质谱分析软件和数据处理软件美国公司型电子天平上海精天电子仪器厂，型高速离心机，长沙维尔康湘鹰离心机有限公司金花牌移液枪，北京青云卓立精密设备有限公司Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。移液管胶头滴管烧杯离心管塑料试管进样瓶滤膜容量瓶等。试验试剂乙腈甲醇色谱纯，公司甲酸色谱纯，美国公司水为超纯水，其它试剂均为分析纯。四试验方法血清样品采集处理取血清样品，室温解冻，摇匀精密移取血清，加入甲醇，涡旋，冰箱冷藏，置离心机以离心，倾出上清液，微孔滤膜滤过，作为样品溶液。血样分离与图谱数据采集通过对不同粒径不同柱长及不同内径色谱柱优化比较，最后采用不易衍生化不易挥发和分子量较大化合物。缺点是分离效率不高，分析时间相对较长没有化合物数据库可供检索和比对，样品鉴别还需进步分析。主要用于代谢物逐定性定量，对代谢产物进行相对分子质量测定及分子式推算。目前常采用分析方法包括主成分分析,层次聚类分析,等非监督分类方法，以及偏最小二乘法判别分析,最近邻法,等监督分类方法，最常用也是最有效分析方法是，特点是将分散在组变量上信息集中在几个综合指标即主成分上，最终获得生物标记物，并结合目前相对成熟代谢组学相关数据库，完成对其功能分析和确认。本研究采用结合代谢组学方法，分离分析高血压病肝阳上亢证患者血清代谢组数据，寻找高血压病肝阳上亢证血清标志性代谢产物，从而丰富高血压病肝阳上亢证证候本质研究同时，研究经平肝方药干预后各组自发性高血压大鼠血清代谢物质异同，探求平肝方药在机体代谢环节层面作用机制，以明确平肝方药干预自发性高血压大鼠血清代谢机制，为平肝方药干预高血压病提供理论基础。证候代谢特征研究研究标准西医诊断标准参照年我国卫生部和高血压联盟制定中国高血压防治指南规定未服用抗高血压药物情况下，至少有次非同日标准肱动脉血压测定收缩压和或舒张压，并除外继发性高血压，即可确诊。高血压分级标准参照年世界卫生组织国际高血压联盟颁布高血压治疗指南。见表。表血压水平定义和分类类别收缩压舒张压正常血压正常高值高血压级高血压轻度级高血压中度级高血压重度单纯收缩期高血压注患者收缩压与舒张压属不同级别时，应按两者中较高级别分类患者既往有高血压史，目前正服抗高血压药，血压虽已低于，亦应诊断为高血压。二中医证候辨证标准高血压病肝阳上亢证辨证标准参照中药新药治疗高血压病临床研究指导原则中高血压病肝阳上亢证诊断标准，以经本课题研究确立高血压病肝阳上亢证量化标准为诊断标准。主症眩晕头痛头昏头胀腰酸膝软急躁易怒。次症心悸失眠多梦耳鸣健忘面赤口苦口干大便干结。舌象脉象舌红苔黄，脉弦细而数。辨证标准符合高血压病西医诊断标准，并具备以上主症项及以上，次症项，同时参考舌脉即可确诊为高血压病肝阳上亢证。高血压病阴阳两虚证辨证标准参照中药新药治疗高血压病临床研究指导原则中高血压病阴阳两虚证诊断标准。主症眩晕头痛腰酸膝软畏寒肢冷。次症耳鸣心悸气短乏力夜尿频小便清长。舌象脉象舌淡苔白脉沉细弱。辨证标准符合高血压病西医诊断标准，并具备以上主症项及以上，次症项，同时参考舌脉即可确诊为高血压病阴阳两虚证。三试验病例标准纳入病例标准符合原发性高血压诊断标准及高血压病肝阳上亢之辨证标准。原发性高血压，过去未用降压药或经洗脱后周内不同日三次测压，血压达到诊断标准。Ⅰ级和Ⅱ级高血压患者中，血压必须符合收缩压舒张压。未用药或已服用降血压药物但经周洗脱期后血压达到上述标准。Ⅰ级高血压病程必须大于三个月。年龄在岁之间。知情同意并签署知情同意书。排除病例标准不符合原发性高血压诊断标准。不符合高血压病肝阳上亢之辨证标准。Ⅲ级高血压或单纯收缩期高血压者。继发性高血压。年龄在岁以下或岁以上。妊娠，或准备妊娠，或哺乳期妇女，或合并有精神病者。半年内有心肌梗死或明显脑卒中史。过敏体质或多种药物过敏者。近三个月内接受过其它新药临床试验者。洗脱期结束后未达到高血压诊断标准者。Ⅰ级高血压病程不足三个月者。合并以下脏器损害临床表现，如心绞痛心肌梗死心力衰竭短暂脑缺血发作脑卒中高血压脑病视网膜出血渗出物伴或不伴视乳头水肿血肌酐大于肾功能衰竭动脉夹层动脉闭塞性疾病。二研究方法病例来源及分组全部观察病例为山东中医药大学附属医院年月年月门诊及住院病人。根据高血压治疗指南高血压病诊断标准和中医肝阳上亢证和阴阳两虚证辨证标准，选择知情同意并签署知情同意书志愿受试经过周“洗脱期”后舒张压在高血压病肝阳上亢证患者例肝阳上亢证组和高血压病阴阳两虚证患者例阴阳两虚证组，同时选择健康志愿者例作为健康志愿组。二般资料三组性别年龄治疗前血压水平比较情况附表如下性别见表表各组患者性别构成比较例，组别例数男性女性健康志愿组肝阳上亢组阴阳两虚组注三组性别分布经检验，无统计学差异。年龄见表表各组患者年龄构成比较组别例数年龄岁健康志愿组肝阳上亢组阴阳两虚组注三组平均年龄经方差分析处理，无统计学差异。血压水平见表表各组治疗前血压水平比较，组别例数收缩压舒张压健康志愿组肝阳上亢组阴阳两虚组注与健康志愿组相比较，无统计学差异。限定三组受试者年龄岁，性别不限，三组在年龄性别血压构成方面无明显差异，具有可比性。三试验仪器和试剂试验仪器系列高效液相色谱仪，包括在线脱气机，二元泵，高性能自动进样器，二极管阵列检测器美国公司安捷伦高分辨四级杆飞行时间质谱仪，配有标准电喷雾离子源，工作站及质谱分析软件和数据处理软件美国公司型电子天平上海精天电子仪器厂，型高速离心机，长沙维尔康湘鹰离心机有限公司金花牌移液枪，北京青云卓立精密设备有限公司Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。移液管胶头滴管烧杯离心管塑料试管进样瓶滤膜容量瓶等。试验试剂乙腈甲醇色谱纯，公司甲酸色谱纯，美国公司水为超纯水，其它试剂均为分析纯。四试验方法血清样品采集处理取血清样品，室温解冻，摇匀精密移取血清，加入甲醇，涡旋，冰箱冷藏，置离心机以离心，倾出上清液，微孔滤膜滤过，作为样品溶液。血样分离与图谱数据采集通过对不同粒径不同柱长及不同内径色谱柱优化比较，最后采用授工作组在国际顶级期刊上发表了篇关于运用代谢组学研究技术建立冠心病无创诊断方法文章,从而开辟了代谢组学在临床疾病诊断中先河。王广基等以和代谢组学研究为技术平台，通过对高血压病人包括肝火亢盛痰湿雍盛及阴虚阳亢三型血清代谢组学研究，发现健康人与高血压病人血清代谢谱有明显差异。陈冬梅等用血清核磁共振图谱代谢组学分析方法探讨虚寒证本质，通过对虚寒证血清代谢产物变化分析，得出虚寒证机体可能存在糖脂肪蛋白质代谢异常结论，初步认为乳酸柠檬酸琥珀酸不饱和脂类乙酰乙酸谷氨酸等可以作为虚寒证生物标志物。杨松滨，李昕等用代谢组学方法比较分析膝骨关节炎肝肾不足筋脉瘀滞证和脾肾两虚湿注骨节证两个证型尿液代谢谱变化。发现组与正常对照组尿液中代谢物总离子流图存在明显差异，两证型组尿样中多种内源性代谢物含量和尿液代谢谱差异明显。对肝肾不足脾肾两虚证西医诊断指标客观化起了定积极作用。上述实验有力证明了正常组与模型组之间确实存在代谢产物谱差异模型组随着造模时间长短不同及治疗措施干预，其代谢产物发生变化中医证候之间可能存在着非常明显代谢产物不同。中医证候生物学基础也可能从代谢组学研究中找出特异标志性代谢产物。代谢组学可以成为中医证候研究个有力工具，可以为中医病证研究提供新技术平台。随着系统生物学研究兴起，中医药研究者逐渐认识到，只有从信息系统视角研究同样是系统复杂中医药理论体系，才能逐步揭示其本质和科学内涵。而作为其重要组成部分代谢组学用于理解疾病过程，与中医整体观和辨“证”论治思维方式极其相似。将代谢组学技术嫁接到中医学理论研究中，用现代语言阐释中医独特思维方式和治疗方法，有可能把中医理论研究推向科学发展前沿，有力地推动中医理论现代化进程。参考文献，王广基，阿基业，严蓓，等代谢组学研究冠心病中医分型体内物质基础，世界科学技术中医药现代化，年第卷第期，。曾瑞峰,李俊代谢组学方法及其在中医药研究现状与展望中国中医药现代远程教育潘明，陈琼中医体质病证研究与代谢组学上海中医药杂志,胡晓抒,郭志荣,喻荣彬高血压与多代谢异常对照研究中国公共卫生,王广基，查伟斌，郝海平，等代谢组学技术在中医药关键科学问题研究中应用前景分析中国天然药物陈冬梅，杜慧兰虚寒证证候规律及其代谢组学研究河北医科大学博士学位论文杨松滨，李昕，等膝骨关节炎患者尿液代谢谱与中医证候相关性研究上海中医药大学学报罗和吉，陈家旭代谢组学技术与中医证候研究中医药信息杂志致谢本研究是在导师李运伦教授悉心指导下完成。导师在工作和学习上给了我很大帮助。导师严谨治学态度刻苦敬业奉献精神，是我学习典范，这将使我终生受益。在此由衷感谢老师对我关怀与教诲。感谢山东中医药大学实验中心蒋海强老师大力帮助，使我顺利完成本研究数据分析及论文撰写工作。感谢师兄刘磊林家茂，同门袁征刘白洁孟凡波徐文娟李珩所给予大力帮助在此致以诚挚谢意。感谢我父母多年来所给予理解关心和支持。感谢所有支持过关心过帮助过我人。感谢所有参加论文评审和答辨指导专家教授！查新报告科研课题不易衍生化不易挥发和分子量较大化合物。缺点是分离效率不高，分析时间相对较长没有化合物数据库可供检索和比对，样品鉴别还需进步分析。主要用于代谢物逐定性定量，对代谢产物进行相对分子质量测定及分子式推算。目前常采用分析方法包括主成分分析,层次聚类分析,等非监督分类方法，以及偏最小二乘法判别分析,最近邻法,等监督分类方法，最常用也是最有效分析方法是，特点是将分散在组变量上信息集中在几个综合指标即主成分上，最终获得生物标记物，并结合目前相对成熟代谢组学相关数据库，完成对其功能分析和确认。本研究采用,目录引言证候代谢特征研究研究标准西医诊断标准二中医证候辨证标准三试验病例标准二研究方法病例来源及分组二般资料三试验仪器和试剂四试验方法五研究结果六结论平肝方药干预后代谢模式实验对象二实验材料平肝方药制备二仪器与试剂三实验方法分组方法二给药方法三血压测量四样品制备五血样分离与图谱数据采集六数据采集与多维数据分析七潜在生物标志物与代谢途径寻找四研究结果各组血压比较二血清样品色谱分离与质谱分析三血清代谢产物模式识别五结论讨论高血压病肝阳上亢证病机及证候特征分析二高血压病肝阳上亢证治疗方法探讨三平肝方药组方配伍特点四高血压病肝阳上亢证代谢特征研究血清数据分析二潜在生物标记物及相关代谢途径解读五平肝方药干预代谢机制探讨降压效应评价二血清数据分析三潜在生物标记物及相关代谢途径解读结语参考文献综述致谢查新报告科研课题引言高血压病是种多基因异质多因子复杂疾病，以体循环动脉压升高周围小动脉阻力增高同时伴有不同程度代谢障碍为主要表现，影响心脑肾等重要脏器结构与功能，是致残与死亡重要诱因，严重危害人类健康。近年来认为原发性高血压病是机体在遗传易感性和环境因素双重影响下，正常血压调节机制出现失代偿，进而出现血压升高，其具体病理生