胞菌发酵个小时后,加入天门冬氨酸进行转化,转化时间约为,温度。转化完毕后析出晶体压滤分离,剩下转化液经金属膜超滤分离系统除去菌体,然后活性炭脱色处理,浓缩至半,析出大量丙氨酸结晶,静置过夜使结晶完全,压滤回收晶体,两次压滤得到晶体用少量水洗涤。将滤液和洗涤晶体液体合并后进步浓缩,又析出大量丙氨酸晶体,前面得到粗晶体经离子交换树脂进行纯化晶体用少量水洗涤后抽滤回收,剩下结晶母液中含有少量未转化天门冬氨酸,该母液用于下批酶转化反应。工艺要点发酵过程是在发酵罐上培养假单胞菌,获得高天冬氨酸脱羧酶酶活,以天冬氨酸为底物游离细胞法转化生产丙氨酸。每升培养液可转化天冬氨酸,最高达,摩尔转化率,反应液产生丙氨酸浓度达,绝大部分结晶析出,提取得到丙氨酸,提取收率,产品质量达到美国药典Ⅲ版标准和日本味之素版标准。影响丙氨酸生产因素有菌种,接种量,接种菌龄,培养基,代谢产物,温度,值,通风量,搅拌,泡沫等。菌种目前用于生产丙氨酸菌种主要是德阿昆合假单胞菌。而本产品所用菌种即是该菌种,通过购买形式获得,是目前产酶能力最高菌株。该菌种发酵时间为左右,天门冬氨酸脱羧酶产量高且稳定性好,产生天门冬氨酸脱羧酶为胞内产物,菌体到达稳定期后开始自溶,天门冬氨酸脱羧酶被释放到胞外。德阿昆合假单胞菌及其代谢物安全无毒,不会影响生产人员和环境。接种量般发酵常用接种量为,选择合适接种量对产酶有很大影响。通常,接种量过低,产酶活性不高并使生产周期延长,采用较大接种量可缩短菌体生长达到高峰所需要时间。接种菌龄般以菌种对数生长期后期,即培养液中菌浓度接近高峰时所需要时间为佳,太短则会使前期生长缓慢,延长整个发酵周期太长则会使菌体过早衰退,导致生产能力下降。碳源用于发酵培养基最适碳源是廉价富马酸。但富马酸又是天门冬氨酸脱羧酶酶活抑制剂,所以应控制适当浓度即要保证最大产酶量又要保证不抑制其酶活。氮源可用无机氮,也可用有机氮,二者差别不大。德阿昆合假单胞菌最适氮源为蛋白胨和玉米浆,以蛋白胨效果最好,浓度为时,酶活性最高,但其价格昂贵,所以与玉米浆混合使用效果更好。酶活抑制剂天门冬氨酸脱羧酶酶活抑制剂有乙酰辅酶,氨基丙二酸,丙氨酸,富马酸,马来酸,等。只要培养及中含有定量阻遏物,天门冬氨酸脱羧酶酶活便受到抑制,不利于丙氨酸生成。温度在发酵过程中,菌体生长和酶合成均与温度有密切关系,但两者最适温度往往不相同,般情况下,产酶最适温度低于生长温度。任何微生物都有个适合生长范围。因此,培养初期以及培养过程中值直接影响微生物生长和酶合成。通风量通风量多少应根据培养基中溶解氧而定。般在发酵初期,菌体少,相对通风量可以少些,菌体生长旺盛时耗氧多,通风量要大些,产酶旺盛是需强烈通风。搅拌对于丙氨酸液体深层发酵,除需要通气外,还需要搅拌,以利于热交换营养物质与菌体均匀接触,降低细胞周围代谢产物,从而有利于酶生成,同时也可以打破空气气泡,使发酵液形成湍流,从而提高溶解氧,增加空气利用率。二转化过程在发酵小时后中,反应液产生丙氨酸浓度达,绝大部分结晶析出,分离晶体后发酵中仍含有少量丙氨,其成分并不复杂,并不需要添加助滤剂来降低悬浮液粘度,煮沸杀灭菌体再进行超滤分离,转化液经泵加压后进入金属膜超滤分离系统,丙氨酸透过膜流进清液储罐,而菌丝体蛋白质和固体悬浮颗粒等杂质被截留,将他们热交换器冷却后,送回罐进步浓缩,直至超滤浓缩液呈浆糊状,再用少量水清洗,使滤液渣中残余丙氨酸充分洗涤出来。四转化液再处理提取之前要脱色,首先将发酵液调至,然后加活性碳,在摄氏度热水中保温分钟。然后用压滤泵压滤,连续两次后澄清略带微黄色即可。五发酵液浓缩首先将滤液或离心分离后上清液调到,在条件下浓缩至原体积然后将发酵液温度将至室温,在结晶罐中静止放置小时以上即可进行板框过滤分离到粗丙氨酸晶体。六滤液再处理得到粗丙氨酸晶体晶体用少量水洗涤。将滤液和洗涤晶体液体合并后调节溶液为后可进步浓缩,又析出大量丙氨酸适温度往往不相同,般情况下,产酶最适温度低于生长温度。任何微生物都有个适合生温,在结晶罐中静止放置小时以上即可进行板框过滤分离到粗丙氨酸晶体。六滤液再处理得到粗丙氨酸晶体晶体用少量水洗涤。将滤液和洗涤晶体液体合并后调节溶液为后可进步浓缩,又析出大量丙氨酸适温度往往不相同,般情况下,产酶最适温度低于生长
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