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体。
月将重组载体转入解脂耶氏酵母,构建抗菌肽基因酵母表达系统。
月筛选高效表达抗菌肽酵母系统。
月酵母发酵条件优化。
年月采用发酵法生产抗菌肽。
月抗菌肽分离和纯化。
月抗菌肽抗菌活性和抗菌谱测定。
年月含抗菌肽饲料配制。
月动物实验。
月课题总结鉴定。
项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费使用预算见附表。
申请经费总额万元。
其中仪器设备购置费万元材料样品费万元试验费检测费万元资料调研费万元鉴定费万元。
三项目实施支撑条件项目技术来源课题申请人在法国国家农业研究中心分子遗传学实验室工作期间,参加了欧盟资助有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达研究课题,掌握了抗菌肽研究相关技术,为本课题顺利完成奠定了技术基础。
项目实验检测条件申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验室,具有全自动测序仪型型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱仪,超纯水系统各种规格电泳仪杂交仪紫外分光光度计设施先进细菌培养方面正在不断研究和开发新型抗菌药物。
近年来出现抗菌肽就是类具有巨大发展潜力新型抗菌药物,它是宿主产生类抵抗外界病原体感染小分子阳离子肽,广泛存在于昆虫植物动物及人体内,具有非特异性抗细菌真菌病毒等病原体作用,还有抗肿瘤细胞作用,因此又称为肽抗生素。
抗菌肽抗菌谱广,对多重耐药菌肿瘤细胞艾滋病毒有杀伤作用,甚至还可能有抗重症急性呼吸综合征,病毒作用。
因此有着广阔开发应用前景,是目前国际学术研究活跃领域之。
抗菌肽抗菌机制与传统抗生素不同,传统抗生素是与病原体特定部位受体结合从而使病原体正常结构遭到破坏或使些生物合成受阻,以达到抑菌或杀菌作用,当抗生素作用靶位点发生改变时,抗生素就会失去其抗菌作用,病原微生物往往通过基因突变改变抗生素靶位点而产生对抗生素有抗性耐药菌株抗菌肽对病原体作用则完全是物理作用。
由于抗菌肽具有疏水和亲水两亲性特征,通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分子上负电荷形成静电吸附而结合在细胞磷脂膜上,随后抗菌肽分子疏水端插入细菌细胞膜脂质膜中,进而造成细胞膜穿孔,使细胞质外溢而达到杀菌目。
由于抗菌肽与细菌细胞膜结合不需要膜上特定受体,因此不会诱导产生抗药菌株和交叉抗性,有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因技术等领域带来广阔开发应用前景。
鱼类生活在水环境中。
由于环境破坏,自然水体和养殖水体污染日益严重,水体中病源微生物种类和含量在不断增加。
面对复杂生存环境,鱼类在生存过程中需要不断地同大量病原微生物作斗争。
但是,由于鱼类没有或淋巴细胞,体液因子中也没有免疫球蛋白存在,在消灭入侵微生物时,抗菌肽起到了至关重要作用。
因此,鱼类先天免疫系统中极有可能存在高效广谱生物抗菌肽。
我们在前期工作中克隆了高效广谱鱼类抗菌肽基因,本项目拟通过酵母表达获得抗菌肽,并将抗菌肽添加到饲料中,为日益严重鱼类和畜禽病害防治开辟新途径。
项目所处技术领域技术发展现状由于抗菌肽具有独特抗菌机制,广谱杀菌作用,高效抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点,因此有着广阔开发应用前景,是目前国际学术研究活跃领域之。
计算机检索表明,国外科学家作了大量工作,对抗菌肽研究已经取得了许多进展。
法国科学家蒂马克先生于年月创建了公司,目是尽可能得到不同类型抗菌肽分子。
迄今国外科学家已在不同生物中发现了多种抗菌肽,我国在抗菌肽研究方面起步较晚,仅有少量报道。
大量结果显示不同抗菌肽其抗菌活性和抗菌谱存在很大差异,因此继续寻找高效广谱生物抗菌肽,是广大生命科学工作者努力方向。
项目技术先进性,对相关领域技术进步推动作用本项目采用是先进分子生物学研究技术。
用基因克隆技术将我们从鱼肝脏中分离抗菌肽基因与具有高效表达启动子表达载体连接,构建重组分子。
然后用醋酸锂法将重组分子转入解脂耶氏酵母中,筛选高效表达抗菌肽工程菌,以工程菌工业化发酵生产抗菌肽,进而开发出高效广谱新载体连接,构建重组表达载体。
抗菌肽基因酵母表达体系构建及高效表达系统筛选采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母,构建抗菌肽基因酵母表达系统。
采用法和
