1、数滤膜下表面的细胞数即可测出趋化因子的趋化能力。趋化材料和趋化时间的选择趋化滤膜的材料和孔径需根据靶细胞的大小选择中性粒细胞用孔径的聚碳酸膜,趋化时间为分钟单核细胞用孔径的聚碳酸膜，趋化时间为分钟粘附力弱的淋巴细胞则用下表面复以明胶或纤粘素的或聚碳酸膜，以免淋巴细胞穿过膜后落入下室，趋化时间为分钟。趋化因子浓度的确定由于趋化因子的特异活性非常高，些趋化因子在较高浓度时促进细胞趋化的作用反而降低，所以待测样品常需连续稀释倍或倍系列稀释以获得最适剂量的趋化结果。每次实验都需设好对照，因为不同来源或不同活力靶细胞的趋化能力差异很大。趋化因子活性的表达方式有三种，其中最常用的是用趋化指数表示，趋化指数,是指细胞迁移到待测样品液的数目和迁移到对照液的数目的比值。试剂和材料纯化的注射器，离心管，移液器。
2、每孔，国产板每孔，每个样品个复孔。为防止样品过度蒸发，整个加样过程应不超过分钟。将适当孔径的滤膜取出，在滤膜的角剪去的小角，缺角对着标记，分别用镊子夹住滤膜两端，水平下降，中间部位最先接触小室液面，将膜平放在加完样的底层板上。铺上硅胶垫，装上上层板，硅胶垫的缺角及上层板的标记位于右下方。装上螺丝，拧紧装置。四加入细胞将已稀释好的细胞悬液加入上层小孔中，每孔，加样时微量加样器贴着小孔壁，末端恰好位于滤膜稍上方垂直快速加样，避免孔底滞留气泡，注意这步加样过程中定不要有气泡形成。检查上层液体中是否有气泡，个比较简便的方法是观察小孔凸的反射光，如果小孔上方有个异常大的凸液面，通常表明有滞留气泡。解决的办法是用将孔中的液体吸干净，重新加样。五孵育将趋化小室放入孵箱中，孵育分钟。六取出滤膜，清洗，染色。
3、增殖分化，抑制细胞凋亡，提示在机体的生理和病理作用中具有重要意义，的成功克隆表明可能代表个新的基因超家族，对这个家族基因进行深入研究将具有重要的理论意义和潜在的应用价值。此外，我们建立的克隆新细胞因子的技术路线可能对其它因子的发现具有借鉴意义。参考文献韩文玲，李莹，张颖妹，马大龙等。利用抑制性减数杂交技术研究抑制表达的新基因。中华微生物学和免疫学杂志,韩文玲,芮珉,陈英玉，等。趋化素样因子对骨髓细胞增殖活性的研究中国医学科学院学报，夏东岚陈英玉韩文玲等。人趋化素样因子对细胞的促增殖和抗凋亡作用研究。中华微生物学和免疫学杂志，待印刷。韩文玲趋化因子生物活性的测定基本原理趋化因子的趋化作用没有种属特异性，趋化因子的靶细胞主要有中性粒细胞单核细胞淋巴细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞树突状细胞和成纤维。
4、，头糖原生理盐水解剖器械剪刀，镊子，止血钳趋化小室，趋化滤膜，细胞刮子计数板，显微镜，玻璃片红细胞裂解液将加至中，调至甲醇，染色液，使用液豚鼠中性粒细胞实验程序豚鼠嗜中性粒细胞的制备取成年豚鼠只，腹腔注射含糖原的生理盐水，小时后，用缓冲液冲洗腹腔，收集腹腔液弃上清。轻轻弹起沉淀，用的预温的红细胞溶解液，充分吹散，作用分钟，立即加入,吹打均匀弃上清，再加入,离洗两次。得到豚鼠嗜中性粒细胞，纯度可达以上。将纯化后的嗜中性粒细胞溶在中，细胞计数，调整细胞浓度为，备用。二样品的准备将纯化的用分别稀释为。同时用稀释的作阴性对照。样品加入小室前最好放入室温平衡或培养箱中预温，以免加样时出气泡。三准备底层小室，加样将趋化小室底层板放水平台上，标记位于右下方。将稀释好后预温的样品加入孔中，使液面微微隆起，。
5、定位于第对染色体，包括，等。家族只有个成员，基因定位于号染色体。家族也只有个成员，基因定位于第对染色体。来源正常细胞来源细胞因子主要由活化的免疫细胞合成和分泌。免疫细胞遭遇外来抗原或病原体后,因受到刺激而被活化,从而产生多种细胞因子,激发体内系列生物应答过程,促进免疫功能的行使,最终达到清除异物维持自身稳定的目的。淋巴细胞是细胞因子的最重要的产生细胞,特别是辅助性细胞,它的许多重要功能是通过分泌细胞因子来完成的。近年来发现，根据产生的种类不同,可将细胞分为和两种亚类细胞,前者主要分泌干扰素肿瘤坏死因子,后者主要分泌等。和干扰素可诱导细胞的产生,和可诱导细胞的产生。进步的研究发现,细胞主要介导细胞免疫功能,细胞主要介导体液免疫功能,两者间有相互抑制作用和此消彼长的关系。有关和的调节关系的发现。
6、,分化和行使功能,这些因子统称为细胞因子。细胞因子除存在于免疫系统外，在机体的各个系统也广泛存在,发挥极为重要的生理调节作用，些情况下可产生病理作用。与免疫有关的细胞因子主要包括淋巴细胞产生的淋巴因子单核巨噬细胞产生的单核因子白细胞介素,干扰素,集落刺激因子,肿瘤坏死因子,趋化因子转化生长因子,等,它们在免疫系统中起着非常重要的调控作用,在异常情况下也会导致免疫病理反应。研究历史年,等人发现病毒感染的细胞产生种因子,可抵抗病毒的感染,干扰病毒的复制,因而命名为干扰素，这是发现第个细胞因子。但以后很长时间内，对细胞因子的了解只限于发现些细胞培养上清液具有各种生物学活性,例如,分裂素或抗原刺激的淋巴细胞培养上清含有细胞生长因子,细胞生长因子,细胞替代因子活性脂多糖刺激的单核巨噬细胞可产生。
7、细胞株体外培养,从培养上清液中获取微量的细胞因子制剂,不但纯度很难保证,而且价格昂贵。年代以来,随着基因工程技术的发展,细胞因子的研究也进入基因水平。现在可以利用大肠杆菌酵母菌昆虫细胞哺乳动物细胞等工程细胞大规模生产重组的细胞因子纯品,其产量纯度成本等指标均优于天然来源的细胞因子。这不仅大大促进了细胞因子的结构与功能研究,也促进了细胞因子作为生物应答调节剂治疗各种疾病的应用研究,为肿瘤感染造血障碍等疑难病症的治疗带来了新的希望。结构绝大部分细胞因子为小分子的分泌型多肽,少数细胞因子能以膜结合的形式存在于细胞表面,如等。从肽链结构来看,多数细胞因子为单链结构,少部分细胞因子为同源双体结构,如等此外,等的结构比较特殊,为异源双体结构,两条肽链分别由不同的基因编码。从化学结构来看,绝大部分细胞因。
8、组中趋化细胞数的比值即为趋化指数，趋化指数大于有意义。七技术要点分离纯化嗜中性粒细胞时，要仔细认真，保证细胞活力。每次做实验均要设阴性对照，用真核细胞转染上清做趋化实验时，要设空载体转染上清做阴性对照。向趋化小室下孔中加样品时，上样量要适中，使之能够形成稍微隆起的液面，既能防止气泡形成，又可以防止样品发生交叉污染。每个样品要做三个复孔。放膜时，要对准位置，否则，过多调整位置时易发生样品间的交叉污染。洗膜时，注意不要把细胞面与非细胞面弄反。不同趋化因子的趋化谱不同，用不同细胞做趋化反应时，应选用不同孔径的滤膜不同的细胞浓度和不同的趋化时间。做实验前要把小室处理干净。张颖妹细胞因子总论导言在免疫系统中，各种免疫细胞均能合成和分泌小分子的多肽类因子,它们调节机体的免疫调节功能,参与免疫细胞的增殖。
9、为免疫调节理论提供了新的观点。除淋巴细胞外,单核巨噬细胞也是些细胞因子的重要来源,包括干扰素肿瘤坏死因子等,单核巨噬细胞通过分泌这些因子对机体免疫系统产生调节作用。些非免疫细胞,如内皮细胞上皮细胞纤维母细胞神经细胞亦可产生些细胞因子。这表明体内有多系统在通过分泌细胞因子来调控免疫系统。肿瘤细胞来源体外研究发现,些肿瘤细胞可持续性产生些细胞因子,例如,细胞株在体外分泌较大量的人,骨髓瘤细胞在体内体外均可分泌较大量的,由于同时为骨髓瘤细胞的生长因子,因而可产生自分泌的现象,造成骨髓瘤细胞的失控生长,是多发性骨髓瘤的重要发病机理之。此外,些白血病细胞亦可分泌,产生自分泌现象,对白血病发病起促进作用。重组细胞因子为研究细胞因子的结构与功能,必须要有要大量的细胞因子纯品。过去,只能通过免疫细胞或肿瘤。
10、细胞等。以为例是典型的家族趋化因子，对嗜中性粒细胞和淋巴细胞有趋化作用。由于它的趋化作用没有种属特异性，因此，可以用豚鼠嗜中性粒细胞代替人嗜中性粒细胞对其进行活性检测。趋化因子诱导的细胞移动方式有两类化学增活现象，指增强细胞的随机运动，琼脂糖小滴化学动力实验是检测这种活性的比较简易，快速，重复性好的方法。趋化性，指诱导细胞向趋化因子化学浓度高的方向移动。琼脂糖中的趋化实验和微孔小室中的趋化实验则是常用的测定细胞因子趋化活性的方法。微孔小室中的趋化实验微孔小室中的趋化实验是根据靶细胞单核巨噬细胞，中性粒细胞或淋巴细胞等能够趋化性主动迁移，穿过定孔径的滤膜而设计的。滤膜将小室分隔成上下两部分。靶细胞在上面，趋化因子在下面，趋化因子通过滤膜形成梯度，细胞则沿着梯度穿过膜孔，黏附在膜的下面，染色并。
11、子为糖蛋白,含有不同程度的糖基侧链,但体内外生物活性研究证明,多数细胞因子的糖基不影响发挥其功能,因而,大肠杆菌表达的重组细胞因子可取代天然来源的细胞因子用于结构和功能研究及临床治疗应用。实验表明,细胞因子的糖基与它们的体内半衰期有较密切的关系。从级结构来看,不同的细胞因子在氨基酸序列上有很大的差异,但它们的基因调控序列却有许多共同之处,这表明它们的基因表达受些共同的因素调节。从染色体定位来看,些细胞因子的基因是连锁的,如等都位于第对染色体长臂上,它们的缺失与些白血病及造血功能不良有关。细胞因子需与细胞表面的细胞因子受体相结合后才能发挥效应。近年来对细胞因子受体的研究越来越受到重视,大多数细胞因子受体基因已克隆化成功,对其结构和信号传递也已有初步的了解。细胞因子受体与其它膜表面受体促进细胞。
12、取出滤膜，拧下螺帽，将整个小室倒置，托着上层板的四角，将小室慢慢地水平放在纸巾上，卸下下层板。清洗，迁移细胞现位于滤膜朝上的面，此面称为细胞面，另面为非细胞面，用镊子夹起滤膜的角，然后用大塑料夹夹住滤膜这端距边缘的宽度，拎起滤膜，迅速用塑料夹夹住滤膜另端。在盛有缓冲液的平皿中沾湿非细胞面，注意细胞面不要接触到。在细胞刮上刮去非细胞面上的细胞，靠近大夹子处的滤膜先接触细胞刮，在与细胞刮成度角方向轻轻上拉，该过程重复两次。固定，小心将滤膜浸入甲醇中，室温分钟，将滤膜取出，用塑料夹夹住，自然干燥。染色，将固定后的滤膜在染色液中染色分钟，自来水冲洗，置于玻片上，显微镜下观察。计数，在高倍镜下，每孔随机选取个视野，累积细胞数，算出三个复孔的平均值。作为该稀释度的迁移细胞数。组趋化的细胞数与缓冲液对照。
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毕业论文：趋化因子研究进展