法对不同样品检测准确率。病原菌环介导等温扩增有进行本项目研究实验条件和实验场地，为本项目完成提供了保障。项目申请人所在江西省生物化学与分子生物学重点实验室实验条件先进，具有型仪，全自动测序仪型高速冷冻离扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法灵敏度分析。第四季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法与常规扩增方法比较分析。年度第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法在食品和临床法。以上述研究结果为基础，建立常见病原菌环介导等温扩增和多重环介导等温扩增快速检测技术。常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法灵敏度分析将常见病原菌目标基因克隆至载体，转化后提取质粒，倍比稀释成含目基因拷贝数为，以其为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法灵敏度。常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法特异性分析分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反应，检测本方法特异性。常见病原菌环介导等温扩增快速检测方法与国际标准方法及常规扩增方法比较分析以两个外引物做常规扩增，并与扩增结果进行比较分析，进步判断技术灵敏度特异性和稳定性。常见病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法在食品检测和临床诊断中应用研究将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同样品检测准确率。病原菌环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒研制根据本项目所建立最佳反应体系和反应产物显示方法，研制开发快速检测病原菌试剂盒包括单病原菌检测试剂盒和多种病原菌同时检测试剂盒。工艺流程引物优化组合反应体系建立灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对照样品收集核酸提取引物设计基因序列分析三项目技术质量指标本项目建立方法对病原菌检测准确率达到。本项目建立方法对病原菌目基因检测灵敏度达到拷贝。本项目建立方法不产生非特异性扩增产物。对病原菌目基因等温扩增过程在分钟内完成，显色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内完成。四项目执行过程中各阶段目标年度第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完善实验条件。第二季度样品采集，病原菌提取。第三季度等温扩增反应体系优开发快速准确低成本检测技术和配套试剂是病原菌检测工作中亟待攻克难题。本项目针对病原菌检测中存在问题，采用高灵敏度高特异性环介导等温扩增技术开发出简便快速经济检测试剂。项目技术先进性，对相关领域技术进步推动作用环介导等温扩增是利用个特殊设计引物和具有链置换活性聚合酶，在恒温条件下特异高效快速地扩增新技术。该技术在内能扩增出靶序列拷贝。技术以其特异性强灵敏度高快速准确和操作简便等优点在核酸科学研究疾病诊断和转基因食品检测等领域得到了日益广泛应用。该技术推广对生物学食品科学及医学领域中检测和诊断技术进步有推动作用。项目目前进展情况课题组开展了大量前期研究工作，已完成了本项目所需科研平台建设任务，开展了嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌环介导等温扩增研究，取得了阶段性研究成果，这些工作为本项目顺利完成奠定了基础。二技术方案论述项目技术关键点和创新点，项目完成时达到技术水平技术关键本项目技术关键之是引物设计。与常规引物不同，环介导等温扩增引物设计难度大，组引物要求有个位点与靶序列完全匹配才能够进行扩增。目前我们已从国际基因组数据库中下载了部分病原菌基因组，并根据基因组特点采用等温扩增软件设计了部分引物，现正通过实验确定这些引物性能。本项目另技术关键是最佳等温扩增体系优化。通过对引物浓度内引物和外引物最佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条件进行优化，能够获得最佳实验条件。创新点既往对病原菌检测般采用细菌分离培养鉴定法，但该方法准确率低，所需时间长，往往延误临床正确诊断和治疗。近年来，人们将技术用于病原菌检测。技术虽然较传统方法灵敏快速，但需要较昂贵仪器设备。更为重要是，方法容易产生非业经技术培训后可生产本产品。项目实施风险分于年在陕西城固氮肥厂建成，小时耗煤量吨。其煤种适应性广，操作温度约为，反应压力为。气化炉是个单段流化床，结构简单，可在流化床内次实现煤破粘脱挥发份气化灰团聚及分在年代末就已开展水煤浆纯氧气化研究，年代初建立日处理吨气化装置。从水煤浆制备纯氧气化灰水处理等试验中取得工艺流程优化，最终工艺条件选择设备材料选择自动控制，软件开发等系列工程数据。本世纪初该院又开发了焦煤水加添加剂混合煤浆气化技术，已成功地应用于油气化装置改造，建有工业化装置，该技术已申请国家专利并获得批准，专利号。为配合水煤浆气化研究试验工作，洛阳材料研究所研究制成了水煤浆气化炉耐火砖，原化工部化工机械研究所开发了二流道三流道烧嘴，重庆热工仪表研究所开发了适于水煤浆气化测温度计等。这系列科研成果得到了化工部科技司国家科委大力支持和技术鉴定，为今后我国水煤浆气化工程应用奠定了基础，也为工程设计提供了基础数裾。气化技术选择目前大型煤气化技术较为先进有水煤浆气化，粉煤加压气化，固定床加压气化。国外大型气化技术比较表项目传统气化压力气化温度单炉最大能力吨煤天气化炉型式热壁式单喷嘴冷壁炉四喷嘴热壁炉进煤方式水煤浆浓度泵送煤粉用氮气输送粒度有效成份较高高净化气中惰性气含量吨甲醇耗煤量干，弛放气氢回收时氧气用量高比炉高较低低工业化装置数多在中国已投产在建工业装置环境影响友好友好有污染治理问题投资含空分较低高比约高较低国产化率高低高项目传统建设周期较短长比炉长半年以上较短气化技术气化技术是荷兰壳牌公司开发种先进气化技术，该技术采用纯氧蒸汽气化，干粉进料，气化温度达，碳转化率，有效气体以上，液态排渣，采用特殊水冷壁气化炉，使用寿命长。采用废锅流程，可副产高压蒸汽。采用干粉气化，氧耗量较低，但需要氮气密封，气化压力不能太高气化炉带废锅结构复杂庞大设备费及专利费均较高。气化由于采用氮气密封及吹送，因而气化产生合成气中惰性组分含量约为，因此对于甲醇合成来说弛放气量要增加。与德士古综合比较，两种气化工艺吨甲醇煤耗相差不大。气化压力最高到，若甲醇合成采用合成压力，则合成新鲜气需要压缩。用气化制甲醇合成气要增加套净化合成气增压机由于变换气进低温甲醇洗净化装置压力低，也造成净化系统投资增加。此外，因合成循环气中惰气高，使合成回路循环压缩机功耗增加不但抬高了压缩机造价，也增加了运行费和生产成本。该技术目前只有国外两套以煤为原料大型装置在运行，用于联合循环发电，工业化经验不多，技术须依赖进口，国内技术支撑率低。国内有六套气化装置正在建设，另有几个项目也签了引进合同。但从实际建设情况看，气化炉供货周期不少于个月，关键设备国产化率低，使得气化装置投资高，建设周期长，国内并无运行经验，因此也加大了投资风险。德士古气化德士古气化技术属于气流床气化技术，是美国德士古公司根据油气化技术思路开送煤粉用氮气输送粒度有效成份较高高净化气中惰性气含量吨甲醇耗煤量干，弛放气氢回收时氧气用量高比炉高较低低工业化装置数多在中国已投产在建工业装置环境影响友好友好有污染治理问题投资含空分较低高比约高较低国产化率高低高项目传统建设周期较短长比炉长半年以上较短气化技术气化技术是荷兰壳牌公司开发种先进气化技术，该技术采用纯氧蒸汽气化，干粉进料，气化温度达，碳转化率，有效气体以上，液态排渣，采用特殊水冷壁气化炉，使用寿命长。采用废锅流程，可副产高压蒸汽。采用干粉气化，氧耗量较低，但需要氮气密封，气化压力不能太高气化炉带废锅结构复杂庞大设备费及专利费均较高。气化由于采用氮气密封及吹送，因而气化产生合成气中惰性组分含量约为，因此对于甲醇合成来说弛放气量要增加。与德士古综合比较，两种气化工艺吨甲醇煤耗相差不大。气化压力最高到，若甲醇合成采用合成压力，则合成新鲜气需要压缩。用气化制甲工业示范装置已