杂，伴生植物丰富，近年来野生资源遭受人为破坏十分严重，在我省分布地已经很狭窄，资源蕴藏急剧减少，据统计其药材总蕴藏量仅有约，已远远不能满足市场需求，价格居高不下，近几年上涨幅度大，且有进步攀升之趋势。

因此在加强三叶青野生资源种质保护同时进行三叶青驯化栽培育种野生抚育等方面研究，在广大农村地区进行推广种植，有利于三叶青资源持续利用。

本项目研究旨在为扩大野生三叶青资源，加速三叶青栽培和开发提供新技术本研究还为开展该物种遗传育种和保护生物学等方面研究提供了良好试验基础，具有广泛应用前景利用快繁技术繁殖三叶青，可以提高土地利用率开辟了新途经，对农业结构调整和贫困山区经济发展具有重要现实意义和长远历史意义还可以保持自然界生物多样性向人们提供丰富三叶青种质资源，解决三叶青药材来源匮乏问题，满足人民用药需要，可实现可持续性发展。

而且也可以改进市场三叶青供应和提高三叶青药材品质，以及为相应品种深度系列开发提供研究基础。

此外，对探讨药用观赏植物人工驯化栽培盆栽培养和快速繁殖均有定创新价值，故研究三叶青生态栽培和快速繁殖等方面技术研究有重大经济和科研价值。

二国内外研究现状和发展趋势目前国内外对三叶青研究主要集中在化学成分药理以及生药鉴定等方面，钟晓明等通过研究三叶青提取物包括总黄酮总氨基酸及多糖成分对致急性肝损伤小鼠保护作用，发现其能够明显降低肝损伤小鼠谷丙转氨酶谷草转氨酶增高，减轻肝细胞变性，炎症浸润及坏死等病变降低肝中丙二醛生成量。

伍昭龙等同时开展了三叶青水煎液对致大鼠急性肝损伤保护作用研究，研究结果表明，该中药除能降低肝损伤大鼠血清及水平外，还能降低碱性磷酸酶水平而水平明显升高。

基于钟晓明等研究基础，黄真和毛庆秋深入研究了三叶青总氨基酸对诱导小鼠急性肝损伤保护作用，研究结果显示，其能够明显降低急性肝损伤小鼠和活性升高，同时还能降低肝脏指数及肝中生成量，提高肝中活性，减轻肝细胞变性炎症浸润及坏死等病变。

杨雄志采用小鼠尾静脉注射和方法成功造出免疫性肝损伤模型，该模型小鼠血清转氨酶和乳酸脱氢酶显著升高，肝匀浆含量也显著升高，但水平明显降低对照病理模型组，杨雄志发现不同剂量三叶青提取液给药组小鼠血清水平降低肝损伤不同程度减轻，研究结果表明，三叶青提取液对和诱导小鼠免疫性肝损伤具有良好防护作用。

恶性肿瘤治疗目前在医学界尚无理想药物和方法，且此类疾病药物耐受性明显增高，但同时中医中药及有关营养支持疗法为治疗恶性肿瘤开辟了新途径。

据年报道三叶青乙酸乙酯溶部分主要成分为苯甲酰基胡萝卜甙具有定肿瘤抑制和抗病毒作用丁钢强等年研究发现，三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分对人肝癌细胞活性具有较强抑制作用正丁醇部分也有定作用，有力支持和验证了以上研究结果。

研究同时发现，三叶青提取物对正常原代培养大鼠肝细胞活性没有明显影响，对活力影响也较对要小，提示三叶青各部分提取物余杭区年度农业科技创新项目项目名称野生三叶青驯化栽培种质筛选及开发利用承担单位杭州鸿越生态农业科技有限公司合作单位杭州职业技术学院浙江大学申报日期年月日项目申请表二项目可行性研究报告三承诺书余杭区年度农业科技创新及社会发展项目申报表申报单位杭州鸿越生态农业科技有限公司项目主持人邬锡伟项目名称野生三叶青的驯化栽培种质筛选及开发利用起止年限联系电话项目类别农业科技创新项目项目拟投入经费万元项目申报单位上年度销售收入万元技术依托单位杭州职业技术学院浙江大学上缴和临床应用医学研究杂志，冯正权，倪克锋，何煜，等三叶青黄酮诱导胃癌细胞凋亡实验研究中国临床药理学与治疗学境条件运用生态栽培技术手段进行三叶青高效栽培，探讨三叶青快速繁殖与生态栽培环境条件和栽培基质建立三叶青安全生产及品质保证技术体系。

本项目以三叶青种质筛选快速繁殖生态栽培及活性成分分析为主线，按以下技术路线进行研究。

课题研究采用产学研结合，实施课题制管理，在课题责任人负责基础上，分课题子课题两级管理，由课题责任人负责签订课题分级合同，并报归口部门备案。

子课题由课题组成员分工研究。

课题分解三叶青种质资源收集与优质种质筛选三叶青扩繁与容器栽培关键技术三叶青复种高效生态栽培关键技术及不同栽培条件下活性成分分析。

六计划进度安排本项目按照生产要求设计生产工艺，实行规范化操作，严格，按照科学选种科学培育科学用药科学管理等工艺技术方案，确保项目提供三叶青品种好质量高效益三叶青种质收集种质筛选并鉴定三叶青快速育苗技术研究三叶青高效复种技术研究三叶青生态栽培模式三叶青安全高效栽培体系与示范总结及推广应用三叶青活性成分分析与对比好。

进行优良种质选育。

开展种源与无性系选择，并筛选可大力推广高品质优良三叶青种苗。

项目采用野生种子，筛选原原种，采集种子和外植体进行人工仿野生条件下驯化栽培。

采集种子或外植体进行组织培养，筛选用个培养基进行。

观察后选定最佳培养基进行愈伤组织培养扩繁。

中药材种植准备选择周围无污染源土行进步研究，并进行组装配套，研究制定出适宜我市生产管理规范，从繁殖材料栽培收获初级加工商品分级与包装贮藏和运输人员和设施文件档案管理质量保证等方面对三叶青生产管理技术进行全面具体规定，并加以推广应用。

三叶青种质资源收集及组织培养技术在我市范围内开展三叶青种质资源调査工作，摸清三叶青种质资源分布情况及产业发展概况。

在系统调査研究基础上，在我省主要分布区域收集三叶青种质资源。

经过筛选种质进行组织培养扩繁，培育优质种苗。

不同栽培条件三叶青有效成分比较研究及栽培体系建立开展不同种源不同栽培方式不同立地三叶青有效成分对比分析研究，筛选出有效成分含量高产量高，适应山地及平原栽培三叶青种苗，并建立三叶青复合间混作高效栽培技术体系。

二主要技术指标掌握和控制三叶青快速繁殖影响因子技术。

筛选出适合三叶青组织培养培养基，培养小苗过程中，采用愈伤组织培养及最佳培养基配方技术，整个过程时间缩短了个月，组培苗移栽成活率达以上。

能周年生产三叶青，向人们提供丰富三叶青药材，满足人民用药需要，同时也为花卉市场提供插花材料和观叶盆花，丰富花卉市场种类。

大面积地推广三叶青种植，投入产出比可达以上。

采用生态栽培技术不使用化学合成肥料农药生长调节剂添加剂色素等，也不采用基因工程和离子辐射技术，而是遵循三叶青自然生长规律，培肥除草防治病虫害采收和初加工，形成三叶青药材及其产物安全生产体系。

三主要经济指标社会效益及成果制定三叶青生态栽培技术标准，建立三叶青试验示范基地亩，推广亩，投产后年增产值万元，年增利润万元，年增税收万元。

确定三叶青有效成分总黄酮提取工艺并建立快速检测技术。

揭示三叶青有效成分与栽培条件变异规律，为确保三叶青品质提供科学依据。

开发批适宜赏药兼用三叶青生态栽培产品，满足市场需要。

发表学术论文篇，申请专利项。

通过本项目建设，以公司为龙头，联结广大农户，通过公司基地农户模式发展优质三叶青产业，全面利用高新技术和新品种与人工栽培生产新工艺等，劳动生产效培养和快速繁殖均有定创新价值，故研究三叶青生态栽培和快速繁殖等方面技术研究有重大经济和科研价值。

二国内外研究现状和发展趋势目前国内外对三叶青研究主要集中在化学成分药理以及生药鉴定等方面，钟晓明等通过研究三叶青提取物包括总黄酮总氨基酸及多糖成分对致急性肝损伤小鼠保护作用，发现其能够明显降低肝损伤小鼠谷丙转氨酶谷草转氨酶增高，减轻肝细胞变性，炎症浸润及坏死等病变降低肝中丙二醛生成量。

伍昭龙等同时开展了三叶青水煎液对致大鼠急性肝损伤保护作用研究，研究结果表明，该中药除能降低肝损伤大鼠血清及水平外，还能降低碱性磷酸酶水平而水平明显升高。

基于钟晓明等研究基础，黄真和毛庆秋深入研究了三叶青总氨基酸对诱导小鼠急性肝损伤保护作用，研究结果显示，其能够明显降低急性肝损伤小鼠和活性升高，同时还能降低肝脏指数及肝中生成量，提高肝中活性，减轻肝细胞变性炎症浸润及坏死等病变。

杨雄志采用小鼠尾静脉注射和方法成功造出免疫性肝损伤模型，该模型小鼠血清转氨酶和乳酸脱氢酶显著升高，肝匀浆含量也显著升高，但水平明显降低对照病理模型组，杨雄志发现不同剂量三叶青提取液给药组小鼠血清水平降低肝损伤不同程度减轻，研究结果表明，三叶青提取液对和诱导小鼠免疫性肝损伤具有良好防护作用。

恶性肿瘤治疗目前在医学界尚无理想药物和方法，且此类疾病药物耐受性明显增高，但同时中医中药及有关营养支持疗法为治疗恶性肿瘤开辟了新途径。

据年报道三叶青乙酸乙酯溶部分主要成分为苯甲酰基胡萝卜甙具有定肿瘤抑制和抗病毒作用丁钢强等年研究发现，三叶青提取物中乙酸乙酯溶部分对人肝癌细胞活性具有较强抑制作用正丁醇部分也有定作用，有力支持和验证了以上研究结果。

研究同时发现，三叶青提取物对正常原代培养大鼠肝细胞活性没有明显影响，对活力影响也较对要小，提示三叶青各部分提取物余杭区年度农业科技创新项目项目名称野生三叶青驯化栽培种质筛选及开发利用承担单位杭州鸿越生态农业科技有限公司合作单位杭州职业技术学院浙江大学申报日期年月日项目申请表二项目可行性研究报告三承诺书余杭区年度农业科技创新及社会发展项目申报表申报单位杭州鸿越生态农业科技有限公司项目主持人邬锡伟项目名称野生三叶青的驯化栽培种质筛选及开发利用起止年限联系电话项目类别农业科技创新项目项目拟投入经费万元项目申报单位上年度销售收入万元技术依托单位杭州职业技术学院浙江大学上缴琦，陆文超，于治国，等三叶青化学成分研究中草药，丁刚强，郑军献，魏克民，等三叶青提取物对肝癌细胞及原代大鼠肝细胞体外毒性作用研究浙江预防医学程伟，陆曙梅三叶青提取物对肺癌细胞体外抑制作用中国实验方剂学杂志，汪珍，冯健，王晓华等三叶青提取物对人结肠癌细胞系细胞凋亡影响浙江中医药大学学报杨学楼，罗经，孙松柏，等三叶青抗病毒作用研究