综述离子排斥色谱法的常见问题（生物化学论文） ㊣ 精品文档 值得下载

斥色谱方法常在低流速下使用。

尽管低流速会增加分析的时间，但这将有助于提高色谱柱的柱效。

若有特殊研究需要，低的操作流速还允许将两根色谱柱串联起来，用于解决复杂样品中的目标组分的分析。

在常规分析中，流速的设定要充分考虑填料交联度色谱柱温度和色谱柱尺寸高效液相色谱仪保养与常见故障排除现代检验医学杂志，居桂平，王仁杰岛津高效液相色谱仪示差检测器故障检修医疗卫生装备，徐晓玲，楼雪芳高效液相色谱仪使用中的常见故障及维护方法山东化工，霍芳，张志美，王建军，等高效液相色谱示差折光检测技术研究进展家畜生态学报，谭力，罗楠，刘放南，等非衍生化气相色谱法测定人血清游离脂肪酸谱肠外与肠内营养，刘瑶，张娜，史社坡，等亲水作用色谱质谱联用法同时测定参附注射液中的种有机酸中国中药杂志，贾鹏禹，孙蕊，李良玉，周行，韩毅强，冯乃杰生物样品中有机酸的离子排斥色谱测定方法进展黑龙江农垦大学学报，基金黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划项目。

般建议流动相为稀酸溶液如或异园艺学报，王洪丽，李成云气相色谱法测定苜蓿青贮料中的有机酸饲料工业，刘娟，贾益群，詹美榕，等法在检测生物样品中短链脂肪酸的应用解放军药学学报，钱兵，章燕，李莎，等反相高效液相色谱法测定丙酸发酵液中的有机酸分析化学，牟豪杰，孟庆翔，任丽萍，等离子色谱法同时测定牛瘤胃液中乳酸和挥发性脂肪酸含量理化检验化学分册，赵景婵，郭治安，常建华，等有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究色谱，贾鹏禹，孙蕊，李井春，等离子排斥色谱法测定瘤胃液中乳酸和挥发性脂肪酸的含量黑龙江畜牧兽医，上林晓婕，魏巍，何志刚，等离子排斥色谱法测定黄酒中的种有机酸色谱，莫润宏，王富民，倪张林，等离子排斥色谱双检测器法同时测定果蔬中的糖有机酸和维生综述离子排斥色谱法的常见问题生物化学论文在柱内传质过程中出现迟滞和涡流，导致同组分色谱峰发生裂分影响组分定量。

主要解决办法是清除堵在色谱柱入口端的脏污，般需要将色谱柱反接进行冲洗，在色谱柱反接冲洗时，色谱柱出口不接检测器，防止发生次污染。

冲洗流速般采用，冲洗以上。

总结及展望综述了离子排斥色谱在生物样品有机酸检测方面的研究进展。

离子排斥色谱方法样品前处理简便，重现性好，所用试剂安全且价格低廉，所用仪器配臵简单，采用万元仪器配臵即可满足多数有机酸化合物的检测，方法应用广泛，是种新颖实用可靠的检测手段。

尽管上述方法体现出了较好的优越性，但不难发现，该方法的应用还仅集中在在常量或微量有机酸分析方面，由于受系统自身灵敏度限制，针对样品中痕量或亚微量有机酸的检测，或针对微小或珍贵。

在些特殊情况下，流动相中添加有机溶剂如乙腈等能够改善化合物的分离度，但流动相中有机改性剂的含量不应高于，防止有机相渗入色谱填料使其过分溶胀从而改变填料的性能，有机改性剂不推荐使用甲醇氢呋喃等对聚合物产生损害的溶剂。

色谱柱温度的优化离子排斥色谱运行温度较常见的反相高效液相色谱模式运行温度高，且温度对离子排斥色谱柱的组分保留时间和分离效率有显著影响，。

对大多数应用而言，在相同的化合物填料类型和流动相条件下，随着柱温的升高保留时间将会缩短，柱效将会提高，同时柱压会随之降低。

升高温度可减少固定相中慢传质过程所引起的谱带展宽效应，从而提高分离的效率。

此外升高温度还能减小流动相的粘度，使溶质分子更容易地渗入树脂内部，从而获得高的分辨率，但是在面，示差折光检测器受固有因素影响较紫外可见检测器还存在不足，因此在方法建立时要根据定量需求选择不同的仪器配臵，或根据实验室已有的条件选择不同的定量方法，般紫外检测器选择外标法，示差折光检测器选择内标法或外标法。

此外，由于紫外检测器较示差折光检测器在些有机酸组分上的灵敏度高，针对微量组分检测时，宜选用紫外检测器。

流动相流速的优化由于采用合成聚合物的离子排斥色谱填料交联度较低，类似软凝胶，在高流速下会产生高柱压，因此离子排斥色谱方法常在低流速下使用。

尽管低流速会增加分析的时间，但这将有助于提高色谱柱的柱效。

若有特殊研究需要，低的操作流速还允许将两根色谱柱串联起来，用于解决复杂样品中的目标组分的分析。

在常规分析中，流速的设定要充分考虑填料交联离子排斥色谱法的组成要素色谱柱在分析方法建立前，色谱柱的选择至关重要。

目前市售的离子排斥色谱柱有多种品牌可供选择，见表，与反相高效液相的硅胶基质色谱柱不同，离子排斥色谱柱尺寸多为大尺寸色谱柱，这与采用聚合物为色谱填料有关。

由于采用了相似的色谱柱填料类型，各品牌色谱柱对有机酸化合物的分离具有相似的分离选择性，化合物出峰顺序大致相同略同，所使用的流动相类型略有不同，此外相同化合物的保留时间也存在差异。

在选定品牌后，填料粒径和交联度是两个重要的选择参数，要结合样品类型和目标化合物的性质进行选择，般若同时分离多个目标化合物时，宜选择粒径小的填料，可以带来更高的分离柱效，对大多数化合物实现基线分离。

若化合物中含有大分子化合物，宜选择交联度低的填料，作为分离介质色谱填料，键合相端裸露的磺酸氢质子是产生分离选择性的主要官能结构。

离子排斥色谱的分离机制广泛被认为是排斥理论，此外还可能包含空间排斥吸附和配位体交换等机理，多种作用模式使分离介质具备良好的有机酸分离能力。

由于分离介质表面存在大量质子，在排斥过程中，分离介质与化合物间被假定存在层膜，强酸电解质向填料渗透时被膜排斥，而弱酸电解质可穿透膜进入填料，因此产生了色谱保留。

在色谱分离过程中，元羧酸的分离主要受排斥和吸附作用，元多元羧酸的分离同时还受到空间排斥作用，上述作用使得不同性质的小分子有机酸和大分子有机酸得到了良好的分离。

相比反相液相色谱而言，上述离子排斥色谱的分离机制充离子排斥色谱法的方法建立及优化色谱柱安装与仪器的启动由于离子排斥色谱柱所用聚合物基质相比硅胶基质刚性较差，可承受的色谱柱压较低，因此色谱仪器的启动要遵照起步低，进阶缓的原则。

将色谱柱接入色谱仪器系统前，首先旋去两端的堵头，按色谱柱标记方向与流动相流动的方向保持致将色谱柱接入管线。

般新的离子排斥色谱柱采用稀酸溶液进行封装，在长期储存和运输过程中，柱填料两端可能会干涸，应参照说明书使用倍柱体积的保存溶剂进行冲洗以活化色谱柱。

系统启动时，先以流速启动恒流泵，开启柱温箱并设臵到工作温度，待色谱柱温度升高并稳定后，以为步长，以为时间间隔缓慢升高流速至所需色谱条件。

需要注意的是，色谱柱安装前定要用方法所用的流动相充分臵换作为分离介质色谱填料，键合相端裸露的磺酸氢质子是产生分离选择性的主要官能结构。

离子排斥色谱的分离机制广泛被认为是排斥理论，此外还可能包含空间排斥吸附和配位体交换等机理，多种作用模式使分离介质具备良好的有机酸分离能力。

由于分离介质表面存在大量质子，在排斥过程中，分离介质与化合物间被假定存在层膜，强酸电解质向填料渗透时被膜排斥，而弱酸电解质可穿透膜进入填料，因此产生了色谱保留。

在色谱分离过程中，元羧酸的分离主要受排斥和吸附作用，元多元羧酸的分离同时还受到空间排斥作用，上述作用使得不同性质的小分子有机酸和大分子有机酸得到了良好的分离。

相比反相液相色谱而言，上述离子排斥色谱的分离机制充分体差折光检测器在些有机酸组分上的灵敏度高，针对微量组分检测时，宜选用紫外检测器。

有机酸的检测方法有机酸的检测方法主要有气相色谱法反相高效液相色谱法和离子色谱法等。

气相色谱法主要用于具有挥发性，热稳定性的有机酸化合物的检测，如短链脂肪酸的分析，对挥发性差的化合物不能直接测定，般需要对其进行衍生化处理，此外在样品前处理时要避免生物样品中水对色谱柱使用寿命的影响，因此在定程度上限制了气相色谱方法的应用范围。

反相高效液相色谱结合紫外可见检测器可用于多数有机酸化合物的分析，但对多目标化合物分离选择性的色谱优化工作相对复杂，需要精确调控流动相组成，方法可移植性不强，。

此外在以为主的反相高效液相色谱方法应用中，弱保留目标组分常受到样品基体中非目标综述离子排斥色谱法的常见问题生物化学论文分体现了其对强弱电解质组分的分离选择能力，在实际应用中，样品基体中的强电解质干扰物在离子排斥色谱柱上被优先洗脱，同时对弱保留目标组分几乎不产生干扰，加强了对目标组分的定性定量能力，这种特殊的分离选择性在反相色谱柱上是很难实现的。

离子排斥色谱的有机酸检测适用范围较广，几乎涵盖了生物样品中常见的有机酸化合物，常见有机酸化合物在美国公司生产的型色谱柱上的保留情况见表。

不同型号色谱柱对多种有机酸化合物均具有较好的分离选择性，这与其独特的分离机制密切相关，此外色谱条件只采用浓度极低的稀酸溶液作为等度洗脱的流动相，因此采用离子排斥色谱进行有机酸的检测具有经济绿色环保普适简便等特点。

综述离子排斥色谱法的常见问题生物化学论文目标组分的共流出干扰，使得在弱保留区目标组分的色谱峰信号失常，导致目标组分无法准确定量。

离子色谱是分离有机酸的良好方法，适用于生物样品中有机酸的分析，该方法设备依赖性强，方法不易普及。

近年来逐渐得到广泛应用的离子排斥色谱是种新颖经济适用且分离选择性好的有机酸检测方法，其独特的分离机制使得方法在简单的仪器配臵上即可实现多个目标化合物的高效分离，非常适合生物样品中有机酸化合物的检测。

课题组在有机酸的离子排斥色谱检测方面进行了多年的技术应用，针对反刍动物瘤胃液实验动物粪便微生物发酵液青贮饲料及果汁等生物样品所建立的检测方法取得了良好的应用效果，。

离子排斥色谱的分离机制离子排斥色谱般采用表面键合磺酸基团的不同交联度聚苯乙烯乙烯基苯聚合物微