,Ⅲ万方数据三峡大学硕士学位论文,,Ⅲ万方数据三峡大学硕士学位论文液洗两次，每次分钟，再用液洗分钟。将辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗用液稀释稀释，室温下孵育小时，再用液洗两次，每次分钟，再用洗分钟。化学发光，显影，定影在膜上滴加适量的增强化学发光底物液，孵育几分钟，荧光带明显后，吸去底物液，覆上保鲜膜，包好，放入光片夹中。在暗室中，在红光下取出光片，用剪刀剪到适当大小，将光片放在膜上，合上光片夹。根据信号强弱调整曝光时间，般为至分钟。曝光完成后，取出光片夹，放入显影液中，待出现明显条带后即可，然后立即把光片浸入定影液中，当胶片透明即可。用自来水冲去光片上的残液，室温下晾干。凝胶图象灰度值分析将胶片进行拍照，用凝胶图象处理系统测定目标蛋白条带的灰度值。万方数据三峡大学硕士学位论文检测肝脏组织中水平的相对表达量。组织和细胞总的提取取少量肝脏组织，将其尽量剪碎，置于匀浆器中，再向匀浆器中加入适量溶液后进行匀浆。匀浆完成后，将样品冰浴分钟，然后离心分钟，将上清液转移到个无酶且已在冰上预冷的离心管中。向离心管中加入氯仿，用力摇晃秒，室温下放置分钟。将离心管置入离心分钟，将上清液转移至另个无酶且已在冰上预冷的离心管中。向管中加入异丙醇，摇匀，静置分钟，使溶液中的沉淀下来。将离心管离心分钟，弃去不清。加入用水配制的乙醇，用移液器反复吹打溶液，洗涤沉淀。将离心管置于离心分钟，弃去乙醇溶液。用微型离心机将离心管内壁的残液甩至管底，用枪头吸出，将盖子打开在超净台内空气干燥十几秒，至管内壁没有水珠即可。向离心管内加入无酶的蒸馏水根据的量，轻弹管壁，充分溶解沉淀，混匀后分装少许用于测定的浓度。吸取溶液，用水将其稀释倍，在紫外分光光度计下读取的浓度值及此溶液在和波长处的值，即值此值在之间表示纯度较好，可进行下面的实验反转录为各样品取相同量的做逆转录反应体系反应条件,短暂离心后置于冰上。万方数据三峡大学硕士学位论文上面步骤中的管全部反应条件，引物应用扩增的片断进行实时定量使用实时定量试剂盒进行实时定量，按照下述方法构建反应体系。先用无菌离心管加好除样品外的所有试剂，颠倒混匀，短暂离心。取出管，分别编号，将上述配制好的反应液分装到每个管中，取第管时用枪头吹打数次。分装完成后，再向每个管中加入合成的样本。每个样品做个重复。万方数据三峡大学硕士学位论文实时定量反应体系稀释反应条件实时定量反应体系稀释反应条件实时定量反应体系稀释反应条件万方数据三峡大学硕士学位论文实时定量反应体系稀释反应条件将上面配制好的溶液混匀，按顺序装入孔板中，置于荧光定量仪中，设置好程序，开始进行扩增。在进行实验前，对样品进行梯度稀释，分别对目的基因和看家基因做标准曲线，如果目的基因和看家基因的标准曲线的斜率之差小于，那么后续实验中就可以用法进行相对定量分析。反之，只能优化反应条件或选择绝对定量方法进行分析。本实验对样品进行梯度稀释后，目的基因和看家基因的标准曲线之差均小于，故可用法对不同实验组的基因表达进行相对定量分析。目的基因和看家基因扩增完成后，得到系列值，导出数据后，根据相对定量公式计算每个样品基因的相对表达量。目的基因看家基因实验组对照组实验组和对照组的基因表达差异为统计学方法本实验的计量资料用平均值标准差来表示，实验结果的统计学分析采用软件进行统计学分析。采用单因素方差分析比较不同实验组的检验差异，检测的值均以为差异有统计学意义。万方数据三峡大学硕士学位论文结果第部分各组大鼠的实验检测结果大鼠般情况的观察及肝脏标本的大体观在实验造模过程中，正常组大鼠体态活泼，体毛整齐光泽度好，饮食大便正常，体重增长正常，精神状态好，无嗜睡现象。模型组大鼠后期精神萎靡，嗜睡，行动缓慢，毛发光泽度差，体重增长缓慢，进食量明显减少。药物干预组的大鼠给予药物治疗段时间后进食量较前有所增加，精神状态有所好转。造模开始前，大鼠采取随机分组，各组大鼠体重无明显差异。造模完成后，分别测量各组大鼠体重，结果见表。其中，模型组抑制组抑制组联合抑制组大鼠体重均较正常对照组明显减轻，存在显著性差异。个药物干预组间大鼠体重无明显差异。模型组和药物干预组大鼠体重增长缓慢，考虑为造模过程中大鼠长期白酒灌胃抑制食欲，摄食量减少，同时长期酒精摄入导致肠道消化吸收不良等因素导致大鼠营养不良，生长缓慢。正常对照组大鼠肝脏被膜表面光滑，呈红褐色质地软模型组大鼠肝脏肿胀，肝缘略变钝，色泽较对照组黯淡，质地稍硬药物干预组大鼠肝脏大体观与正常对照组相似。各组大鼠血清中水平的检测结果模型组大鼠血清中水平明显高于正常组个药物干预组的均低于模型组。其中，联合抑制组的水平低于抑制组，水平分别低于抑制组和抑制组抑制组和抑制组的水平无明显差异。以上差异均以为有统计学意义，实验数据见表。实验结果表明抑制组抑制组联合抑制组大鼠肝功能损伤较模型组均有明显好转，其中尤以联合抑制组好转明显。万方数据分类号密级公开硕士学位论文脂加氧酶在大鼠酒精性肝炎中的表达及其作用机制学位申请人邬升学科专业免疫学指导教师郑世华二四年五月万方数据,万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习