毕业论文：本科胆固醇对磷脂脂质体膜性质的影响 ㊣ 精品文档 值得下载

献致谢胆固醇对磷脂脂质体膜性质的影响第章绪论引言脂质体是种由脂质构成的双分子封闭小囊，具有类似生物膜活性，可以包入各种各样的功能成分。

脂质体在人体内可以起到将功能成分缓慢释放的作用，拉长功能成分在人体内的停留时间，使功能成分得到充分完全的利用，同时降低毒副作用。

但由于脂质体本身易被氧化变质，本身不够稳定。

近年来，学者们发现在脂质体溶液中加入定量的胆固醇，可以明显提高脂质体的抗氧化能力，同时是脂质体的分子结构更加趋向于稳定，延长脂质体的保质期，但添加何种比率的胆固醇才能使脂质体获得最稳定的分子结构，最大效率的延长保质期，目前仍没有定论，因此本文将从这方面进行进步的研究。

磷脂脂质体作为较常见的脂质体之，具有原料易于获取，脂质体制备操作简单等特点，因此本实验采用磷脂脂质体为主要的研究对象。

本文主要的研究目的制备以胆固醇为调节剂的卵磷脂脂质体测定不同贮藏天数的脂质体的变化，以确定胆固醇的添加量对于脂质体氧化稳定性的影响，使用纳米粒径仪测定脂质体的粒径采用差示扫描热量仪测定脂质体的相变温度利用芘为荧光探针法进行脂质体的微极性研究测定以为荧光探针的不同比例胆固醇的脂质体的荧光光谱，从而研究脂质体的膜的流动性。

卵磷脂卵磷脂为两性化合物，磷脂的极性电荷饱和状态会影响胶束的增溶作用。

囊泡是种球形或椭圆形的单室或多室封闭双层结构的有序组织聚集体。

年英国学者等发现磷脂分散在水中可以形成多层囊泡，并且证明每层囊泡均为双分子层脂质膜且被水相隔开。

由天然磷脂分子定向排列形成的双层膜包裹的闭合结构的囊泡，也称为脂质体。

常态下，纯净的卵磷脂为淡黄色的透明或半透明的黏稠状物质，具有清淡柔和的香味，其等电点值是，熔点。

卵磷脂在水中通常呈现胶体状态。

不同的卵磷脂在有机溶剂中溶解度不同卵磷脂在氯仿中的溶解性极强，在乙醚乙醇等有机溶剂中也能很好的溶解，但不溶于丙酮，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂，其结构见图图磷脂结构图江南大学学士学位论文脂质体及脂质体的制备脂质体是种定向药物载体，属于靶向给药系统的种新剂型。

它可以将药物粉末或溶液包埋在直径为纳米级的微粒中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝脾肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

按结构和粒径，脂质体可分为单室脂质体多室脂质体含有表面活性剂的脂质体。

按性能，脂质体可分为般脂质体包括上述单室脂质体多室脂质体和多相脂质体等特殊性能脂质体热敏脂质体敏感脂质体超声波敏感脂质体光敏脂质体和磁性脂质体等。

按照荷电性，脂质体可分为中性脂质体负电性脂质体正电性脂质体。

如图图脂质体结构示意图脂质体的制备大致可以分为手摇法超声法冻干再水化法逆向蒸发法表面活性剂去除法高压均质法。

本次实验采用的是手摇法及超声法。

手摇法磷脂及定比例的胆固醇溶于氯仿甲醇溶液中，置于圆底烧瓶中用旋转蒸发仪蒸干有机溶剂后，倒入水相如磷酸缓冲液，通过适当的搅拌震荡后形成脂质体溶液。

超声法经过手摇法制得的脂质体溶液放入超声波发生器中进行超声，经过这种方法的得到的脂质体溶液会有更小的粒径通常能小于。

冻干再水化法经手摇法制得的脂质体通过冷冻干燥机升华所有水分，加入水相，平衡分散体系，即得此法所得脂质体。

逆向蒸发法用手摇法制得的脂质体重新溶于有机溶剂中，加入包埋物质，超声后，减压蒸发得水性悬浮液，利用离心色谱透析等方法出去未包埋的成分后，即得此法所制脂质体。

胆固醇对磷脂脂质体膜性质的影响表面活性剂去除法经手摇法制得的脂质体溶液中加入浓的表面活性剂，蒸干有机溶剂，再通过透析等途径出去表面活性剂后即得此法所制的脂质体溶液。

高压均质法手摇法制得的脂质体溶液通过高压均质机后即得此法所制脂质体。

胆固醇胆固醇又称胆甾醇。

种环戊烷多氢菲的衍生物。

早在世纪人们已从胆石中发现了胆固醇，年化学家本歇尔将这种具脂类性质的物质命名为胆固醇。

胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾脾皮肤肝和胆汁中含量也高。

其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚氯仿等溶剂。

胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素以及甾体激素的原料。

如图所示。

胆固醇是从脂肪不能皂化的部分分离而得到的种二级醇，分子式为，分子量为，其中由个刚性的环状结构个短的烷基链分支和个羟基构成。

胆固醇中的绝大部分都是疏水结构，但有个极性的羟基存在，所以胆固醇也是个既亲水有亲油的分子。

最近的研究表明，在卵磷脂脂质体中添加定量的胆固醇中，卵磷脂脂质体会出现学性质不稳定，易于氧化水解，氧化产物，破坏脂质体膜的完整性，影响脂质体的包封率，也会增加毒性。

因此有时在制备脂质体的过程中除了添加胆固醇来降低其被氧化速率外，还经常添加其他的抗氧化剂。

因此找出适宜的胆固醇添加量，不仅能降低脂质体的被氧化速率，还能减少额外的抗氧化剂的使用。

这样，不仅能够降低成本，还能够降低产品因抗氧化剂而带来的毒性。

我们可以看出没有添加过胆固醇的脂质体溶液经过天后被氧化程度较大，添加了浓度胆固醇的脂质体溶液的被氧化程度明显降低。

进步增加胆固醇的添加量其被氧化程度并没有明显的降低。

胆固醇不是抗氧化剂却能起到抗氧化的作用，推测是由于胆固醇插入双分子层中后，脂质体分子的结构更为紧密，混合膜的过剩面积和动力学结果表明，胆固醇和卵磷脂是相互吸引的，即胆固醇的加入使卵磷脂囊泡更不容易被表面活性剂破坏。

由以上分析我们看出，浓度的胆固醇就能够很好的达到防止脂质体遭到氧化变质的作用。

胆固醇添加量对脂质体膜微极性的影响芘荧光探针是种研究介质极性的荧光探针，其荧光发射谱图中荧光发射第谱带与第三谱带的荧光强度之比与介质的极性有较好的相关性，被称为极性标尺，对微环境极性特别敏感，因此可以用来测量脂质体膜的微极性。

芘的荧光强度值越大说明脂质体膜的微极性越大。

由于芘元素非极性大，其主要分布在磷脂分子的非极性尾中，即双层膜之间。

值反映芘周围环境的变化，比值越大，微极性越强，探针所处的环境非极性越弱比值越小则微极性越弱，探针所处的环境非极性越强。

不同胆固醇浓度脂质体的测量结果如表所示。

表不同胆固醇浓度的磷脂脂质体的荧光强度摩尔百分比江南大学学士学位论文从数据上可以看出，随着胆固醇的浓度的上升，脂质体溶液的在不断的下降，表明脂质体溶液的微极性在不断地下降。

这是由于胆固醇的羟基端与磷脂的极性头基相结合，降低了脂质体原有的极性，造成了整个体系极性的降低。

极性较大的脂质体能够较快的被人体吸收，而极性较小的脂质体通常能够携带药物达到人体的代谢末端。

因此，我们可以根据药物的具体情况来选择合适极性的脂质体作为载体。

胆固醇添加量对脂质体膜流动性的影响作为种非极性荧光探针，位于脂质体脂双层膜相中，当它与膜结合后会产生荧光，我们可以通过荧光的强弱来判断膜流动性的变化，荧光强度越大，则流动性和通透越弱，反之则膜流动性和通透性越强。

我们对不同胆固醇浓度脂质体以为探针测量其偏振度，其结果如表所示。

表值随胆固醇浓度的变化浓度从以上的数据我们可以看出随着胆固醇浓度的上升，荧光偏振度值在不断的减小，说明胆固醇的加入会增加脂质体膜的流动性以及通透性。

脂质体作为种有效成分的载体，其流动性以及通透性会影响其包载的有效成分的释放速度。

流动性及通透性过强会使有效成分过快的释放出来，不能达到良好的靶向定位作用。

本科生毕业论文设计题目第章结论与展望结论本次研究采用旋转蒸馏法制备了磷脂脂质体，研究了胆固醇的加入对于磷脂脂质体膜性质的影响，从而得出胆固醇最适宜的添加量，为实验小组下步进行的用植物固醇替代胆固醇的研究提供参考。

实验结果表明利用纳米粒度仪测得脂质体的粒径先随着胆固醇的浓度增加而增大，之后由于胆固醇浓度过高，破坏了脂质体稳定的双分子层结构，造成脂质体结构的破裂，其粒径急剧减小。

使用硫代巴比妥酸法测试不同胆固醇浓度的脂质体的抗氧化能力，发现添加了胆固醇的脂质体，抗氧化能力有着显著的提高，但胆固醇的浓度打到之后继续添加并不能继续增加脂质体的抗氧化能力。

根据差示扫描热量仪所得出的结果，脂质体的相变温度在胆固醇浓度之前，随着胆固醇浓度的升高而降低，之后随着胆固醇浓度的升高而升高，测得的相变温度皆在摄氏度以上，最高不超过摄氏度。

采用芘作为荧光探针测量脂质体的微极性，发现随着添加的胆固醇增多，体系的微极性有所下降。

采用作为荧光探针测量脂质体的膜流动性，发现随着添加的胆固醇的增多，磷脂脂质体膜的流动性有所增强。

最后，得出的结论是胆固醇的最适添加量为。

不足之处及未来展望本次研究在制备脂质体的过程中多采用甲醇三氯甲烷等有机溶剂，易造成危害，如何改进脂质体的制备工艺，有待进步研发。

同时，制备脂质体过程中采用的胆固醇易造成血管粥样硬化，实验组的下个研究目标就是如何采用植物固醇来替代胆固醇，在此祝愿实验组下阶段实验顺利。

附录参考文献陈建海药用高分子材料与现代药剂北京科学出版社，蓝琴胆固醇和蛋白质对卵磷脂囊泡稳定性的影响研究厦门厦门大学邓意辉，徐辉主译脂质体化学工业出版社武博达影响脂质体稳定性的主要因素及对策养殖与饲料，史向阳，孙曹民，吴世康胶原壳聚糖包覆的小单层脂质体的体外稳定性评价生物物理学报纪俊敏，谢文磊脂质体作为药物载体的研究进展郑州工程学院学报吴志荣，徐莲荚，蔡贞贞等双参脂质体口服液的研制中成药，邱德凯，沈敏，曾民德等冬虫夏草多糖脂质体治疗慢性乙型肝炎的研究中华消化杂志丁玉玲，马淑贤人参皂苷脂质体的研制中国药学杂志丁宝林人生皂苷脂质体的研制中国药学杂志邓英杰，李经才黄芪多糖脂质体的制备和稳定性研究沈阳药科大学学报顾学裘，顾茂瑜人生多糖多相脂质体对免疫功能的影响及抗癌作用沈阳医科大学学报储茂星，古宏晨，刘国杰等喷雾干燥法制备丹参酮前体脂质体的研究药学学报沈央，方晓玲三七总皂苷脂质体的制备及其生理适应性的初步考察中成药吴时敏，吴谋成植物甾醇进展与趋向植物甾醇的应用基础和开发研究中国油附录脂姚专植物甾醇的开发现状和发展趋势粮食与食品工业附录致谢本论文是在导师曹栋教授的悉心指导下完成的，从论文的选题实验方案的设计实验过程直至论文的撰写，都凝聚着导师的智慧和心血。

导师严谨的治学态度开阔