细胞的培养及表型鉴定第二部分两组患者治疗后近期疗效的评价第三部分两组患者治疗后相关肿瘤标志物的变化第四部分两组患者治疗后细胞因子的变化第五部分两组患者治疗后出现的毒副反应的比较讨论小结参考文献综述后记万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称过继性细胞免疫治疗细胞因子诱导的杀伤万方数据三峡大学硕士学位论文万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表引言材料与方法结果第部分细胞的培养及表型鉴定第二部分两组患者治疗后近期疗效的评价第三部分两组患者治疗后相关肿瘤标志物的变化第四部分两组患者治疗后细胞因子的变化第五部分两组患者治疗后出现的毒副反应的比较讨论小结参考文献综述后记万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称过继性细胞免疫治疗细胞因子诱导的杀伤细胞白细胞介素肿瘤坏死因子干扰素常见的毒副作用是患者进行血常规检查时白细胞减少，红细胞血红蛋白含量降低，临床产生血压降低支气管痉挛等反应，在治疗的过程中可能由于患者的凝血因子释放于血中引起患者发生脑梗塞。同时可以引起耳毒性，随着治疗中累积剂量的增加，其末梢神经毒性也不断增加。观察两组患者治疗后的不良反应，同时对比患者治疗前后外周血相万方数据三峡大学硕士学位论文关指标如及肝肾功能相关指标的变化，以及观察患者有无恶心呕吐，疲倦乏力，食欲不振，局部疼痛及盗汗失眠等临床症状的变化。对两组患者出现的不良反应进行统计分析。统计学方法两组实验对象的数据均采用均数标准差表示，结果应用统计软件包进行统计分析。两组之间的差别性检验采用检验有统计学意义。万方数据三峡大学硕士学位论文结果第部分细胞的培养及表型鉴定细胞的形态学观察结果显示在刚开始培养的数小时内细胞呈悬浮生长，镜下观察细胞形态呈圆形，整个细胞透亮，在培养的第时增长还是比较缓慢的，培养后细胞开始迅速增殖，镜下可见明显的集落形成，并且细胞的体积变大呈不规则形，培养后细胞进入快速增殖阶段，到培养至第时镜下见细胞集结成团块，数量约为培养前的倍见图。图培养后的细胞第,左图为倍，右图为倍细胞的表型鉴定取约过继培养的细胞在流式管中加入重悬细胞，向管中加入抗体抗体各，混匀，避光孵育，每摇匀次。孵育结束后加入洗涤离心，倒弃上清，并用卫生纸吸干管口残留液体，重复洗涤次，以去除未结合的荧光抗体。之后以重悬细胞后进行检测。结果如图所示。万方数据三峡大学硕士学位论文图细胞的表型鉴定分离的细胞经过天的培养后，用流式细胞术检测其表型，测试数据显示的细胞数比例为，达以上。第二部分两组患者治疗两周期后的近期疗效的评价两组患者在经过两个周期的治疗后以检查的结果按实体瘤疗效评价标准进行评价具体评价标准见附录。选取联合治疗组中例右肺腺癌患者的检查报告如下图图右肺腺癌患者万方数据三峡大学硕士学位论文从图中可以看出，患者于年月初检，之后行联合化疗，经过联合化疗两周期的治疗后于年月复查，之后又进行了两个周期的联合治疗于年月复查，将检查结果按标准评价达到水平。其它患者结果与此类似，将其进行统计，结果如下表表联合治疗组和单纯化疗组患者的近期疗效分别为和，联合治疗组明显好于单纯化疗组χ。第三部分两组患者治疗后相关肿瘤标志物的变化两组患者经两周期治疗后，再次进行相关肿瘤标志物的检测，比较其治疗前后的变化，统计结果见表。表两组患者治疗前后相关肺癌标志物的检测的比较治疗前癌胚抗原参考正常值糖类抗原参考正常值神经元特异性烯醇化酶参考正常值细胞角蛋白片段参考正常值以上检测结果均采用本院检验科罗氏公司公司型号为全组别χ联合治疗组单纯化疗组组别联合治疗组治疗前治疗后单纯化疗组治疗前治疗后万方数据三峡大学硕士学位论文自动电化学发光免疫分析仪及相应配套的试剂盒完成检测，质量控制均采用罗氏公司试剂盒配套的高质控品及低质控品进行检测。对检测结果中少数严重偏离的数据均进行复查，排除标本溶血等些因素的干扰，复查结果符合者纳入本次研究。实验结果表显示经过两个周期的治疗后两组患者上述肿瘤抗原的表达量大都有不同程度的降低，联合治疗组患者的检测结果显示较前有显著性差异。单纯化疗组的患者经过两个周期的化疗后血清中细胞因子水平均明显降低，差异有统计学意义。表明联合化疗治疗不仅使得患者的免疫功能未受到化疗药物的明显影响，而且可以促进患者机体的分泌，而单纯化疗则抑制患者机体的分泌，明显降低了患者机体的免疫功能。将以上结果绘制成柱状图，如图万方数据三峡大学硕士学位论文图两组患者治疗前后血清中相关的含量第五部分联合治疗组与单纯化疗组患者出现的毒副反应的比较由于两组患者均采用方案化疗，比较常见的毒副作用是患者进行血常规检查时白细胞减少，红细胞血红蛋白含量降低，临床产生血压降低支气管痉挛等反应，在治疗的过程中可能由于患者的凝血因子释放于血中引起患者发生脑梗塞。同时可以引起耳毒性，随着治疗中累积剂量的增加，其末梢神经毒性也不断增加。通过对两组患者治疗前后外周血象血生化的检测以及临床的些表现的统计分析比较两组患者治疗前后的毒副反应，统计结果见下表。万方数据三峡大学硕士学位论文表两组患者治疗后出现的毒副反应的比较组别骨髓抑制恶心呕吐周围神经毒性肝肾功能损伤联合治疗组单纯化疗组单纯化疗组以上结果表明表两组患者的骨髓抑制恶心呕吐周围神经毒性发生率差异均有统计学意义。表明联合治疗可显著降低化疗的毒性反应。万方数据三峡大学硕士学位论文讨论近年来肺癌的发病率和死亡率不断上升，高居肿瘤发病率的首位，而其中大多数为非小细胞肺癌的患者，由于早期诊断的效果不理想，大部分的患者被诊断时已为中晚期，因此错过了手术治疗的时机。同时传统的治疗方法放疗和化疗也无明显突破，目前非手术治疗的模式均在探讨中。尽管肺癌被认为不是种免疫原性恶性肿瘤，但是越来越多的证据表明提高机体内抗肿瘤免疫应答的强度在改善患者的预后中起到举足轻重的作用。以细胞免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗虽然目前仅作为种辅助治疗形式，但其优越性在临床实践中逐渐显现出来并逐步推广。本课题从临床角度对比联合化疗与单纯化疗的疗效，不管是从近期疗效还是从治疗前后的相关肿瘤标志物细胞因子及患者出现的不良反应来看，细胞免疫治疗是安全的，有效的。免疫治疗极有可能整合入现有的治疗指南中而不管肿瘤的组织学如何，不管其分子标志物状态如何。与此同时，我们也要看到些问题。细胞的作用机制不够明确细胞在机体内的激活机制仍不完全清楚，其如何具体发挥杀伤活性的过程有待研究。细胞与机体免疫系统之间的复杂网络环路关系并不完全清晰。细胞在体内的存活时间以及其是如何克服肿瘤患者体内的免疫抑制状态仍不清楚，只有进步明确了其作用机制才能更好的为临床提供理论依据和新的治疗靶点。二细胞的回输途径与其在患者体内的密度规律的关系。目前临床上细胞主要是通过静脉途径回输。相关文献报到，细胞在体外培养天时其细胞数量达到高峰，此时细胞的数量也达到最高值。细胞经癌旁注射途径小时达到最高，经腹腔注射途径，肿瘤组织中的细胞量小时达到最高。与药物的首过效应类似，细胞最先到达的部位可能获得最大程度的截留。所以在临床运用上，并不是所有的回输都采取单的静脉回输的途径，不同解剖部位的肿瘤如果选择不同的回输途径，或许在定程度上可以提高治疗的效果。三关于细胞治疗的疗程。研究显示多疗程治疗组的治疗效果显著高于单疗程组，经过多疗程治疗后患者体内的细胞含量明显高于单疗程组。与此对应经过多疗程治疗后的患者较单疗程患者的生存期明显延长，生活质量得到显著提高。同时在治疗时间的设计上，国外采取每周或隔周输入的方式，国内多采取每日或者隔日输入的方式，研究报道日本的实验室为了保证细胞培养的质量，在细胞的培养过程中多加入增强子和片段用于提高其纯度。对于治疗的疗程及回输的细胞数量，目前国内标准不，很多医院受利益驱使，培养的天数和数量远远达不到标准，而且治疗的费万方数据分类号密级公开硕士学位论文联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效的研究学位申请人章婷婷学科专业免疫学指导教师王嘉军副教授二四年五月万方数据,万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集