相关因子与的相关性通过相关性分析，与表达存在负相关性，及胰岛素抵抗指数表达存在正相关性。的水平可以反映其进展。肝脏脂肪变性程度与的相关性通过相关性分析，肝脏脂肪变性程度组中呈低表达，在模型组中呈高表达，且表达阳性程度以组组组依次升高，各组之间比较有明显差异。检测在组组中呈低表达，在组及组中呈高表达，且组表达阳性程度与组比较有明显差异。在组中呈低表达，在模型组中呈高表达，且表达阳性程度以组组组依次升高，各组之间比较有明显差异。肝脏脂肪变性程度与的呈低表达，在模型组中呈高表达，且表达阳性程度以组组组依次升高，各组之间比较有明显差异。且组表达阳性程度与组比较有明显差异。检测在组组中呈低表达，在组及组中呈高表达，。免疫组化及检测蛋白在组组中呈低表达，在组及组中呈高表达，且组表达阳性程度与组比较有明显差异蛋白在组中呈低表达，在模型组中呈高表达，且表达阳性程度以组组组依次升高，各组之间比较有明显差异。检测在组组中呈低表达，在组及组中呈高表达，且组表达阳性程度与组比较有明显差异。在组中呈低表达，在模型组中呈高表达，且表达阳性程度以组组组依次升高，各组之间比较有明显差异。肝脏脂肪变性程度与的相关性通过相关性分析，肝脏脂肪变性程度与表达存在相关性。相关因子与的相关性通过相关性分析，与表达存在负相关性，及胰岛素抵抗指数表达存在正相关性。结论成功建立了型糖尿病非酒精性脂肪性肝病型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病模型。万方数据三峡大学硕士学位论文在型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的发生及发展过程中，血清的水平可以反映其进展。蛋白参与了型糖尿病的非酒精性脂肪性肝病发生发展过程。通过干预蛋白表达，可能延缓病变进展。关键词型糖尿病非酒精性脂肪性肝病解偶联蛋白炎症胰岛素抵抗万方数据三峡大学硕士学位论文,活检光镜下见大鼠肝细胞内弥漫大量的脂肪空泡大于作为非酒精性脂肪性肝病成模标准。两者均存在为型糖尿病合并酒精性脂肪性肝病成模标准。未成模者从实验中删除。万方数据三峡大学硕士学位论文标本采集血液标本每周测量大鼠体重及反应情况，各组大鼠成模后，检测，禁食小时，称重，麻醉予水合氯醛，腹腔注射，麻醉成功后，打开腹腔，腹腔主动脉取血，以离心分离血清，部分检测空腹血糖另外冻存于超低温冰箱待测。肝脏组织标本大鼠取血后，迅速留取肝脏，冰盐水冲洗，滤纸吸干水分后称量肝湿重，取部分肝脏组织装于标本夹中浸泡于中性甲醛以固定，待后期光镜观察及免疫组化检测部分浸泡于戊二醛中固定以便后期电镜观察，剩余部分迅速装入无酶冻存管中，标号存放于冰箱，用于实时定量聚合酶链反应，检测和和蛋白印迹法，检测。观察内容及指标检测观察模型动物情况及造模评估每天观察大鼠进食及饮水量排泄的尿量毛色活动状况，每周称量大鼠的体重，实验结束计算每组大鼠成模率。生化指标检测测定采用葡萄糖氧化酶法测定。肝指数测定肝指数肝重体重。测定采用双抗体放射免疫分析法测定。胰岛素敏感指数。胰岛素抵抗指数。采用全自动生化分析仪检测。检测血清基本原理采用双抗体夹心法测定实验大鼠水平。用纯化的试剂填充特制的微孔板，固定制成样本固相，在样本中继续加入，制成后平稳摇匀，然后再与抗体混合，这就组成了抗体抗原抗体三体复合物，最后用辣根过氧化物酶，做好标记，已备观察，在恒温摄氏度的温箱中保存小时，这样可使标记物完全均匀，小时后拿出后水洗，洗净后，用甲基联苯胺做底物染色。般开始是蓝色，小时后变为黄色，再长时间都不会再改变。显色好坏主要决定于的浓度高低，般两者呈正相关。用酶标仪测的光密度值万方数据三峡大学硕士学位论文，值，而后根据标准曲线图计算浓度。检测程序稀释般采用较为简单的孔稀释法，在酶板上放置标准大小的孔，以相邻的两个孔做为个单位，分为孔为单位，孔为单位，孔为单位，孔为单位，孔为单位，试验按从小到大的简单顺序依次进行，具体实施方法为，在单位中分别加标准品和稀释液，简单等待完全溶解然后单位各取第次单液，稀释液植入到单位同样的操作方法依次类推，直到单位就可完成此稀释过程。原则为各孔加样，加稀释液浓度分别为，。加样设定空白对照孔，此孔不添加任何实验试剂，设定样品孔，此孔按上述步骤依次加入稀释液，再加入样品，然后固定于酶标板底部。保存用封板膜封闭各个孔，务必避免空气的进入，密封后置入样本培育箱中保存。备洗涤液般使用蒸馏水约即可，不必需要特殊的洗涤液。洗涤小心除去封板膜，用高温消毒的吸水纸吸干样本表面残留的水分，注入洗涤液，稍微搅拌后弃去，重复以上过程次即可。加酶样本孔加入酶剂。温育密封后置入样本培育箱中保存。洗涤与前过程相同。染色显色剂依次注入样本孔及空白对扎孔中，搅拌均匀，务必避光，整个过程约用分钟。终止终止液注入即停止实验。测定空白孔调零，依次测量各孔在波长下的值。绘制标准曲线，测算样品浓度。检测血清基本原理及检测程序同前。大鼠肝脏组织染色形态观察标本固定剖腹取出肝脏后，放入中性甲醛固定小时。脱水室温下，按无水乙醇的顺序梯度脱水，每浓度中停留。透明二甲苯浸透。浸蜡包埋石蜡中浸蜡次，每次小时，用包埋模具盒将组织铸成蜡块。切片蜡块装切片机上，调节切片厚度，均匀用力，切出连续成带，将万方数据三峡大学硕士学位论文切片水中展片，然后用玻片贴片，贴附后，置于恒温箱中干燥。切片常规二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ酒精Ⅰ酒精Ⅱ脱蜡次，各分钟，然后水洗。苏木素染液，水洗。伊红染液，水洗。按，无水乙醇的顺序进行脱水。按二甲苯，的顺序进行透明。中性树胶封片，光镜下观察。评估脂肪变性程度。标准分为轻中重三型。轻度光镜下每单位面积见的肝细胞脂肪变。中度光镜下每单位面积见以上的肝细胞发生脂肪变。重度光镜视野中几乎所有肝细胞均发生脂肪变。大鼠肝脏组织电镜形态观察取材迅速取肝脏标本后切成大小，戊二醛固定小时。液浸洗。锇酸固定小时。液再次浸洗。，依次放入乙醇乙醇醋酸铀饱和液中，接着室温下，依次放入各级乙醇中，各分钟。，先后用环氧树脂包埋剂和丙酮浸透小时后包埋。温箱聚合小时后温箱聚合小时。玻璃制刀机制刀，制备半薄切片。碱性复红，次甲基蓝染色各秒后，冲洗。显微镜下定位，制备超薄切片。醋酸双氧铀和醋酸铅双重染色，透射电镜观察。免疫组化法二步法检测和的表达实验步骤石蜡标本常规脱蜡至水次脱水，用二甲苯将石蜡切片泡染，需要，二次脱水，无水酒精，需要，三次脱水，各浓度酒精各。液冲洗，抗原煮沸，进行热修复，自然冷却，再次冲洗。用高温消毒的吸水纸吸取石蜡切片上组织旁残留液体，放入湿盒中，添加避光孵育，消除内源性过氧化物酶的活性。万方数据三峡大学硕士学位论文液冲洗，同上吸取石蜡切片上组织旁残留液体，放入湿盒中，添加稀释的抗工作液室温孵育分钟。液冲洗，同上吸取石蜡切片上组织旁残留液体，放入湿盒中，添加标记聚合物于组织上室温孵育分钟。