【毕业设计】僵蚕活性成分的提取及其对大肠杆菌抑制作用的研究 ㊣ 精品文档 值得下载

需氨基酸。

其中白僵蚕中甘氨酸含量最高，之后依次是丙氨酸丝氨酸酪氨酸和谷氨酸，精氨酸的含量最低。

在白僵蛹中谷氨酸含量最高，之后依次是天冬氨酸亮氨酸苯丙氨酸组氨酸和精氨酸，色氨酸的含量最低。

赖氨酸能改善营养不良和蛋白质代谢障碍，促进生长发育，并有促进愈后机体恢复等特殊功效，精氨酸可用于治疗昏迷等症，组氨酸用于治疗十二指肠溃疡及肝炎等，酪氨酸对神经功能障碍有作用。

僵蚕体中所含的蛋白质有刺激肾上腺皮质的作用，白僵菌还含甾体羟基化酶系，有抑癌活性，可以合成类皮质激素，。

表僵蚕和白僵蛹中氨基酸的含量氨基酸含量氨基酸含量天冬氨酸谷氨酸丝氨酸丙氨酸甘氨酸蛋氨酸缬氨酸亮氨酸异亮氨酸苯丙氨酸酪氨酸组氨酸赖氨酸脯氨酸精氨酸色氨酸苏氨酸注，维生素及微量元素白僵蚕及白僵蛹中富含维生素，且种类很多，均是其他动物类食品所不含或含量极少的维生素，如每克蛹粉中含有胡萝卜素核黄素生育酚和视黄素分别为，和，它们都数倍甚至数十倍地高于所有谷物类食物。

经试验测得白僵蚕中含有种微量元素，总量为。

其中和等种元素为人体必需微量元素。

在测得的种元素中，含量较高。

锌是人体近百种酶的激活剂，且能促进，及胰素的合成，同时有机锌有促进儿童智力发育，增强记忆功能，有促进细胞繁殖与分泌性激素，增强性功能的作用。

硒是稀有元素，与人体免疫作用有关，有较好的抗癌作用。

医学临床公认，锌对维持皮肤粘膜的正常结构和功能，促进蛋白质的合成和利用身体的生长发育伤口的愈合等，具有重要作用。

铁作为血红素和肌红蛋白所必需的成分，跟细胞内的生物氧化过程有密切联系，可用于预防和治疗贫血，增强骨髓的造血机能。

锰在三羧酸循环中作为多种酶的活化剂和组成成分，与碳水化合物和脂肪代谢有关，为骨骼的正常发育所必需。

其他许多金属元素可与有机成分形成络合物，具有明显药理活性。

表僵蚕和白僵蛹中的微量元素微量元素含量微量元素含量铝镧铁锰钙镍镁铅磷锶硼钛钡铀铜铱铬锌注，有机酸及草酸铵蚕蛹干粉中含有脂肪，其中不饱和必需脂肪酸油酸亚油酸和亚麻酸占，溶有大量的脂溶性维生素，有显著的润肤软化血管延缓衰老抗疲劳促进毛发再生作用。

白僵菌能在浸入的蚕幼虫和蚕蛹代谢过程中产生草酸柠檬酸等有机酸。

有机酸通过削弱昆虫表皮蛋白质分子间的键，从而参与昆虫表皮的溶解。

草酸可与表皮中的钙相互作用，最终使表皮更容易被蛋白质或其它水解酶降解。

在虫蛹体表形成草酸铵，是中药僵蚕僵蛹的药理成分之。

可用以治疗头痛眩晕中风等症。

白僵蚕及白僵蛹中还含有核酸，核酸作为人类基本营养物质，业已发现并证明核酸对老弱病幼有突出的健身强体作用。

白僵菌素白僵菌在生长过程中能分泌毒素，目前已发现有数种，其中有的毒性较大，具有与阳离子络合的特性。

首次从球孢白僵菌的菌丝体中提取了白僵菌素，是个环状三羧酸肽，含有甲基苯丙氨酸和羟基异戊酸，分子式为，分子量，其母核结构见图，随后又从该菌中分离得到另种白僵菌素是种环状四羧酸肽，含有甲基亮氨酸和羟基异戊酸，分子式为，分子量为。

杀菌试验表明，其对革兰氏阳性菌绿脓杆菌霉菌等具有明显的杀菌抑制作用，对些海洋生物呈剧毒，对蚊子幼虫等具有中等强度的抑制作用。

在饲料中加入白僵菌素，能引起家蚕龄幼虫肌肉收缩迟缓，最后死亡，具明显毒性，。

图白僵菌素的母核结构白僵菌产生的白僵菌素是僵蚕或僵蛹的主要有效成分之。

实验证明白僵菌素对革兰氏阳性菌霉菌及孑孓有抑制作用，除此之外，白僵菌素在人体内的药理功能尚不清楚。

其它活性物质蚕体中含有变态活性激素促脱皮甾酮羟基犬尿素及多种酶类物质。

僵蚕中还含有甾体羟基化合酶素，可合成皮质激素。

在僵蚕表皮还含有大量几丁质。

在对白僵菌研究中发现，该菌至少能分泌种水解酶，即脂酶蛋白酶和壳质酶，能促进穿透受染幼虫表皮，并能利用谷氨酸天门冬氨酸草酸铵酒石酸铵作为氮源，从白僵菌中可分得白僵菌黄色素，在培养中氮源枯竭时，该色素迅速积累，的方法进行。

先取支灭菌的试管，向号管加肉汤培养基，号每管各加肉汤培养基，再向号试管加供试液，然后吸取至第管，混匀后再吸取至第管，如此连续倍比稀释至第管，并从第管中吸取弃去，号管到号管的供试液浓度以提取浸膏计依次为和。

然后向号管每管加浓度为的菌液，其中号管作为阴性对照。

号管加入供试液代替菌液作为阳性对照，号管加入丙酮和菌液作为溶剂对照。

将支试管置于恒温培养箱中培养，然后对各管进行比浊，以确定最低抑菌浓度。

供试管的混浊度小于阴性对照管表明有抑菌活性，混浊度与阴性对照管相同表示无抑菌活性，混浊度越大表明抑菌活性越小。

结果分析提取方法分析表显示，用乙醇作为提取溶剂，不同提取方法提取的僵蚕活性物质的浸膏得率大小顺序为超声波法微波法煎煮法冷浸法。

从而说明超声波法提取浸膏得率最高，故选择超声波法提取僵蚕活性物质。

表不同提取方法对僵蚕提取物浸膏得率的影响提取方法提取浸膏克数提取浸膏率超声波微波煎煮冷浸注以上样品均为乙醇提取。

表显示，用超声波作为提取方法，不同提取溶剂提取的僵蚕活性物质的浸膏得率大小顺序为乙醇甲醇丙酮水乙酸乙脂石油醚二氯甲烷。

从而说明乙醇提取浸膏得率最高，故选择乙醇提取僵蚕活性物质。

表不同提取溶剂对僵蚕提取物浸膏得率的影响提取溶剂提取浸膏克数提取浸膏率石油醚二氯甲烷乙酸乙脂丙酮乙醇甲醇水注以上样品均为超声波提取。

抑菌实验结果比色法图显示，不同提取方法得到的提取物对均有明显抑菌作用。

纸片扩散试验结果表显示，用乙醇作为提取溶剂，不同提取方法提取的僵蚕活性物质的抑菌活性大小顺序为超声波法煎煮法微波法冷浸法。

从而说明种提取方法提取的僵蚕活性物质对均有抑制作用，但超声波法提取物的抑制作用最明显，故超声波法能够更有效地提取僵蚕活性物质。

表不同提取方法提取的僵蚕活性物质对生长的影响提取方法抑菌圈直径超声波提取微波提取煎煮提取冷浸提取注以上样品均为乙醇提取，样品浓度为以浸膏计，表中抑菌圈直径是次试验平均值。

表显示，用超声波作为提取方法，不同提取溶剂提取的僵蚕活性物质的抑菌活性大小顺序为水甲醇乙醇乙酸乙脂丙酮石油醚二氯甲烷。

从而说明图不同提取方法提取的僵蚕活性物质对生长的影响样品浓度以浸膏计丙酮对照超声波提取微波提取煎煮提取冷浸提取种提取溶剂提取的僵蚕活性物质对均有抑制作用，但水提取物的抑制作用最明显，故水能够更有效地提取僵蚕活性物质。

表不同提取溶剂提取的僵蚕活性物质对生长的影响提取溶剂抑菌圈直径石油醚二氯甲烷乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水注以上样品均为超声波提取，样品浓度为以浸膏计，表中抑菌圈直径是次试验平均值。

僵蚕活性物质的最小抑菌浓度表显示，用乙醇作为提取溶剂，不同提取方法提取的僵蚕活性物质的抑菌活性大小顺序为超声波法微波法煎煮法冷浸法。

其对的最低抑菌浓度依次为，。

用超声波作为提取方法，不同提取溶剂提取的僵蚕活性物质的抑菌活性大小顺序为水甲醇乙醇乙酸乙脂丙酮石油醚二氯甲烷。

其对的最低抑菌浓度依次为。

表僵蚕活性物质的最小抑菌浓度供试样浓度溶剂对照阴性对照阳性对照超声波提取微波提取煎煮提取冷浸提取石油醚二氯甲烷乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水注表示清澈表示较清澈表示较混浊表示混浊。

结论与讨论提取方法分析乙醇超声波法提取浸膏得率最高。

在提取过程中，二氯甲烷容易挥发，建议增加冷凝回流装置。

由于本实验研究仅是初步的尝试，在提取工艺方面还十分欠缺，需要进步深入研究，摸索最佳的提取技术。

抑菌实验结果不同提取方法得到的提取物对均有明显抑菌作用。

不同提取溶剂得到的提取物对均有明显抑菌作用。

超声波水提取物的抑菌效果较为明显，其对的最低抑菌浓度为。

在抑菌实验中，僵蚕的有机溶剂提取物浓度以浸膏计时，容易产生脂溶性沉淀，不适于采用比浊法检测僵蚕的有机溶剂提取物的抑菌活性。

致谢衷心感谢导师王敦教授唐光辉教授在实验学习和生活中给予的细心指导和帮助。

导师们渊博的知识，严谨的治学态度，忘我的敬业精神和宽宏博大的胸怀，使我学到了许多专业知识和做人的道理，也是我终生学习的榜样。

衷心感谢西北农林科技大学食品科学与工程学院的老师们在学习和生活中给予的细心指导和帮助。

老师们渊博的知识，严谨的治学态度，忘我的敬业精神和宽宏博大的胸怀，使我学到了许多专业知识和做人的道理，也是我终生学习的榜样。

感谢西北农林科技大学植保资源与病虫害治理实验室的吕林老师李萌硕士史彩华硕士和吉瑾同学在实验和学习上给与的许多帮助和关心。

感谢西北农林科技大学无公害农药研究服务中心无公害农药中心的安芬霞老师郭彬彬老师张璟老师梁晓光老师冯岗博士在实验和学习上给与的许多帮助和关心。

感谢我的同学们和朋友们在实验和学习上给与的许多帮助和关心。

感谢我的家人在四年的学习生活中给予的理解鼓励和支持，使我能够顺利完成论文工作。

最后，感谢所有在论文工作期间给予过我帮助的人，参考文献中国医学科学院，中国协和医科大学药用植物研究所，北京医科大学药学院，等编中药志Ⅵ北京人民卫生出版社，中国药科大学等主编中药辞海第卷北京中国医药科技出版社，中国医学科学院药物研究所药理室与植化室神经组中草药通讯中国科学院动物研究所，等中草药通讯李冬生，王金华，胡征，李轶群白僵蚕主要化学成分及其挥发油的分析化学与生物工程卫功庆，鞠贵春，李慧萍，等白僵蚕化学成分的分析吉林农业大学学报王居祥，朱超林，戴虹僵蚕及僵蛹的药理研究与临床应用时珍国医国药董宏平，袁生球孢白僵菌代谢产物的研究概况生物技术时连根桑蚕病原微生物资源开发利用生物技术周英豪，陈书静，李华，等活血平肝祛痰治疗血管性头痛例成都中医药大学学报方志刚，张立钦，刘军主要虫生真菌的分子生物学研究进展南京林业大学学报武艺，黄秀梨，邓继先，等球孢白僵菌毒素的分离毒力检测及结构鉴定微生物学报，刘志军治瘿汤治疗甲状腺瘤例湖南中医杂志胡丰林，樊美珍，李增智种白僵菌代谢产物中生物活性物质的研究Ⅰ具有清除自由基的活性物质的分离和制备菌物系统彭延吉，李露丹，邓奕辉僵蚕抗实验性静脉血栓及作用机理的研究湖南中医学院学报马尚谦中药愈痫胶囊治疗癫痫大发作例山西中医王居祥，朱超林，王晓露僵蚕复方制剂的临床应用近况南京中医药大学学报陈可冀抗衰老中药学北京中医古籍出版社，毛宏德白僵蛹中白僵菌素的分离和鉴定中草药江苏新医学院中药大辞典上海上海科技出版社，李国均中国药材学北京中国医药科技出版社，王金华白僵蚕及白僵蛹活性物质的研究与应用时珍国医国药张曙明，陈建民僵蚕的临床应用