1、放在塑料袋子中可以保存达周，且没有发酵发生。经冰冻达周中脉能降低灵敏度，如果是从发酵或者是腐烂叶片中提取清液不能够，即使是用针对万能底物还是用韧皮部杆菌特异性底物。阳性导出液依然有阳性扩增产物当它们被检测，即使是在冷冻在或保存在冰柜中放置高达个月。以上描述实验操作可以用叶片中脉进行。其中叶片中脉重量高达情况下样能够进行，容器中高效缓冲液于叶片比例是。.植物提取液蛋白酶孵化时间和用作导出液量检验用引物产物，在多种体积量，从健康和感染柑橘叶片中准备好导出液，蛋白酶孵化时间分别是，和。阳性扩增产物在用蛋白酶匀浆最低孵化可以获得，过夜后孵化产物很容易获取。在这些情况下，扩增产物可以用导出液获取，但是更大量导出液对有种抑制作用。.特异性和灵敏性在上面我已经指出了用引物对青果病菌所有扩增特异性，对所有韧皮部杆菌品种能够扩增，而对大肠杆菌柯养木杆菌，番茄顽固支原体等却不能扩增产物形成。我们将进步研究韧皮部杆菌引物特异性在其它。
2、中国品种泳道，印度品种泳道和尼泊尔品种泳道，菲尼宾品种泳道，台湾品种泳道和和泰国品种泳道。,本科毕业论文或设计外文翻译图.琼脂糖凝胶电泳分析。限制性内切酶消化扩增产物。在毛里求斯采集原样品和用探针.泳道是阳性杂交反应个亚洲菌系样品用探针.泳道是阳性杂交反应个非洲菌系用两种探针泳道是阳性杂交反应亚洲菌系和非洲菌系联合体有个。,酶来切割扩增片段，静置时间为晚上。这种切割片段通过琼脂糖凝胶中进行电泳分析。.样品回收本科毕业论文或设计外文翻译在越南和毛里求斯岛不同果园里采集带有青果病症状或不带有症状柑橘叶片，把这些样品用塑料袋装好，放入通气箱子中，然后放在冰箱中处理或由邮件寄给波尔多市交货时间般为。些越南样品被送到法国时已经过了天。在到达实验室之前，叶脉是分离开按叶脉分批在冷冻保存，以备以后提取和圆点印迹杂交法用从中脉提取清液准备作分析用。.结果和分析扩增从柑橘植物上提取中韧皮部杆得到菌先前我们已经指出，底物和能够将接。
3、入.。研磨成浆液状态，用注射器收集进行低速离心时，进行离心。既可以直接在折至折稀释悬浮液上完成，也可以在悬浮液以离心后形成沉淀物和用灭菌水稀释液上进行。方法取叶片中脉大约.至.，用刀片切成细小碎片放在个碟状可使用研钵中，加入缓冲液.,另外加入.蛋白酶。将研磨成浆液转移到离心管中，在情况下孵化。悬浮液情况下离心，混入引物净化树脂。这树脂转变成圆柱体，然后用异丙醇洗涤两次，接着加入热水，后，这个离心管圆状物在情况下离心。重复该步骤，取出清液导出液，取两个导出液分别用作。.扩增反应普通引物和被用作常规原核生物扩增引物和，用为亚洲菌系印度浦那品种扩增引物用作非洲菌系南非内尔斯普雷特品种扩增，引物同样可以用作扩增非洲菌系，除了有三个基本变化。因而它们用来作韧皮部杆菌特异性扩增。反应是在混合溶液中进行，其中含有.底物三磷酸脱氧腺苷.巯基乙醇.去垢剂公司生产还有.聚合酶公司生产。温度循环器可以调成以下系列步骤来进行和，循环次。
4、树上危害严重和广泛传播病害，分布在东亚从巴基斯坦到中国，南非和东非，阿拉伯半岛和印度洋海域留尼旺岛，毛里求斯和马达加斯加。由于昆虫媒介可以携带这种病菌，所以这种病害威胁着其他柑橘种植区域像美洲和地中海国家，例如柑橘木虱非洲木虱相继在南美和大西洋岛出现。青果病是由种韧皮部限制性细菌引起，由于这种细菌难培养，当前把它作为个特征。这种可以被定义但难以培养属名称为韧皮部杆菌属，默里和肖勒夫把它定义为难培养有机体，并且归属于细菌类。我们也发现亚洲韧皮部杆菌和非洲韧皮部杆菌属于两种不同菌系亚洲菌系和非洲菌系。两种探针.和.包含核糖体蛋白质基因称作操纵子，知道其片段结构和大小，分别由亚洲菌系和非洲菌系制备。通常圆点印迹杂交化验法，可以在感染柑橘果园里采集柑橘叶片样片，分别检测青果病病菌种类。杂交化验法灵敏度和电子显微镜相近，这是种适用于早期检测方法。用两种不同探针来检测两种不同韧皮部杆菌很有必要韧皮部杆菌在阿拉伯半岛和留尼旺。
5、后提取和圆点印迹杂交法用从中脉提取清液准备作分析用。.结果和分析扩增从柑橘植物上提取中韧皮部杆得到菌先前我们已经指出，底物和能够将接种长春花中不管是亚洲品种还是非洲品种提取里含有青果病菌片段扩增。图片结果显示片段扩增现象，在提取感染亚洲菌系泳道甜橙树苗样品样会出现。并且在反应混合液中至少含有.提取情况下泳道，这种阳性反应明显。在以水泳道或者健康甜橙树苗样品提取泳道作为反应液，没有这种阳性反应。.植物提取物分析方法扩增反应可以在稀释倍悬浮液或高速离心得到沉淀物稀释液上慢慢进行，扩增产生不能够看见，即使在普通或特异韧皮部杆菌引物情况下结果没有表现。当普通引物图像，泳道和或特异引物图像，泳道和在折稀释悬浮液中扩增，和条泳道可以依次看见，其中感染甜橙树苗品种有来自南非泳道中国泳道印度泳道印度尼西亚泳道菲律宾泳道台湾泳道，和泰国泳道，仅用特异引物。从健康甜橙树苗提取液，扩增用普通引物泳道有条泳道产生，而用韧皮部杆菌特异引。
6、种长春花中不管是亚洲品种还是非洲品种提取里含有青果病菌片段扩增。图片结果显示片段扩增现象，在提取感染亚洲菌系泳道甜橙树苗样品样会出现。并且在反应混合液中至少含有.本科毕业论文或设计外文翻译本科毕业论文设计外文翻译题目关于柑橘青果病两种韧皮部杆菌检测本科毕业论文或设计外文翻译关于柑橘青果病两种韧皮部杆菌检测原文来源桑德里.乔格，约瑟夫.玛丽波维，莫里库.卡利法国波尔多第二大学国家农业研究院细胞分子生物实验室摘要青果病是柑橘上种严重并且广泛传播病害，在世界范围内有两个主要柑橘生产区域亚洲和非洲。它是由种难以分离和培养韧皮部杆菌引起，目前是从核糖体序列来鉴别出来。该病菌是属于韧皮部杆菌属难培养新种类，在变形菌门阿尔法部分上，这两种病菌可以被鉴别出来，即亚洲株系和非洲株系。在这篇论文里，我们通过方法扩增序列片段，来检测柑橘树上两种病菌，分辨出两者之间差别和获得扩增后提取物。关键词柑橘青果病，韧皮部杆菌诊断前言青果病是柑。
7、柑橘病原体上，例如柑橘螺原体，杆菌顽固病菌柔膜体纲，柑橘溃疡病革兰氏阴性菌，从柑橘上获得鲁菲不动杆菌细菌，植物病原细菌,根癌病土壤杆菌，归属于相同系统发生丛生性和韧皮部杆菌相比。我们也检测了植物根腐病毒感染柑橘叶子里提取清液扩增产物，这种病毒病毒在亚洲和非洲属于种地方病，和青果病根腐病是相伴发生。图中第条泳道显示，从生物体或感染植物提取清液扩增产物，只有在用原核普通引物情况下才能获取泳道，而不是韧皮部杆菌特异引物泳道。在根腐病毒感染植物是叶绿体，这用普通引物扩增。泳道和显示扩增产物是由亚洲菌系感染清液获得浦那，印度品种，引物分别是普通引物和特异引物。用水取代清液调控样品没有扩增产物形成泳道和从健康柑橘上提取清液，同预期样，能用普通引物扩增泳道而不能用韧皮部杆菌特异引物扩增。由于青果病菌不能培养，确定敏感性困难。为了评价这种方法检测极限，采用般受感染中脉量大约到.和逐渐增多健康叶片中脉到混合，柑橘方法来安排实验。。
8、当感染叶片为时仍然会有扩增产物获，这种方法已得到证实。在温室和原野里生长橘本科毕业论文或设计外文翻译树亚洲菌系和非洲菌系检测结果是致，至少用种敏感性和杂交具有同等效率方法。这个过程时间长度比杂交更短，最长步骤是中脉研磨和缓冲液水浴每个样品约分钟。关于流行病学研究，用限制性内切酶消化扩增是来检测提供韧皮部杆菌品种是可能。致谢这工作得到阿奎坦地区办公厅批准和支持。我们要感谢在柑橘青果病研究全力支持，和提供资金在越南地区进行调查。我们要感激乔治.玛丽萨德合作任务项目，葡萄酒发展工程和吉恩.克劳德阿特瑞毛里求斯糖业研究学会在毛里求斯任务期间支持。参考文献.,,,,.,.,.,.，,本科毕业论文或设计外文翻译图.琼脂糖凝胶电泳分析扩增以和底物，在加入各样品水泳道，健康植株提取泳道,亚洲菌系感染甜橙树苗泳道.用作模板量泳道和中分别为，泳道中，泳道中，泳道中.，泳道.。,公司生产本科毕业论文或设计外文翻译图.电泳中以为通用引。
9、不是韧皮部杆菌特异引物泳道。在根腐病毒感染植物是叶绿体，这用普通引物扩增。泳道和显示扩增产物是由亚洲菌系感染清液获得浦那，印度品种，引物分别是普通引物和特异引物。用水取代清液调控样品没有扩增产物形成泳道和从健康柑橘上提取清液，同预期样，能用普通引物扩增泳道而不能用韧皮部杆菌特异引物扩增。由于青果病菌不能培养，确定敏感性困难。为了评价这种方法检测极限，采用般受感染中脉量大约到.和逐渐增多健康叶片中脉到混合，柑橘方法来安排实验。当感染叶片为时仍然会有扩增产物酶来切割扩增片段，静置时间为晚上。这种切割片段通过琼脂糖凝胶中进行电泳分析。.样品回收本科毕业论文或设计外文翻译在越南和毛里求斯岛不同果园里采集带有青果病症状或不带有症状柑橘叶片，把这些样品用塑料袋装好，放入通气箱子中，然后放在冰箱中处理或由邮件寄给波尔多市交货时间般为。些越南样品被送到法国时已经过了天。在到达实验室之前，叶脉是分离开按叶脉分批在冷冻保存，以备以。
10、物泳道没有条泳道产生。尽管如此，从相同植株上提取不同上清液，结果并不致，得到些错误阴性反应。高倍稀释悬浮液并没有改进这结果。因此，方法中些局部活跃扩增成功，并得到证实方法，材料和方法。方法图片显示结果是韧皮部杆菌特异底物.，.和.与水泳道，健康甜橙提取物泳道，被来自于南非津巴布韦中国印度印尼尼泊尔菲律宾台湾泰国黄龙病病原感染甜橙叶片提取物泳道标记为泳道。在加了水或者是健康甜橙提取物没有扩增物出现中。不管出现黄龙病菌是否在底物.，.和.被用到，典型条带只能在经感染甜橙叶片提取液中才能被观察到。相反，当进行用.，只能在非洲亚洲提取物中获得，它们得到都很少或者是根本没有被扩增。这步骤可以在同种植物独立提取液中重复操作，并且总是会得出致结果。另外，这种扩增条带比方法中更为敏感。.植物样品采集和保存环境本科毕业论文或设计外文翻译采用新鲜叶片中脉得到扩增产物相当好，叶片干燥后情况下放在工作台上，用硅酸保存几天，或者是在冰柜。
11、岛，毛里求斯岛这些地方都相继发现过实际上，抽提进行圆点印迹法能让我们在很短时间内迅速进入下步骤。是种简单快捷和灵敏方法，确如此，我们把它作为早期克隆目，得到亚洲菌系和非洲菌系基因序列。通过基因序列比较分析，模板和扩增韧皮部杆菌核糖体有明显相同部分。在这篇论文里，我们研究最初细菌特异性，必须要求扩增从柑橘叶片中抽提韧皮部杆菌属。上面扩增片段中，可以用扩增限制性内切酶来区分不同韧皮部杆菌种类。.材料和方法本科毕业论文或设计外文翻译.植物材料长春花蔷薇属和甜橙柑橘科，均受到亚洲菌系和非洲菌系两种不同病菌感染，并体现初出早期症状。这两类植物，其中感染亚洲菌系主要放置在白天和晚上温室中感染非洲菌系放置在白天和晚上温室中另外健康长春花和柑橘植物通过播种，在温室里生长获得。.提取植物中使用默里和汤普生提出常规十六烷基三甲基溴化铵法来抽提。提取柑橘叶片研磨液，准备。方法取.叶片中脉，用刀片切成细小碎片放在个碟状可使用研钵中，加。
12、泳道和或者从水中泳道以黄龙病菌菌种引物泳道和扩增条泳道.琼脂糖凝胶分析来自健康甜橙叶片遵循方法提取物泳道，或者从感染了黄龙病菌提取物南非泳道中国泳道印度泳道印尼泳道菲律宾泳道台湾泳道，和泰国泳道。本科毕业论文或设计外文翻译本科毕业论文或设计外文翻译图琼脂糖凝胶电泳分析。以通用引物为底物泳道和或者以黄龙病菌菌种为引物泳道和与水对照泳道从健康叶片提取物泳道来自亚洲菌种泳道来自受根腐病菌感染甜橙树种泳道来自螺原体泳道来自野生黄杆菌属泳道不动细菌属泳道，图琼脂糖凝胶电泳分析。通用引物泳道和或者韧皮部杆菌特异引物泳道和加水泳道，扩增，导出清液来自健康植株泳道，亚洲菌系泳道，柑橘根腐病毒泳道，感染甜橙种苗。螺原体病原泳道，柑橘溃疡病泳道，洛夫不动杆菌泳道，和根癌病土壤杆菌泳道，。,本科毕业论文或设计外文翻译图.琼脂糖凝胶电泳分析。限制性内切酶消化扩增产物，内罗斯布鲁南非泳道，莱塔巴品种泳道和哈拉雷品种津巴布韦泳道，亚洲菌系。
参考资料：
（外文翻译）关于柑橘青果病的两种韧皮部杆菌的PCR检测（外文+译文）