以及，研究发现信号通路对肿瘤细胞发生凋亡转移具有非常重要作用。研究发现在正常组织中检测不到激活，而在多种恶性肿瘤中发生活化，抑制信号通路后，癌细胞侵袭转移能力明显下降。信号转导通路激活可以抑制肿瘤细胞侵袭和抗肿瘤血管生成。信号通路活化与肿瘤发生进展密切相关。信号通路影响肿瘤转移多个环节，其中影响细胞外基质降解是其主要机制之。基质金属蛋白酶，属于内肽酶，是类锌离子依赖细胞外蛋白水解酶，可降解几乎所有细胞外基质。其中重要分子有和等,。大量研究表明，恶性肿瘤中高表达能引起邻近肿瘤组织重建和肿瘤内部血管生成，最重要还是能够通过降解细胞外基质和基膜，促进恶性肿瘤细胞侵袭和转移。表达与肿瘤细胞侵三峡大学硕士学位论文目录英文缩略词表引言材料与方法结果第部分中药复方对肝癌细胞增殖抑制作用第二部分中药复方体外抑制人肝癌细胞侵袭转移实验第三部分中药复方对肝癌转移相关信号通路影响第四部分中药复方对肝癌细胞上清液中影响讨论小结参考文献综述后记三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称过硫酸铵顺铂二甲基亚砜化学荧光底物乙二胺四乙酸细胞外信号调节激酶肝细胞癌丝裂原活化蛋白激酶四甲基偶氮唑蓝光密度磷酸盐缓冲液苯甲基磺酰氟裂解液十二烷基乙酸钠四甲基乙二胺氨基甲烷蛋白免疫印迹三峡大学硕士学位论文引言肝细胞癌，是世界上最常见第五大恶性肿瘤，好发于东南亚国家，而我国是肝癌高发国家之，据统计，每年约有万人死于肝癌，占世界肝癌死亡人数。大部分病人确诊时已属于晚期，预后很差。目前对肝癌所采用外科手术化疗放疗生物治疗等多种措施，对大多数肝癌细胞有定杀伤作用，但远期疗效不尽人意，主要原因是治疗后仍有复发和转移，肝癌根治性切除后其年复发率高达。因此，进步开展肝癌基础和临床研究及寻找新经济安全有效抗肝癌转移治疗措施和方法，是项十分重要工作。而在众多肿瘤治疗方法中，药物治疗是最基础和最便捷。复方来源于临床上应用行之有效中药成分，在中医理论指导下，经科学配伍组成。根据肿瘤中医三大病机“虚”“毒”“瘀”特点，选取扶正解毒化瘀三种功效中药从中提取主要有效成分各种，应用小鼠荷瘤模型为基础，采用抑瘤率和生存期进行药效学比较，筛选出四种药物。实验结果华蟾素三七总皂苷二者抑瘤率和生命延长率较高，人参皂苷抑瘤率较高，但是香菇多糖生命延长率最高，综合考虑，选取这四味药作为复方组成药物。为清热解毒，活血化瘀，扶正固本第个字第个拼音组成。采用均匀设计方法对所选中药有效成分剂量配比进行优化研究并并行验证，确定复方最佳配比为华蟾素，人参皂甙，三七总皂甙，香菇多糖。华蟾素属清热解毒类三七总皂甙属活血化瘀类人参皂甙香菇多糖属扶正固本类。前期验证实验表明复方具有良好抗肝癌作用，能够显著抑制实体瘤生长，并能延长腹水瘤小鼠生存期，抑瘤率为，生命延长率达，且优于组方中各单味药。在此基础上，我们作了联合化疗抗肝癌药效研究。实验显示与化疗药物顺铂合用，可以对抗所致白细胞降低胸腺和脾萎缩等毒性反应，抑瘤率达到，生命延长率达到，在基础上增加了而且还具有显著抑制肝癌细胞增殖以及诱导肝癌细胞凋亡作用，使期细胞比例增高，期比例下降,。其联合小剂量顺铂具有抗肝癌血管生成作用。在临床上能显著延长中晚期原发性肝癌患者中位生存期。由于肝癌转移复发率很高，因此本课题从细胞水平，研究中药复方抑制人肝癌三峡大学硕士学位论文细胞增殖作用，以及侵袭转移能力，并探讨可能机制。肝癌转移复发是个复杂生物学过程，由多个相对独立步骤组成，涉及细胞粘附运动增殖细胞外基质降解机体免疫与肿瘤血管生成等多个连续环节，而每个环节又受到多种因素影响和调控，与肝癌转移相关信号通路及分子也非常复杂。丝裂原活化蛋白激酶,属于丝氨酸苏氨酸激酶，比较保守，其特点是它丝氨酸苏氨酸和酪氨酸必须同时被磷酸化磷酸化，才能获得全部酶活性。研究发现信号通路存在于大多数细胞中，活化后将细胞外信号刺激转导至细胞内及核内，引起细胞生物学反应。有多个亚家族，其中较为确定，在细胞功能中发挥重要作用由细胞外信号调节激酶,端激酶以及，研究发现信号通路对肿瘤细胞发生凋亡转移具有非常重要作用。研究发现在正常组织中检测不到激活，而在多种恶性肿瘤中发生活化，抑制信号通路后，癌细胞侵袭转移能力明显下降。信号转导通路激活可以抑制肿瘤细胞侵袭和抗肿瘤血管生成。信号通路活化与肿瘤发生进展密切相关。信号通路影响肿瘤转移多个环节，其中影响细胞外基质降解是其主要机制之。基质金属蛋白酶，属于内肽酶，是类锌离子依赖细胞外蛋白水解酶，可降解几乎所有细胞外基质。其中重要分子有和等,。大量研究表明，恶性肿瘤中高表达能引起邻近肿瘤组织重建和肿瘤内部血管生成，最重要还是能够通过降解细胞外基质和基膜，促进恶性肿瘤细胞侵袭和转移。表达与肿瘤细胞侵Ⅰ,周菁基因在肺腺癌干细胞样细胞自我更新增殖中作用在体研究第三军医大学硕士学位论文三峡大学硕士学位论文,杨景朴喉癌细胞中肿瘤干细胞化疗抵抗及靶向封闭化疗增敏研究吉林大学博士学位论文,于茜颖调控食管癌干细胞自我更新及食管癌相关基因转录调控研究北京协和医学院博士学位论文,三峡大学硕士学位论文后记在三年研究生学习生活中，我得到了许多人关心支持和爱护。值此学位论文完成之际，我衷心感谢导师陈涛教授三年来对我学业上精心指导和生活上无微不至关怀，使我能够顺利完成毕业论文，并在科研能力和论文写作上取得了很大进步。恩师积极活跃科研思维严谨求实治学精神以及随和诚恳处事态度将使学生终生受益。衷心感谢三峡大学医学院机能学部各位老师在课题思路实验技术方法中给予精心指导和无私帮助，是他们无私帮助，才能使我毕业论文顺利完成。衷心感谢三峡大学国家中医药管理局中药药理肿瘤三级实验室胡卫老师在细胞培养以及分子生物学实验技术方面耐心指导和无私帮助感谢梅志刚老师及钱京萍老师为实验顺利进行提供种种便利。衷心感谢中医系各位老师给予我生活和学业上帮助，感谢医学院科研科各位老师在学业上给予我支持和帮助。衷心感谢师姐胡月琴师兄巩仔鹏在三年研究生生活中给予支持和鼓励。衷心感谢彭芳孙蒙詹玲刘晓洁王成双游艳夏燕等同学及师妹艾婷王晶及师弟万信念焦良波在整个实验过程中相互帮助和扶持。特别感谢我家人多年来给予我物质上以及精神上支持关心理解和鼓励。最后，向所有指导关心帮助过我人表示最衷心感谢！三峡大学硕士学位论文附录攻读硕士学位期间发表部分学术论著王泉，胡卫，陈涛等在肿瘤干细胞中研究进展广东医学王泉，陈涛，胡卫等肝癌干细胞分离鉴定研究进展广东医学已收稿胡卫,王泉,方肇勤研究肝癌侵袭转移相关基因进展亚太传统三峡大学硕士学位论文指导教师学科系主任院分管领导分类号密级公开硕士学位论文中药复方抑制人肝癌细胞转移实验研究学位申请人王泉学科专业药理学指导教师陈涛教授二三年五月,三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得成果，除文中已经注明引用内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过作品成果。对本文研究做出重要贡献个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学知识产权，凡是以我本人学位论文内全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门同意。我愿承担因违背上述承诺而引起切法津和经济后果。学位论文作者签名日期三峡大学硕士学位论文内容摘要目研究中药复方对人肝癌细胞侵袭转移抑制作用及可能机制，为寻找有效抗肝癌转移药物和治疗靶点提供实验依据。方法以不同浓度干预细胞，法观察对细胞增殖抑制作用采用细胞划痕实验定性观察对细胞迁移影响在此基础上，利用实验，小室包被基质胶，体外模拟基底膜，进行迁移和侵袭实验，定量观察对细胞迁移和侵袭能力影响。检测对信号通路影响，分别使用抑制剂后观察对细胞侵袭转移影响。方法检测家族和水平变化。结果实验结果不同浓度作用于人肝癌细胞后，细胞出现增殖抑制，并且这种抑制作用具有剂量依赖性。随着浓度不断增加，其对细胞增殖抑制作用更明显不同浓度之间均有差异，且随着浓度增加，抑制率不断增加。不同时间组之间也有差异，各浓度组抑制率均大于，组抑制率最大。药物作用在浓度内，其对细胞生长增殖影响较小，其抑制率为，因此选择这三个浓度进行细胞侵袭转移实验研究。抑制人肝癌细胞运动实验研究划痕实验结果显示干预组划痕损伤区发生迁移细胞数目明显少于正常对照组，提示有抑制细胞迁移趋势迁移和侵袭性实验结果显示与正常对照组比较，各干预组穿过膜细胞数目明显减少，差异具有统计学意义或。对信号通路影响结果显示，干预肝癌细胞后，表达明显下降，和表达量增加，差异具有统计学意义或，但及总蛋白量基本不变。而分别使用和抑制剂后，侵袭实验结果发现，抑制剂和发挥协同作用，而和抑制剂部分逆转了抑制肝癌细胞转移作用，差异具有统计学意义。对分泌影响结果显示能减少分泌，差异有统计学意义，而对和分泌未见明显影响。结论中药复方可抑制人肝癌细胞增殖及迁移侵袭能力。其抑制侵袭转移作用可能通过以下机制影响信号转导通路，其中包括活化，抑制而发挥作用。抑制表达，其中与有更密切关系。关键词肝细胞癌中药复方侵袭三峡大学硕士学位论文,