1、存备用。在反应管中依次加入无核酸酶水上述溶液的液先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至。液磷酸氢钠水溶液,或或先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附磷酸试剂或材料包括各种市售病毒核酸提取试剂盒,琼脂糖凝胶,缓冲液,溴化乙锭,或核酸染料,焦碳酸乙酯处理的灭菌的双蒸水,分子量标准,或商品化的步法反应试剂。警示电果与试验时间等。附录规范性附录相关试剂的配制琼脂糖凝胶称取琼脂糖,放入电泳缓冲液中,加热融化,温度降至时,加入核酸染料,均匀铺板,厚度为。电泳缓冲液溶液称取,加灭菌双蒸水至,后用氢氧化钠调至。电泳缓冲。
2、胶。取扩增产物加到凝胶孔,加入分子量标准。恒压电泳,将电泳好的凝胶放到凝胶成像系统上观察结果。结果判定阳性对照的扩增产物经电泳检测,在预期大小的条带位置均出现特异性的条带阴性的扩增产物没有预期的目的条分子量标准阳性对照阴性对照。图禽腺病毒型产物电泳图。禽腺病毒型检测方法。室温离心,洗脱,贮存备用。在反应管中依次加入无核酸酶水上述溶液的。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附录规范性附录引物表了上游引物和下游引物的浓度和序列。表上游引物和下游引物的浓度和序列引物名称引物浓度序列上游引物上游引物泳缓冲液溶液称取,加灭菌双蒸水至,后用氢氧化钠调至。。
3、应立即冲洗。病毒核酸提取试剂盒。室温离心,洗脱,贮存备用。在反应管中依次加入无核酸酶水家禽咽喉拭子肛拭子,发病禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒型。术语和定义下列术语和定义适用于本文件。脱氧核糖核酸溴化乙锭聚合酶链式反应脱氧核苷酸。在电泳槽内加入电泳缓冲液,使液面刚刚没过凝胶。取扩增产物加到凝胶孔,加入分子量标准。恒压电泳,将电泳好的凝胶放到凝胶成像系统上观察结果。结果判定阳性对照的扩增产物经电泳检测,在预期大小的条带位置均出现特异性的条带阴性的扩增产物没有预期的目的条分子量标准阳性对照阴性对照。图禽腺病毒型产物电泳图。禽腺病毒型检测方法。室温离心,洗脱,贮。
4、耐腐蚀不漏液缓冲液容量充足。冰箱具有冷藏功能。微量移液器单道可调量程包括。试验报告依次陈述试验对象所使用的标准包括发布或出版年号所使用的方法检测结果转入无菌的的离心管备用,编号。操作步骤的提取用病毒核酸提取试剂盒,按照如下步骤提取待检样品阳性对照及阴性对照样品的。加入蛋白酶于离心管中,在离心管中加入样品,加入,涡旋混合,孵育。禽腺病毒型检测方法。电压,电流,定时。电泳槽耐高温耐腐蚀不漏液缓冲液容量充足。冰箱具有冷藏功能。微量移液器单道可调量程包括商品化的步法反应试剂含有缓冲液酶混合物混合物无酶的水等。引物上游引物与下游。在电泳槽内加入电泳缓冲液,使液面刚刚没过凝。
5、和序列引物名称引物浓度序列上游引物上游引物验数据处理扩增产物的电泳检测制备琼脂糖凝胶板。在电泳槽内加入电泳缓冲液,使液面刚刚没过凝胶。取扩增产物加到凝胶孔,加入分子量标准。恒压电泳,将电泳好的凝胶放到凝胶成像系统上观察结果。结果判定阳性对照的扩增产物经电泳检测,在预期大小的条带位置,高压灭菌,分装到处理过的离心管。缓冲液液磷酸氢钠水溶液先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至。液磷酸氢钠水溶液,或或先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至泳中用到的在操作中应戴手套和口罩。试验中被污染的物品要进行无害化处理在操作中应在通风条件下进行,使用时戴手套和口罩,不小心沾到皮肤。
6、电泳缓冲液,冰乙酸加灭菌双蒸水至。溴化乙锭溶液溴化乙锭,加灭菌双蒸水至。水焦碳酸乙酯,加灭菌双蒸水至,室温放置禽腺病毒型检测方法.。商品化的步法反应试剂含有缓冲液酶混合物混合物无酶的水等。引物上游引物与下游引物见附录中的表。引物浓度为。仪器设备仪温度范围样品基座配置至少包括单个孔。凝胶成像系统检测灵敏度有效像数。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附录规范性附录引物表了上游引物和下游引物的浓度和序列。表上游引物和下游引物的浓度和序列引物名称引物浓度序列上游引物上游引物装有棉拭子的离心管在混合器上充分混合后,用高压灭菌的镊子将拭子中的液体挤出,。
7、相关试剂的配制琼脂糖凝胶称取琼脂糖,放入电泳缓冲液中,加热融化,温度降至时,加入核酸染料,均匀铺板,厚度为。电泳缓冲液溶液称取,加灭菌双蒸水至,后用氢氧化钠调至。电泳缓冲液阴性。产物电泳图见附录中。试验报告依次陈述试验对象所使用的标准包括发布或出版年号所使用的方法检测结果与试验时间等。附录规范性附录相关试剂的配制琼脂糖凝胶称取琼脂糖,放入电泳缓冲液中,加热融化,温度降至时,加入核酸染料,均匀铺板,厚度为。电禽腺病毒型检测方法.。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附录规范性附录引物表了上游引物和下游引物的浓度和序列。表上游引物和下游引物的浓度。
8、胶。取扩增产物加到凝胶孔,加入分子量标准。恒压电泳,将电泳好的凝胶放到凝胶成像系统上观察结果。结果判定阳性对照的扩增产物经电泳检测,在预期大小的条带位置均出现特异性的条带阴性的扩增产物没有预期的目的条分子量标准阳性对照阴性对照。图禽腺病毒型产物电泳图。禽腺病毒型检测方法。室温离心,洗脱,贮存备用。在反应管中依次加入无核酸酶水上述溶液的。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附录规范性附录引物表了上游引物和下游引物的浓度和序列。表上游引物和下游引物的浓度和序列引物名称引物浓度序列上游引物上游引物泳缓冲液溶液称取,加灭菌双蒸水至,后用氢氧化钠调至。。
9、件下离心,取上清液转入无菌的离心管中,编号备用。组织的处理方法将所采集的组织置于洁净灭菌并烘干的搪瓷盘中,称取组织按照质量体积比加入样品保存液进行充分研磨,条件下离心。取上清均出现特异性的条带阴性的扩增产物没有预期的目的条带阴阳性同时成立表明试验有效,否则试验无效。在试验结果成立的前提下,如果样品的产物电泳后在位置出现特异性的条带,则判定为禽腺病毒型核酸检测阳性如果样品的产物电泳后在位置未出现特异性的条带,则判定为禽腺病毒型核酸检测引物见附录中的表。引物浓度为。仪器设备仪温度范围样品基座配置至少包括单个孔。凝胶成像系统检测灵敏度有效像数。样品储运样品采集后放入塑。
10、料袋内密封个采集点的样品放个塑料袋内,于保温箱中加冰,密封内送至实验室。样品的处理棉拭子处理方法将分子量标准阳性对照阴性对照。图禽腺病毒型产物电泳图。禽腺病毒型检测方法。室温离心,洗脱,贮存备用。在反应管中依次加入无核酸酶水上述溶液的附录规范性附录禽腺病毒型产物电泳图说明分子量标准阳性对照阴性对照。图禽腺病毒型产物电泳图。禽腺病毒型检测方法。台式低温高速离心机最高转速容量。电泳仪,高压灭菌,分装到处理过的离心管。缓冲液液磷酸氢钠水溶液先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至。液磷酸氢钠水溶液,或或先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至果与试验时间等。附录规范性附录。
11、使用的方法检测结果上述溶液的上游引物的下游引物,最终至总体积为。经充分混匀后瞬时离心,使液体全部聚集于管底。扩增条件预变性,变性,退火,延伸,循环次延伸。扩增反应结束后立即进行电泳或置于条件下备用。试磷酸试剂或材料包括各种市售病毒核酸提取试剂盒,琼脂糖凝胶,缓冲液,溴化乙锭,或核酸染料,焦碳酸乙酯处理的灭菌的双蒸水,分子量标准,或商品化的步法反应试剂。警示电带阴阳性同时成立表明试验有效,否则试验无效。在试验结果成立的前提下,如果样品的产物电泳后在位置出现特异性的条带,则判定为禽腺病毒型核酸检测阳性如果样品的产物电泳后在位置未出现特异性的条带,则判定为禽腺病毒型核 。
12、酸检测阴性。产物电泳图见附录中。本标准适用于检测禽腺病毒型检测方法.。磷酸盐缓冲液的配制液,液,加氯化钠,最后用蒸馏水稀释至。附录规范性附录引物表了上游引物和下游引物的浓度和序列。表上游引物和下游引物的浓度和序列引物名称引物浓度序列上游引物上游引物上游引物的下游引物,最终至总体积为。经充分混匀后瞬时离心,使液体全部聚集于管底。扩增条件预变性,变性,退火,延伸,循环次延伸。扩增反应结束后立即进行电泳或置于条件下备用。试验数据处理扩增产物的电泳检测制备琼脂糖凝胶板,高压灭菌,分装到处理过的离心管。缓冲液液磷酸氢钠水溶液先用适量蒸馏水溶解,最后用蒸馏水稀释至。液磷酸氢。
参考资料:
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