液，轻轻震荡，充分混合，反应后，在处测定其吸光度值。蛋白灭活根据浓度计算出上样蛋白所需体积分装于管中，约，然后加入上样缓冲液，加热，放置。操作过程制胶将制胶板用洗涤剂清洗，自来水冲洗，蒸馏水清洗，吹风机吹干并固定，按分离胶，充分吹打混匀后沿两端倒入制胶板中，无水乙醇封闭，室温静置，凝固后倒出无水乙醇，用滤纸吸取剩余乙醇，将配好的浓缩胶倒入制胶板中，然后插入梳子，室温静置备用。电泳组装好电泳仪，将胶板插入电泳槽中，向两块胶板的中间区域倒入电泳缓冲液，至漫过周边下方的金属丝，然后拔出梳子，加入各蛋白样品及蛋白。然后开始电泳，开始时电压设为，约后待上样缓冲液的蓝色条带跑至分离胶时改设电压为，约后电泳结束的电泳条件为开始时以恒流电泳，待上样缓冲液的蓝色条带跑至分离胶时改设电压为。转膜预冷后的转膜缓冲液提前倒出部分于托盘中，用于浸泡滤纸和海绵取膜于无水甲醇中浸泡，同时取出胶，比对切割所需目的胶片段将转膜夹板置于托盘中，白色板在下，黑色板在上，依次放置白色夹板万方数据三峡大学硕士学位论文海绵层滤纸膜目的蛋白胶层滤纸海绵，确保滤纸与膜膜与目的蛋白胶目的蛋白胶与层滤纸之间没有气泡之后将夹板固定好放入转膜槽中接通电源，在条件下恒流，进行转膜的转膜条件为转膜过程中放出大量热量，定要注意降温。封闭将膜取出，进行标记，牛奶封闭液。抗孵育按∶按∶的比例配制抗，振荡摇匀过夜。洗膜取出含目的蛋白的膜，并回收抗，用洗膜次，每次。二抗孵育按比例配制二抗并孵育含目的蛋白的膜，室温振荡摇匀。洗膜从二抗中取出含目的蛋白的膜，以洗膜次，每次。化学发光显影将液与液按∶的体积比充分混匀备用。将含目的蛋白的膜用滤纸吸去表面的溶液后用移液器吸取适量的显影液滴加在含目的蛋白的膜上，并使显影液充分覆盖在膜上，将加了显影液的膜置于化学发光成像系统中进行成像。统计学处理数据资料用均数标准差表示，采用软件进行统计学处理，各组均数之间比较进行单因素方差分析检验，以检验比较两组间均数的差异为有统计学意义。结果第部分竹节参总皂苷对脂肪性肝纤维化小鼠的保护作用研究干预脂肪性肝纤维化小鼠的外观体重增长率和肝脏指数肝脏外观肉眼观察发现正常对照组小鼠肝脏颜色正常，表面光滑脂肪性肝纤维化模型组小鼠肝脏质脆，表面被突起于肝表面的颗粒所覆盖，肝纤维化症状明显低高剂量组明显较模型组组小鼠肝脏有所改善，表面光滑图。万方数据三峡大学硕士学位论文正常对照组模型组组组图实验动物肝脏的大体观察肝指数的变化与正常组相比，脂肪性肝纤维化模型组小鼠肝脏重量指数明显上升，与模型组小鼠相比，低高剂量组肝脏重量指数有所下降与正常组相比，脂肪性肝纤维化模型组小鼠体重体重平均增长率显著上升，与模型组小鼠相比，低高剂量组小鼠体重平均增长率明显下降，高剂量组小鼠体重明显降低表，图。表对脂肪性肝纤维化小鼠体重平均增长率和肝指数的影响，组别体重平均增长率肝脏重量指数正常对照组模型对照组组组注正常组图实验动物体重增长曲线万方数据三峡大学硕士学位论文干预脂肪性肝纤维化小鼠的组织病理学的变化染色的变化脂肪性肝纤维化模型对照组小鼠肝细胞结构紊乱，肝小叶结构模糊甚至消失，肝细胞索严重紊乱甚至消失，肝细胞普遍出现明显的脂肪变性坏死，汇管区纤维组织增生和炎性细胞浸润低高剂量组明显较模型组小鼠肝脏明显减轻脂肪变性坏死，汇管区纤维组织增生和炎性细胞浸润图。正常对照组模型组组组图实验动物肝脏的染色观察胶原纤维生成的影响正常对照组只在汇管区，血管周围有胶原纤维染色与正常对照组相比，脂肪性肝纤维化模型对照组小鼠肝脏汇管区门静脉等多处出现胶原纤维的产生，围绕中央静脉增生的胶原纤维沿肝静脉窦分布并彼此相连，形成连接汇管区与中央静脉的隔膜与模型组相比，低高剂量组明显抑制胶原纤维的产生，万方数据三峡大学硕士学位论文胶原纤维的增生只出现在汇管区图，表。正常对照组模型组组组图实验动物肝脏的染色观察表对肝纤维化小鼠肝纤维化评分的影响，组别及方法肝纤维化面积正常组模型组∆∆∆∆注正常组,模型组，∆,∆∆超微结构变化正常对照组小鼠细胞结构线粒体内质网形状规则，结构正常，肝脏线粒体内质网分布密集，线粒体内嵴排列紧密规则。与正常对照组相比，脂肪性肝纤维化模型组小鼠肝组织存在大量的脂肪泡，有的甚至在细胞核内可见脂肪泡，伴有大面积的线粒体损伤，线粒体内嵴断裂，个别线粒体内存在脂滴，内质网数量明显减少与脂肪性肝纤维化模型组相比，低高剂量组小鼠肝组织的脂滴明显减少，内质网数量明显增多，线粒体损伤明显减轻，线粒体内嵴较为发达且排列相对整齐图。正常对照组模型组组组万方数据三峡大学硕士学位论文图实验动物肝脏的电镜观察对脂肪性肝纤维化小鼠含量的影响与正常组相比，脂肪性肝纤维化模型对照组小鼠肝脏中的含量显著的升高，与模型组相比，低高剂量组能够明显降低含量∆图。正常对照组模型组组组图肝组织中含量变化图对脂肪性肝纤维化小鼠肝功能和血脂水平的影响与正常组相比，脂肪性肝纤维化模型对照组小鼠血清中活性和含量明显升高，而含量显著降低，反映模型成功建立与模型组相比，低高剂量组能够明显降低血清中活性和含量，提示具有良好的护肝降脂活性表表。表对肝纤维化小鼠肝功能和血脂水平的影响，注正常组,模型组，∆,∆∆指标正常组模型组∆∆∆∆∆∆∆∆∆∆∆∆万方数据分类号密级公开硕士学位论文竹节参总皂苷对脂肪性肝纤维化小鼠的预防保护作用及机制研究学位申请人霍元秀学科专业药理学指导教师张长城教授二四年五月万方数据,万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。