1、师妹和同学的帮助，在这里感谢白旭师姐庞琨师兄郑国湾师兄侯云师姐杨科师兄詹晓奂师姐金荣愉师兄时鹏涛师兄陆潮峰陆雯刘卫平应荣刘俊平周宁宁张旖旎王玉生唐丹唐耀华翁晨晨陈相波薛承美等同学在实验上的帮助。衷心祝他们事业有成，前程似锦！特别感谢我的家人对我学业的支持和鼓励生活上的默默付出和照顾给予我人生方向的重要指导，他们是我人生中的重要的支撑点。最后，谨向百忙之中抽出宝贵时间参加论文评阅评议和答辩的各位专家教授致以深深的敬意。马艳年月万方数据褐飞虱发育相关基因和的克隆及功能研究摘要褐飞虱是亚洲水稻种植区的重要害虫之，主要通过刺吸水稻组织汁液产卵损伤叶鞘组织传播病虫害等方式危害水稻。褐飞虱生长发育快，繁殖能力强，对农药和抗性水稻品种的适应迅速，其防治直是水稻生产的难题。鉴定持久有效的害虫防治新靶标，对褐飞虱的防治具有重要意义。
2、虱表皮蛋白基因基因克隆荧光定量分类号万方数据,.,.,.,,万方数据,.,,.,.,,万方数据.,万方数据目次摘要目次.图清单表清单绪论前言基于表达谱和转录组研究基因的进展表达谱转录组的发展及应用.测序技术在褐飞虱研究的应用.展望.表皮蛋白和的研究进展昆虫表皮蛋白的概述基因的概述技术在昆虫中的研究进展.在昆虫应用中的导入方法.在害虫防治中的应用展望.本课题的研究内容及意义课题来源及论文的内容安排.褐飞虱表皮蛋白基因的克隆及功能分析材料.实验材料.主要试剂.主要仪器.引物.褐飞虱表皮蛋白基因的克隆褐飞虱总的提取万方数据褐飞虱核心片段的克隆.褐飞虱克隆.褐飞虱全长序列的确定及分析褐飞虱基因不同发育时期转录水平.褐飞虱材料的采集褐飞虱的提取及的合成.荧光定量特异性引物的设计褐飞虱表皮蛋白基因的表达分析.技术研究褐飞虱基。
3、直是水稻生产的重要难题。褐飞虱为不完全变态昆虫，其生长发育分为卵期若虫期成虫期，其中若虫根据形态发育分为龄龄龄龄龄成虫根据翅型的分化分为长翅雌虫短翅雌虫长翅雄虫和短翅雄虫。龄体长约为.，腹部背面有倒凸形浅色斑纹，无翅芽图.。龄体长约为.，倒凸形斑内现褐色并逐渐模糊，翅芽不明显图.。龄体长约为.，翅芽已形成，中后胸后缘向前凹成角状图.。龄体长约为.，斑纹清晰，前翅芽尖端伸至后胸后缘图.。龄体长约为.，前后翅芽尖端相接近，个体较大，腹部隐约可以分辨雌雄图.。长翅雌虫体长，长翅，腹部有产卵针，个头较雄虫大图.。短翅雌虫体长，短翅，腹部有产卵针，个头较雄虫大图.。短翅雄虫体长约为.，短翅图.。图.褐飞虱的在不同发育时期的形态万方数据中国计量学院硕士学位论文雌虫发育分为产卵前期产卵高峰期和产卵后期，根据成虫羽化后日龄与卵巢。
4、总结与展望研究总结.褐飞虱表皮蛋白基因的克隆及功能研究.褐飞虱基因的克隆及功能研究课题展望.参考文献.作者简历.万方数据图清单图.褐飞虱的在不同发育时期的形态图.褐飞虱卵巢发育形态.图.保守序列图.激酶活化过程图.人工饲料配方图.褐飞虱饲喂装置图.褐飞虱及核心序列的扩增电泳图.图.褐飞虱表皮蛋白基因全长序列及氨基酸序列分析.图.褐飞虱及其他昆虫的表皮蛋白的系统进化树图.褐飞虱和扩增标准曲线.图.褐飞虱和的熔解曲线.图.褐飞虱不发育时期表皮蛋白基因的表达量变化图.表皮蛋白基因干扰片段的电泳图图.褐飞虱取食对存活率的影响.图.褐飞虱取食后表达量变化图.褐飞虱若虫取食后表型变化.图.褐飞虱产物及核心序列的扩增电泳图图.褐飞虱全长序列及氨基酸序列分析图.褐飞虱及其他昆虫的的系统进化树.图.褐飞虱和的扩增标准曲线图.褐飞虱。
5、究成果，也不包含为获得中国计量学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名签字日期年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国计量学院有关保留使用学位论文的规定。特授权中国计量学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印缩印或扫描等复制手段保存汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。保密的学位论文在解密后适用本授权说明学位论文作者签名导师签名签字日期年月日签字日期年月日万方数据致谢三年研究生生涯如白驹过隙，转瞬即逝。三年的教育让我不断的充实和完善自己，在独立思考把握重点沟通交流等个方便都有很大的提高。三年的生活有过挫折的心酸和成功的喜悦，也正是这些不懈的。
6、的功能褐飞虱材料的采集及人工饲料的配置褐飞虱的合成饲喂法进行结果.褐飞虱表皮蛋白基因的克隆与分析不同发育时期基因的表达水平.褐飞虱的合成及干扰.讨论.褐飞虱表皮蛋白基因的克隆褐飞虱表皮蛋白基因的转录水平褐飞虱表皮蛋白基因的.褐飞虱基因的克隆及功能分析材料.实验材料.主要试剂.主要仪器.引物.褐飞虱的克隆褐飞虱不同发育时期基因转录水平研究.技术研究褐飞虱基因的功能.褐飞虱的采集及人工饲料配方.万方数据褐飞虱的合成.饲喂法进行.后卵巢发育变化及后代个体统计.褐飞虱基因上游通路相关基因的研究褐飞虱基因的表达规律研究.褐飞虱基因的表达规律研究.褐飞虱基因的表达规律研究.结果.褐飞虱的克隆与分析不同发育时期的表达水平褐飞虱的合成及干扰.褐飞虱所在通路相关基因表达规律的研究讨论.褐飞虱基因的克隆.褐飞虱基因的表达及功能研究.。
7、本文根据转录组和表达谱信息筛选出个褐飞虱发育相关基因，分别注释为表皮蛋白基因和细胞分裂周期基因，通过对褐飞虱和基因进行克隆，分析目标基因在发育过程中的表达规律，进而应用对基因的功能进行研究，探讨了目标基因在褐飞虱生长与生殖发育中的作用，目的是发现褐飞虱防治新靶标。研究结果总结如下褐飞虱表皮蛋白基因的克隆及功能研究根据褐飞虱表达谱和转录组数据库信息筛选出褐飞虱表皮蛋白基因，通过获得核心序列片段。根据核心序列片段设计的引物并分别获得端和端片段，通过进行序列拼接及全长的验证，获得全长。同源性分析发现编码的氨基酸与其他物种的表皮蛋白具有较高同源性。褐飞虱全长序列含有个完整的，编码个氨基酸，共，共，具有典型的结构，预测分子量为.，理论等电点为.，该蛋白具有表皮蛋白典型的保守结构域和，.预测该蛋白含有长度为个氨基酸的信号肽。。
8、荧光定量对在褐飞虱不同发育阶段进行转录水平的定量，结果表明在龄若虫中均有表达，在龄若虫时表达量达到最高，而在成虫体内基本无表达，说明该表皮蛋白基因表达时期为若虫期，属于若虫表皮蛋白基因。采用人工饲料饲喂进行基因的，取食的龄末龄初孵化后第天若虫在干扰天和天时，的表达量分别较取食万方数据的对照组下降.和.，与对照有极显著差异，说明具有显著的干扰效果，导致表皮蛋白基因表达水平下降。干扰后部分褐飞虱因蜕皮不完全死亡，干扰天的存活率较对照下降.。本研究结果提示，与褐飞虱若虫的生长发育及蜕皮相关，可以作为褐飞虱防治的潜在靶标基因。二褐飞虱基因的克隆及功能研究根据转录组信息的数据库信息设计基因特异性引物，通过获得核心序列片段。利用核心序列片段设计的引物并获得端和端片段，通过进行序列拼接及全长的验证，获得全长。同源性分析发现激酶。
9、硕士学位论文褐飞虱发育相关基因和的克隆及功能研究,作者马艳导师俞晓平研究员郝培应副教授学科生物化学与分子生物学中国计量学院二〇四年六月万方数据万方数据中图分类号学校代码密级公开硕士学位论文褐飞虱发育相关基因和的克隆及功能研究,作者马艳导师俞晓平郝培应申请学位理学硕士培养单位中国计量学院学科专业生物化学与分子生物学研究方向分子生物学二〇四年六月万方数据本项目承蒙国家自然科学基金褐飞虱致害性变异相关基因的筛选及功能分析，编号国家项目稻飞虱灾变机理及可持续治理的基础研究，编号浙江省公益技术项目研究褐飞虱致害性变异相关基因的发掘及其在害虫治理中的应用，编号资助万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研。
10、力和汗水让我收获了份来之不易的青春和成熟。在这里向在我成长道路上给我指导支持和帮助的老师，同学和家人表示最诚挚的感谢。首先，感谢我的导师俞晓平研究员和郝培应副教授，本课题是在两位老师的悉心指导下完成的，同时两位老师还在生活和学习上给予了很大帮助和关心。恩师为人和善治学严谨知识渊博积极创新使我受益终身，本论文的实验设计实施论文撰写及修改都离不开恩师的指导和教诲。在此，谨向我的导师表示崇高的敬意和衷心的感谢。本课题的顺利完成，离不开中国计量学院生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室这个良好的实验平台和诸位老师的关心和帮助。感谢马正老师申屠旭萍老师王雪艳老师王正亮老师许益鹏老师崔海峰老师付贤树老师刘光富老师和生命科学学院的全体老师，感谢您在科研和生活中给予我的帮助和启发。三年的研究生生涯中离不开师兄师姐，师。
11、的熔解曲线图.褐飞虱不发育时期的表达量变化.图.干扰片段电泳图图.干扰后存活率的变化.图.褐飞虱取食后表达量变化.图.干扰后褐飞虱卵巢发育.图.褐飞虱后代个体数量.图.褐飞虱和的扩增标准曲线万方数据图.褐飞虱在不同发育阶段的表达规律图.褐飞虱和的扩增标准曲线图.褐飞虱在不同发育阶段的表达规律.图.褐飞虱和的扩增标准曲线图.褐飞虱在不同发育阶段的表达规律.表清单表.克隆荧光定量及合成所涉及到的引物.表.克隆荧光定量及合成所涉及到的引物.表.褐飞虱与其它物种蛋白同源性的比较.万方数据中国计量学院硕士学位论文绪论.前言水稻褐飞虱是种随季风迁移具有多型性的生活史策略的害虫，是亚洲水稻种植区最重要的害虫之。褐飞虱主要通过吸食稻株韧皮部汁液导致水稻枯萎，甚至引起虱烧，严重影响粮食生产,。褐飞虱具迁飞性繁殖力强适应力迅速，其防。
12、其他物种的具有高度同源性。褐飞虱全长序列含有个完整的，编码个氨基酸，共，共，具有典型的结构，预测分子量为.，理论等电点为.，该蛋白具有蛋白激酶的特征位点参与绑定的元件，催化位点和激酶的保守区区磷酸化位点和四个色氨酸残基，。荧光定量对在褐飞虱不同发育阶段进行转录水平的定量，结果表明在整个发育过程均有表达，在羽化后天表达量达到最高，说明表达高峰期在褐飞虱卵巢发育时期，该基因与褐飞虱的卵巢发育繁殖具有重要关系。对龄若虫基因进行，发现的表达量在干扰天后与对照具有显著差异减少，卵巢发育迟缓，在羽化天并没有成熟的卵子形成。将后的褐飞虱放置水稻上产卵，发现前天的个体数量较对照有显著减少，但是其后几天的个体数量没有差异，说明本次是瞬时干扰。研究结果表明，与褐飞虱的生殖发育密切相关，可以考虑作为褐飞虱的防治的潜在靶标基因。关键词褐。
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