社，李梅，胡洪营噬菌体作为水中病毒指示物的研究进展中国给水排水徐焰噬菌体溶菌机制研究进展重庆医学邢继兰译利用噬菌体治疗大肠杆菌病和预防食源性病原国外畜牧学猪与畜王静，王劲，孙运峰，等治疗性噬菌体制剂的研究进展食品与药品萨姆布努克，弗里奇，曼妮阿迪期分子克隆实验指南第版北京科学出版社，张培东，孙岩，任慧英，等大肠杆菌的分离及其生物学特性中国兽医杂志杜银香，从污水中分离大肠杆菌噬菌体的方法改进湖北民族学院学报沈萍，范秀荣微生物学实验版，北京高等教育出版社，林业杰，陈亢川，胡海林，等海峡预防医学杂志陈敏，方序杭州师范学院学报王晓丽，赵树欣，赵璐，等欧文氏菌噬菌体的分离纯化及其生物学特性研究工业微生物孙海虹，马同锁，于珊，等致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离与效价测定河北师范大学学报熊鸿燕种新型的微生物控制技术噬菌体溶菌技术中国消毒学杂志周德庆微生物学教程，北京高等教育出版社，杜连祥工业微生物学学实验技术，天津天津科学技术出版社，李广武，杨朝晖，岳海峰武汉大学学报自然科学版李维泉，姚鹤鸣，沈美娟病毒学报沈萍，范秀荣微生物学实验版，北京高等教育出版社，司稚东，何晓青噬菌体学北京科学出版社致谢衷心感谢我的导师毛宁老师对我的悉心教导和帮助，毛老师学识渊博治学严谨思维开阔。

在他的严格指导和谆谆教导下，我掌握了较强的专业知识，更培养了我的学习兴趣。

毛老师待人和蔼诲人不倦，他正直的为人踏实的作风令我受益匪浅！衷心感谢培育我四年陇东学院，是它给我提供了发展平台，让我发光发亮，绚丽多彩。

四年的大学生活，学校不仅给我们提供了安全舒适的学习环境，而且教导我们如何生活，为我们步入社会提供了许多宝贵经验！毕业论文论文题目大肠杆菌噬菌体分离纯化研究学院生命科学与技术学院专业生物科学班级级生科班作者姓名郑小云指导教师毛宁职称助教完成日期年月日陇东学院本科生毕业论文诚信声明大肠杆菌噬菌体分离纯化研究摘要关键词引言材料与方法材料方法大肠杆菌噬菌体的分离大肠杆菌噬菌体的纯化噬菌体效价的测定噬菌体对大肠杆菌的裂解曲线对噬菌体裂解率的影响结果与分析噬菌体的分离与纯化噬菌体效价的测定噬菌体对大肠杆菌的裂解曲线对噬菌体裂解率的影响讨论参考文献致谢陇东学院本科生毕业论文诚信声明本人郑重声明所呈交的本科毕业论文，是本人在指导老师的指导下，进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。

对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明。

本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

作者签名二年月日大肠杆菌噬菌体分离纯化研究郑小云陇东学院生命科学与技术学院甘肃庆阳摘要以本实验室保藏的大肠杆菌和为宿主菌，采用双层琼脂平板法从环境污水中分离纯化得到株烈性大肠杆菌噬菌体，研究其对大肠杆菌的裂解曲线及对噬菌体裂解率的影响。

结果表明，噬菌体对有较强的裂解作用，对没有裂解作用在培养基中添加和时，噬菌体出斑率明显高于对照，说明和均可促进噬菌体生长当加入的或时，相对出斑率最高，分别达到和。

关键词大肠杆菌噬菌体分离纯化引言噬菌体是类感染细菌放线菌等微生物的病毒，体积微小结构简单具有严格的寄生性，广泛分布于自然界中。

噬菌体作为指示微生物，在监测水质环境指示污染程度等方面的研究也有了些进展。

因此，分离和研究噬菌体，弄清楚噬菌体与其宿主之间的生态学关系，对于监测水质环境，控制水质污染等方面的工作无疑具有指导意义。

鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的种型特异性，可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型，亦可用于检测标本中的未知细菌和防治些传染病。

噬菌体作为种新的治疗制剂已受到广泛关注。

本研究旨在通过分离大肠杆菌噬菌体，研究其生理特性，为将噬菌体作为种生物制剂，应用于治疗细菌性感染等方面提供参考和依据。

材料与方法材料噬菌体样品来源阴沟污水菌种陇东学院生命科学与技术学院微生物实验室保藏的大肠杆菌和培养基倍牛肉膏蛋白胨培养液，牛肉膏培养液，牛肉膏蛋白胨半固体培养基倒上层用，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒底层平板用试验器材离心机，细菌滤器，抽滤装置，恒温水浴锅，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，无菌涂布器，无菌吸管，培养皿，三角瓶，移液管，试管，漏斗等方法大肠杆菌噬菌体的分离，培养大肠杆菌活化培养实验室保因此，分离和研究噬菌体作为指示微生物，在监测水质环境指示污染程度等方面的研究也有了些进展。

相应宿主菌噬菌体的原液。

。

收集噬菌体将上述培养液于下离心，上清液再经微孔滤膜过滤，滤液即为拟含有和至对数期值左右。

增殖噬菌体样品取上述大肠杆菌培养液于盛有将以上富集液离心富集噬菌体将以上培养液离心，将上清液过滤除菌，取滤液及大肠杆菌液加入倍牛肉膏蛋白胨培养液中，培养进行噬菌体富集。

理盐水作为对照，进行标记，培养，若出现噬菌斑，则证明滤液中存在噬菌层用，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒底层平板用试验器材离心机，细本研究旨在通过分离大肠杆菌噬菌体，研究其生理特性，为将噬菌体作为种生物制剂，应用于治疗细菌性感染等方面标本中的未知细菌和防治些传染病。

意义。

鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的种型特异性，可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型，亦可用于检测构简单具有严格的寄生性，广泛分布于自然界中。

噬菌体作为指示微生物，在监测水质环境指示污染程度等方面的研究也有了些进展。

因此，分离和研究噬菌体，弄清楚噬菌体与其宿主之间的生态学关系，对于监测水质环境，控制水质污染等方面的工作无疑具有指导意义。

鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的种型特异性，可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型，亦可用于检测标本中的未知细菌和防治些传染病。

噬菌体作为种新的治疗制剂已受到广泛关注。

本研究旨在通过分离大肠杆菌噬菌体，研究其生理特性，为将噬菌体作为种生物制剂，应用于治疗细菌性感染等方面提供参考和依据。

材料与方法材料噬菌体样品来源阴沟污水菌种陇东学院生命科学与技术学院微生物实验室保藏的大肠杆菌和培养基倍牛肉膏蛋白胨培养液，牛肉膏培养液，牛肉膏蛋白胨半固体培养基倒上层用，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒底层平板用试验器材离心机，细菌滤器，抽滤装置，恒温水浴锅，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，无菌涂布器，无菌吸管，培养皿，三角瓶，移液管，试管，漏斗等方法大肠杆菌噬菌体的分离，培养大肠杆菌活化培养实验室保藏的大肠杆菌和至对数期值左右。

增殖噬菌体样品取上述大肠杆菌培养液于盛有倍牛肉膏蛋白胨培养液的三角瓶内，后加入污水样离心并过滤除菌，继续摇床振荡培养，以增殖噬菌体。

富集噬菌体将以上培养液离心，将上清液过滤除菌，取滤液及大肠杆菌液加入倍牛肉膏蛋白胨培养液中，培养进行噬菌体富集。

将以上富集液离心后，取上清液加入倍牛肉膏蛋白胨培养液及相应宿主菌液，室温下放置，振荡培养。

收集噬菌体将上述培养液于下离心，上清液再经微孔滤膜过滤，滤液即为拟含有相应宿主菌噬菌体的原液。

验证噬菌体存在在大肠杆菌平板上，滴加上述滤液小滴，同时滴加生理盐水作为对照，进行标记，培养，若出现噬菌斑，则证明滤液中存在噬菌体，。

大肠杆菌噬菌体的纯化用接种环取菌液环接种于液体培养基内，再加人大肠杆菌悬液，使混合均匀。

取上层琼脂培养基，溶化并冷至可预先溶化冷却，放水溶箱内备用，加入以上噬菌体与细菌的混合液，立即混匀，并立即倒人底层培养基上，混匀，置培养。

此时长出的分离的单个噬菌斑，其形态大小常不致，再用接种针在单个噬菌斑中刺下，小心采取噬菌体，接入含有大肠杆菌的液体培养基内。

于培养。

等待管内菌液完全溶解后，过滤除菌，即得到纯化的噬菌体。

噬菌体效价的测定倒平板将融化后冷却到左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾倒于个无菌培养皿中，每皿约倾注培养基，平放，待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释度。

稀释噬菌体按倍稀释法，吸取大肠杆菌噬菌体，注入支装有蛋白胨水的试管中，即稀释到，依次稀释到稀释度。

噬菌体与菌液混合将支灭菌空试管分别标记和对照。

分别从和噬菌体稀释液中吸取于上述编号的无菌试管中，每个稀释度平行做三个管，在另外两支对照管中加无菌水，并分别于各管中加入大肠杆菌菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀，置水浴中保温，让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。

接种上层平板将支融化并保温于的上层肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基分别加入到含有噬菌体和敏感菌液的混合管中，迅速摇匀，立即倒入相应编号的底层培养基平板表面，边倒入边摇动平板使其迅噬菌体稀释倍数效价噬菌体对大肠杆菌的裂解曲线图噬菌体对大肠杆菌的裂解曲线时间吸光值图噬菌体对大肠杆菌的裂解曲线由图和可知，菌体混合悬液的值先升高后下降，说明噬菌体对有较强的裂解作用与噬菌体混合液的值直呈上升趋势，故噬菌体对没有裂解作用。

对噬菌体裂解率的影响由结果图可知，在培养基中添加和时，噬菌体出斑率明显高于对照，说明添加和均可促进噬菌体出斑。

当加入的或时，相对出斑率最高，分别达到和。

和浓度相对出斑率处理相对出斑率处理相对出斑率图和离子对噬菌体出斑率的影响讨论噬菌体是感染细菌的病毒，按其与宿主的关系可将其可分为烈性噬菌体与温和噬菌体。

噬菌体对宿主的裂解和感染是特异性的，是由受体决定的，很少产生耐药性的问题，也不会造成机体的菌群失调，每种细菌都有自身敏感的噬菌体，。

本试验从污水中分离出株烈性大肠噬菌体。

初次分离所得的噬菌体噬菌斑较小，效价比较低，对初次分离得到的噬菌体进行反复分离纯化得到了效价较高裂解能力较强的噬菌体。

噬菌体对宿主菌的裂解作用具有极强的特异性，噬菌体对有较强的裂解作用，对没有裂解作用，说明噬菌体对有特异性。

和能够促进噬菌体的吸附与注入，有利于噬菌体的繁殖，对促进噬菌体的形成有明显效果，所以在培养基中添加和时，噬菌体出斑率明显高于对照。

参考文献司穉东，何晓青噬菌体学北京科学出版建设对环境的影响，初步提出防治措施。

经济效益分析根据土地利用方向，计算项目建设前后项目区农业生产的费用和收益，计算投入产出比和投资回收期。

耕地质量分析对比分析项目建设前后耕地质量变化情况。

土地权属调